Nr kat. IR089

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Prostate Specific Membrane Antigen
Clone 3E6
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR089
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciała FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Prostate Specific Membrane Antigen, Clone 3E6, Ready-toUse, (Link) są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te
znakują komórki wykazujące ekspresję PSMA w tkankach prawidłowych i nowotworowych i są stosowane do
identyfikacji gruczolakoraków gruczołu krokowego (1-5). Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia lub jego
braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i
powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i
innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
PSMA, PSM’, FOLH, GCP2 (1-7)
Streszczenie
i informacje ogólne
Antygen błonowy gruczołu krokowego (PSMA) to glikoproteina błonowa typu II składająca się z 750
aminokwasów, wykazująca aktywność hydrolazy soli kwasu foliowego i neuropeptydazy. Antygen PSMA jest
zlokalizowany na krótkim ramieniu chromosomu 11. Zidentyfikowano kilka alternatywnych splotów, w tym wariant
cytosolowy PSM’ (3, 6, 7). Ekspresję PSMA wykazują komórki prawidłowego i złośliwego nabłonka gruczołu
krokowego oraz podzbiór tkanek spoza gruczołu krokowego (2-5). Wykazano, Ŝe w przypadku raka gruczołu
krokowego ekspresja PSMA jest związana z postępem choroby i największe poziomy ekspresji zaobserwowano
w hormonoopornym i przerzutowym stadium choroby (2-5). Ekspresję PSMA odnotowano równieŜ w tworzącym
się nowym unaczynieniu róŜnego rodzaju guzów litych nie pochodzących z gruczołu krokowego (3-5, 8).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych
(www.dako.com/IHC-instructions) lub instrukcje do systemu detekcji IHC.
Odczynnik
dostarczony
firmy
Dako
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i azydek sodu w stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: 3E6 (1). Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Preparat z błon komórkowych komórek LNCaP i antygen PSMA oczyszczony metodą powinowactwa
immunologicznego (1).
Swoistość
Monoklonalne przeciwciała mysie przeciwko PSMA reagowały w testach typu Western blot z antygenem PSMA
pochodzącym z lizatu komórek LNCaP, z płynu nasiennego oraz z rekombinowanego PSMA bakulowirusa. Klon
3E6 wiąŜe ponadto odpowiadające PSM’ białko o masie 100 kD w lizatach LNCaP. Klon 3E6 monoklonalnych
przeciwciał przeciwko PSMA rozpoznaje determinantę antygenową obecną w regionie aminokwasów 57–134
pozakomórkowego fragmentu cząsteczki PSMA, co stwierdzono w testach typu Western blot fragmentów PSMA
bakulowirusa (1).
Środki ostroŜności
1.
Do stosowania przez wyszkolony personel.
azydek sodu (NaN3).
Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny w czystej postaci związek chemiczny – 2.
Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie
wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się
azydku metalu w kanalizacji.
Przechowywanie
(123740-001)
3.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5.
Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi.
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Nie nale Ŝy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego
na fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi
zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego
jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole pozytywne i negatywne.
W przypadku uzyskania nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych, i gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
P02769PL_001_IR089/2013.03 str. 1/4
Skrócona instrukcja
uŜytkownika
Krok
Utrwalanie
Obróbka
wstępna
Rozcieńczenie
Bufor
rozcieńczenia
Kontrola
negatywna
Wizualizacja
Komentarze
Formalina
EnVision FLEX™, High pH (nr kat. K8004)
Produkt gotowy do uŜycia
Produkt rozcieńczony fabrycznie
ND
20 min HIER, 3 w 1 z uŜyciem PT
Link i PT Link Rinse Station
Inkubacja 20 min
FLEX Negative Control, Mouse (nr kat. IR750)
Inkubacja 20 min
Barwnik
kontrastowy
Tkanka kontrolna
EnVision™ FLEX, High pH (nr kat.
K8000/K8010)
EnVision™ FLEX Hematoxylin (nr kat.
K8008/K8018)
Gruczoł krokowy
Inkubacja 20 min, inkubacja w
odczynniku DAB+ 2x5 min
Inkubacja 5 min
Szkiełka
FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020)
Zatapianie
preparatu
Wymagane niewodne, trwałe zatapianie
preparatów
Oprzyrządowani
e
Autostainer Link 48 i Autostainer Plus
Odczyn cytoplazmatyczny i/lub
błonowy
Zaleca się stosowanie w celu
uzyskania lepszego przylegania
skrawków tkankowych do szkiełek.
Po przeprowadzeniu barwienia,
skrawki muszą być odwodnione,
oczyszczone i zakryte za pomocą
środka do trwałego zatapiania.
NaleŜy stosować fiolki dostosowane
do aparatu (nr kat. SK200-SK203 i
S3425)
*UŜytkownik jest zobowiązany przeczytać ulotki dostarczane do opakowań, które zawierają dokładne instrukcje
przeprowadzania procedury barwienia i postępowania z produktem.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: przeciwciała mogą być wykorzystywane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie
i zatopionych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości około 4 µm.
Obróbka wstępna: wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych cieplnemu odmaskowaniu determinanty antygenowej (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się po
przeprowadzeniu na tkankach wstępnej obróbki HIER przy uŜyciu rozcieńczonego roztworu EnVision™ FLEX
Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Odparafinowanie, nawodnienie i cieplne
odmaskowanie determinanty antygenowej (HIER) moŜna przeprowadzić z uŜyciem aparatu Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe informacje zawiera instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link (PT Link User Guide).
W aparacie PT Link naleŜy ustawić następujące parametry pomiarowe: temperatura wstępnego ogrzewania:
65°C; temperatura i czas odmaskowania determinanty antygenowej: 97°C przez 20 minut (±1 min); schłodze nie
do 65°C. Usun ąć magazynek na szkiełka z preparatami ze zbiornika PT i natychmiast zanurzyć szkiełka w
naczyniu/zbiorniku (np. PT Link Rinse Station, nr kat. PT109) zawierającym rozcieńczony bufor o temperaturze
pokojowej EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (nr kat. K8007). Zostawić szkiełka w buforze Wash Buffer na 1-5
minut.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Po przeprowadzeniu barwienia, skrawki muszą być
odwodnione, oczyszczone i zatopione w środku do trwałego zatapiania.
Procedura barwienia
Wizualizacja: zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000).
Program: w systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana
objętość uŜytego odczynnika to 1 x 200 µl lub 2 x 150 µl na szkiełko z preparatem. Szczegółowe informacje
dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu
Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer Link, naleŜy skontaktować
się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Instalator oprogramowania Autostainer Link jest dostępny do
pobrania ze strony internetowej www.dako.com\Installer. Uzupełni on oprogramowanie aparatu DakoLink o dane
protokołu i odczynnika dotyczące przeciwciał Anti-Human Prostate Specific Membrane Antigen, Clone 3E6.
Skrócona nazwa protokołu dla tego przeciwciała brzmi „PSMA 3E6”. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy
równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Barwienie kontrastowe: zalecanym barwnikiem kontrastowym jest EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (nr
kat. K8008). W celu uzyskania optymalnych wyników zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do
zatapiania.
Próby kontrolne: równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i
ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Tkankowa kontrola dodatnia powinna obejmować
gruczoł krokowy, a komórki/struktury powinny wykazywać odczyn taki, jak opisany dla tej tkanki w części
„Charakterystyka działania”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja
wybarwienia
Odczyn komórkowy ma charakter cytoplazmatyczny i/lub błonowy.
Charakterystyka
Tkanki prawidłowe:
(123740-001)
P02769PL_001_IR089/2013.03 str. 2/4
działania
Komórki nabłonka gruczołowego gruczołu krokowego wykazują odczyn cytoplazmatyczny i/lub błonowy
umiarkowany do silnego.
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Nadnercza (3)
Szpik kostny (3)
Składniki tkankowe dające
dodatni odczyn
Gruczoły sutkowe
(3)
3/3 komórki nabłonka
gruczołowego (40%), odczyn
cytoplazmatyczy
1/3 komórki zrębowe nerwów
(50%), odczyn
cytoplazmatyczny
MóŜdŜek (3)
0/3
0/3
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Trzustka (3)
Przytarczyce (3)
Przysadka
mózgowa (3)
Gruczoł krokowy
(3)
Składniki tkankowe dające
dodatni odczyn
0/3
2/3 komórki przewodowe
(1%), odczyn
cytoplazmatyczny
0/3
3/3 komórki nabłonka
gruczołowego (60%), odczyn
cytoplazmatyczny i/lub
błonowy
3/3 komórki nabłonka
gruczołowego (4%), odczyn
cytoplazmatyczny
0/3
Mózgowie (3)
0/3
Ślinianki (3)
Szyjka macicy (3)
0/3
Jelito grube (3)
Przełyk (3)
Serce (3)
0/3
0/3
0/3
Mięśnie
szkieletowe
Skóra (3)
Jelito cienkie (3)
Śledziona (3)
Nerki (3)
3/3 komórki kanalików
proksymalnych (75%), odczyn
cytoplazmatyczny
3/3 hepatocyty (15%), odczyn
cytoplazmatyczny
0/3
0/3
śołądek (3)
0/3
0/3
1/3 komórki pęcherzykowe
(10%), odczyn
cytoplazmatyczny; makrofagi
(40%), odczyn
cytoplazmatyczny
0/3
Jądra (3)
0/3
Grasica (3)
Tarczyca (3)
0/3
0/3
0/3
Migdałki (3)
0/3
Macica (3)
3/3 komórki pęcherzykowe
(10%), odczyn
cytoplazmatyczny
1/3 komórki śródbłonka
naczyń (60%), odczyn
cytoplazmatyczny
Wątroba (3)
Płuca (3)
Komórki
międzybłonka (3)
Nerwy obwodowe
(3)
Jajniki (3)
Tkanki nieprawidłowe:
W przypadku raka gruczołu krokowego komórki nabłonka gruczołowego wykazują odczyn cytoplazmatyczny i/lub
błonowy umiarkowany do silnego (92/102) (9).
Piśmiennictwo
(123740-001)
1.
Murphy, GP, Boynton AL, Holmes EH, Tino WT. Monoclonal antibodies specific for the extracellular domain
of prostate-specific membrane antigen. November 21, 2000. United States Patent 6,150,508.
2.
Bostwick DG, Pacelli A, Blute M, Roche P, Murphy GP. Prostate specific membrane antigen expression in
prostatic intraepithelial neoplasia and adenocarcinoma: a study of 184 cases. Cancer 1998; 82:2256-61.
3.
Gregorakis AK, Holmes EH, Murphy GP. Prostate-specific membrane antigen: current and future utility.
Semin Urol Oncol. 1998; 16:2-12 [Review].
4.
Chang SS, Reuter VE, Heston WD, Bander NH, Grauer LS, Gaudin PB. Five different anti-prostate-specific
membrane antigen (PSMA) antibodies confirm PSMA expression in tumor-associated neovasculature.
Cancer Res 1999; 59:3192-8.
5.
Silver DA, Pellicer I, Fair WR, Heston WD, Cordon-Cardo C. Prostate-specific membrane antigen
expression in normal and malignant human tissues. Clin Cancer Res. 1997; 3:81-5.
6.
Carter RE, Feldman AR, Coyle JT. Prostate-specific membrane antigen is a hydrolase with substrate and
pharmacologic characteristics of a neuropeptidase. Proc Natl Acad Sci U S A 1996; 93:749-53.
7.
Su SL, Huang IP, Fair WR, Powell CT, Heston WD. Alternatively spliced variants of prostate specific
membrane antigen RNA: ratio of expression as a potential measurement of progression. Cancer Res 1995;
55:1441-3.
8.
Nielsen GK, Sojka K, Trumbell K, Spaulding B, Welcher R. Immunohistochemical characterization of
prostate specific membrane antigen expression in the vasculature of normal and neoplastic tissues. Modern
Path. 2004; 17:326A.
9.
Mannweiler S, Amersdorfer P, Trajanoski S, Terrett J, King D, Mehes G. Heterogeneity of prostate-specific
membrane antigen (PSMA) expression in prostate carcinoma with distant metastasis. Pathol Oncol Res
P02769PL_001_IR089/2013.03 str. 3/4
2009; 15:167-172.
Wydanie 03/13
(123740-001)
P02769PL_001_IR089/2013.03 str. 4/4