testy skuteczności na campylobacter jejuni

Report
-Effect AHS cleaning
product on
Campylobacter jejuni-
Page 1/4
Date:
12/07/06
Skuteczność działania preparatu myjącego PIP AHS na Campylobacter jejuni
1. Campylobacter jejuni jako chorobotwórcza bakteria
Campylobacter jejuni subskrypcja - jejuni ATCC 33560 - jest bakterią gram-ujemną o budowie falistej, nie
przybierającej formy sporów, która do rozwoju wymaga warunków względnie beztlenowych (6% O2) (Rys 1).
Ten rodzaj mikroorganizmu, podobnie jak reszta z 17 poznanych rodzin szczepu Campylobacter (śrubowca),
jest jednoznacznie chorobotwórczy i powoduje poważne infekcje wśród ludzi i zwierząt. Rodzaj ATCC 33560
został zidentyfikowany w odchodach bydła powodując zapalenie żołądka i jelit. Jest szeroko
rozpowszechniony jako Capyobacter jejuni i znajduje się w pożywieniu zwierząt i układach pokarmowych.
Drób, bydło, trzoda chlewna, owce a nawet skorupiaki stają się "miejscem" zakażeń i infekcji.
Campylobacter jejuni (rodzina śrubowców) uważany jest w świecie zwierząt za główny czynnik powodujący
infekcje układu pokarmowego i związane z tym problemy.
Rys 1. Ewolucja Campylobacter jejuni pod elektronicznym mikroskopem.
Ciepłolubne Campylobacters, Campylobacter jejuni jest odpowiedzialna za spowodowanie 95 % infekcji w
rozwiniętym świecie, a do porównania: Campylobacter coli odpowiedzialna jest za 3-4 % infekcji.
2. Warunki hodowania kultur bakterii
ATCC 33560 jest rodzajem bakterii, która charakteryzuje się łatwością wychodowania w warunkach
laboratoryjnych, przy odpowiednich parametrach umożliwiających wzrost i rozwój tego mikroorganizmu.
Zastosowano:
Mueller Hinton Broth/Agar (Biochemika, Fluka, Bornem, Belgia)
+
Suplement wzrostu śrubowca (Oxoid, Gent, Belgia) (2 % v/v)
+
kropla końskiej krwi (Oxoid, Gent, Belgia) (10 % v/v),
- wszystko to zostało rozcieńczone w 1L wody destylowanej i poddane termo-próżniowej sterylizacji w
autoclawie.
Bakterie śrubowca zostały zaszczepione w płynnym środowisku i zaklimatyzowane w płytkach
laboratoryjnych typu agar. Proces dojrzewania bakterii przebiegał w warunkach inkubacji o temperaturze
37°C, w ciemni, w środowisku względnie beztlenowym - słoje anaerobowe (Anoxomat). Mieszanina gazów w
tych słojach składała się z 6% O2, 7,5 % H2, 4 % CO2 i 82,5 % N2. Po zakończeniu nocnego wylęgu,
czerwonawo- brązowa konsystencja bakterii Śrubowca - Campylobacter ATCC 33560 była dostrzegalna jak
również przyrost samego czynnika bakteryjnego (Rys 2).
Avecom NV, Bloemendalestraat 138, B-8730 Beernem
Tel : +32-(0)50-79.10.26
Fax : +32-(0)50-79.10.30
url: www.avecom.be
E-mail : [email protected]
BTW-nr : BE 454.894.069
Hr Brugge 82052
Rek.nr : KB 472-6060841-69
Report
-Effect AHS cleaning
product on
Campylobacter jejuni-
Page 2/3
Date:
12/07/06
← Rys 2a Wzrost Campylobacter jejuni (Śrubowca) sub. jejuni ATCC 33560
na płytkach anaerobowych typu Mueller Hinton Agar, uzupełnione
suplementem wzrostu Śrubowca oraz kroplą końskiej krwi. Proces nastąpił po
jednolitym zanużeniu zawiesiny materiału szczepiennego na płytce
anaerobowej typu agar uwzględniając czas nocnego wylęgu w warunkach
niskotlenowych. Przyrost czynnika bakteryjnego odbywa się równomiernie na
całej powierzchnii płytki typu agar.
Rys 2b Brak wzrostu
Campylobacter jejuni (Śrubowca) sub. jejuni ATCC 33560 na płytkach
anaerobowych Mueller Hinton Agar z uwzględnieniem tych samych suplementów,
lecz z równoczesnym naniesieniem preparatu PIP AHS. Nie stwierdzono wzrostu
Campylobacter jejuni w środowisku rozwoju śrubowca gdy został użyty w celach
kontrdziałania i zapobiegania preparat PIP AHS. →
← Rys 2c Tłumienie wzrostu Campylobacter
jejuni w środowisku na powierzchni płytki agarmiejsca
wskazane
strzałkami.
Można
zaobserwować miejsce na powierzchni płytki w
którym kropla preparatu PIP AHS wystarczyła,
by
zahamować
przyrost
i
rozwój
Campylobacter jejuni.
3. Zagadnienia i metody badań
Celem tych badań było oszacowanie skuteczności oddziaływania i przeciwdziałania czynnika z udziałem
preparatu PIP AHS, zawierającego żywe bakterie probiotyczne, wobec wzrostu i rozwoju chorobotwórczej
bakterii Śrubowca - Campylobacter jejuni.
Wobec tego skuteczność preparatu PIP AHS przebadano i stwierdzono w środowisku i parametrach wzrostu
śrubowca C.jejuni. Przerost bakterii probiotycznych zawartych w preparacie PIP AHS, w środowisku stałego
wzrostu bakteryjnego, wizualnie zablokował biofilm Śrubowca na powierzchni płytki anaerobowej typu agar.
W celu zmniejszenia objętości samej biomasy probiotycznej, preparat PIP AHS został odfiltrowany i w tej
postaci rozciągnięty na powierzchni płytki w warunkach optimalnych parametrów wzrostu Śrubowca. Dalsza
procedura wyglądała następująco:
-
Dziesięć mililitrów preparatu PIP AHS zostało odfiltrowane przy pomocy sterylnego papieru
filtrującego
Sto microlitrów przefiltrowanej substancji PIP AHS stworzyło powłokę przy użyciu wysterylizowanej
szpatułki, w środowisku parametrów wzrostu Śrubowca (opisanych powyżej)
Avecom NV, Bloemendalestraat 138, B-8730 Beernem
Tel
: +32-(0)50-79.10.26
Fax : +32-(0)50-79.10.30
url
: www.avecom.be E-mail : [email protected]
BTW-nr : BE 454.894.069
Hr Brugge 82052
Rek.nr : KB 472-6060841-69
Report
-Effect AHS cleaning
product on
Campylobacter jejuni-
-
Page 3/3
Date:
12/07/06
Sto mikrolitrów gęstej zawiesiny szczepów Śrubowca zawierającej bakterie ATCC 33560, zostały
rozprowadzone na wierzchu płytki typu agar
Kontrolowano żeby do zawiesiny śrubowca nie dopusczono żadnych innych czynników zewnętrznych,
które mogły by wpłynąć na jego struktórę, którą tworzyło sto mikrolitrów szczepów Śrubowca
zawierających bakterie ATCC 33560
Wszystkie parametry wzrostu bakteryjnego przeszły proces inkubacji w temp. 37°C w piecyku
inkubacyjnym, w warunkach ciemności, w środowisku niskotlenowym (6% tlenu). Przyrost i rozwój
został oszacowany po 24, 48 i 72 godzinach.
Wzrost biofilmu Campylobacter jejuni ATCC 33560 obserwowano wizualnie i oszacowano oraz
porównano z kontrolną próbką oddziałowywania preparatu PIP AHS.
W drugiej fazie badań, skuteczność przefiltrowanego preparatu PIP AHS na strukturę biofilmu Śrubowca i
jego wzrostu, została oszacowana na podstawie kropelki (25 µL) preparatu PIP AHS naniesionej w strefie
środkowej zaszczepionego już środowiska czynników wzrostu bakteryjnego śrubowca według następującej
procedury:
sto mikrolitrów gęstej zawiesiny szczepów Śrubowca, zawierających bakterie ATCC 33560, zostało
naniesionych i rozprowadzonych na powierzchni płytki laboratoryjnej (patrz powyżej)
w obrębie środka powierzchni zawiesiny czynnika chorobotwórczego, umiejscowiono kropelkę (około
25 µL) przefiltrowanego preparatu AHS
wszystkie te czynniki przeszły proces inkubacji w temp. 37°C w piecu inkubacyjnym, w ciemności, w
warunkach niskotlenowych
wzrost biofilmu Campylobacter jejuni ATCC 33560 został wizualnie oszacowany po 24, 48 i 72
godzinach, zarówno w miejscu gdzie użyto preparatu PIP AHS jak i wokół tego miejsca.
4. Wyniki i wnioski
Wyniki badań można zaobserwować na rys. 2 oraz podsumowanie w tabeli 1.
Tabela 1. Wskażniki skuteczności preparatu PIP AHS w środowisku i warunkach wzrostu Śrubowca (płytki anaerobowe
Mueller Hinton + odpowiednie suplementy) w wybranych badawczych metodach, wobec rozwoju i wzrostu biofilmu
Campylobacter jejuni. Prepara tPIP AHS spowodował zatrzymanie wzrostu biofilmu i zniwelowanie bakteryjnego rozwoju
śrubowca - Campylobacter jejuni - oddziaływanie preparatu nastąpiło na powierzchni płytki zaszczepionej szczepami
śrubowca.
Mueller Hinton+ Suplement
Mueller Hinton+ Suplement+AHS
Mueller Hinton+ Suplement+kropla AHS
Biofilm Campylobacter jejuni
Tak
Nie
Dookoła plamki AHS
Wzrost Campylobacter jejuni
Tak
Nie
Brak na obszarze plamki AHS
Campylobacter jejuni jest bakterią strefy zwierzęcej, która powoduje zapalenie żołądka i jelit,
jest odpowiedzialna za spowodowanie 95% infekcji związanych ze śrubowcami w rozwiniętym
świecie. Protokół z badań został sporządzony na podstawie sytuacji wzrostu C. jejuni w
niskotlenowych warunkach. Na powierzchniach płytek anaerobowych typu agar z użyciem
preparatu PIP AHS, zapobieganie czynnikowi chorobotwórczemu przed zaszczepieniem i po
zaszczepieniu płytek laboratoryjnych - iż Campylobacter jejuni nie został zaobserwowany i
stwierdzony. Na tych wynikach badania mogą zostać zakończone, produkt PIP AHS zawiera
komponenty, które hamują rozwój Campylobacter jejuni na powierzchniach zawierających
parametry odżywcze, w normalnych warunkach pobudzające wzrost Campylobacter jejuni.
Prof. Dr. ir. Willy VERSTRAETE
LabMET – UGent
[email protected]
Tel : 09/264.59.76
Dr. ir. Wim De Windt
R&D manager Avecom nv
[email protected]
Tel : 0473/61 46 36
Dr. Robin Temmerman
LabMET-Ugent
[email protected]
Avecom NV, Bloemendalestraat 138, B-8730 Beernem
Tel
: +32-(0)50-79.10.26
Fax : +32-(0)50-79.10.30
url
: www.avecom.be E-mail : [email protected]
BTW-nr : BE 454.894.069
Hr Brugge 82052
Rek.nr : KB 472-6060841-69