Polyclonal Rabbit Anti-Human Carcinoembryonic Antigen

Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Carcinoembryonic Antigen
Nr kat. A 0115
Wydanie 15.08.03
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Polyclonal Rabbit Anti-Human Carcinoembryonic Antigen (CEA) jest przeznaczone do immunocytochemii.
Przeciwciało wiąże się z komórkami wykazującymi ekspresję CEA i białek CEA-like i może wspomagać
identyfikację genezy tkankowej guzów nabłonkowych wielu kategorii morfologicznych (1-5). Diagnostyka
różnicowa opiera się na badaniu zestawem przeciwciał, a Interpretacji wyników może dokonywać osoba
wykwalifikowana, w kontekście wywiadu chorobowego i innych badań diagnostycznych.
Wprowadzenie
Rodzina CEA składa się z dwóch zasadniczych grup antygenów: jedna z nich to CEACAM (CEA-related cell
adhesion molecule: związane z CEA cząsteczki adhezyjne), druga to grupa PSG (pregnancy-specific
glycoprotein: glikoproteina swoista dla ciąży). Cząsteczki zaliczane do CEACAM to ( w nawiasach podano
poprzednio używane nazwy): CEACAM1 (biliary glycoprotein, BGP1, TM-CEA, CD66a); CEACAM3 (członek
rodziny genów CEA 1, CGM1, CD66d); CEACAM4 (członek rodziny genów CEA 7, CGM7); CEA
(carcinoembryonic antygen = antygen karcinoembrionalny, CEA CD66e); CEACAM6 (non-specific crossreacting antigen = nieswoisty antygen reagujący krzyżowo, NCA, NCA-50/90, CD66c); CEACAM7 (członek
rodziny genów CEA 2, CGM2); CEACAM8 (CEA, członek rodziny genów CEA 6, CGM6, CD67, CD66b) (6, 7).
Podobieństwo antygenowe pomiędzy białkami grupy CEACAM jest znaczne (7).
Odczynnik dostarczony
Oczyszczona frakcja globulinowa surowicy króliczej, w formie płynnej. Zawiera 0,1 mol/L NaCl, 15 mmol/L
NaN3, pH 7,2.
Stężenie białka g/L: patrz etykietka na fiolce.
Różnice w mianie pomiędzy poszczególnymi seriami A 0115 nie przekraczają 10%,
co potwierdzono w
pojedynczej dyfuzji radialnej. Uzyskano to dzięki doprowadzaniu miana każdej serii do stałej wartości próby
referencyjnej, przechowywanej w temp. -80oC.
Immunogen
Ludzki antygen karcinoembrionalny izolowany z przerzutów raka jelita grubego do wątroby.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z ludzkim antygenem karcinoembrionalnym i podobnymi do niego białkami, na przykład
CEACAM1 i CEACAM6.
Ślady zanieczyszczających przeciwciał zostały usunięte przez adsorbcję w fazie stałej z białkami surowicy
ludzkiej i z substancjami grupowymi krwi A i B.
Swoistość przeciwciała została potwierdzona następująco:
Immunoelektroforeza krzyżowa: W immunoelektroforezie krzyżowej z użyciem 12.5 μL przeciwciała A 0062 na
cm2 żelu po rozdzieleniu ekstraktu (wykonanego kwasem nadchlorowym) z przerzutów raka jelita grubego do
wątroby powstają tylko łuki precypitacyjne, odpowiadający CEA i białkom CEA-like. Nie obserwowano reakcji z
2 μL normalnej ludzkiej surowicy. Barwienie: Coomassie Brilliant Blue.
ELISA: W teście immunoenzymatycznym z użyciem podwójnych przeciwciał nie wykazano reakcji z ludzką
surowicą pozbawioną CEA.
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Nie ma
wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi
powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez zmiany procedur
laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być zastosowane do znakowania tkanki utrwalonej w formalinie i
zatopionej w parafinie. Zalecane jest wstępne trawienie tkanki nr kat. S 3020. Nieco gorsze wyniki uzyskiwano
przy odsłonięciu epitopów przez ogrzewanie z użyciem Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, Dako
Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308, Dako Target Retrieval Solution, o pH 9.0, nr kat. S 2368, i w
buforze cytrynianowym, 10 mmol/L, o pH 6.0. Skrawki tkankowe nie powinny wysychać podczas odsłaniania
epitopów ani podczas barwienia.
Skrawki mrożone I preparaty komórkowe:: Przeciwciało może być stosowane do barwień na skrawkach
mrożonych i preparatach komórkowych (4).
(106739-003)
A 0115/PL/AI/15.08.03 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Procedura barwienia
Rozcieńczenie: Polyclonal Rabbit Anti-Human Carcinoembryonic Antigen (CEA), nr kat. A 0115 może być
używane w zakresie rozcieńczeń 1:200-1:400, gdy się go używa na skrawki ludzkich tkanek utrwalane
formaliną i zatapiane w parafinie, stosując 5-cio minutowe proteolityczne odsłanianie epitopów proteinazą K
Dako Proteinase K, nr kat. S 3020, i 30 min. inkubację z pierwszym przeciwciałem w tepmeraturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się różnić zależnie od próbki i metod jej przygotowania, i powinny zostać dobrane w
każdym laboratorium. Zalecaną kontrolą negatywną jest Dako Rabbit Immunoglobulin Fraction (adsorbowana w
fazie stałej), nr kat. X 0936, rozcieńczona do takiego samego stężenia białka jak roztwór pierwszego przeciwciała.
Jeśli nie udowodniono trwałości przeciwciała w danej metodzie, zaleca się rozcieńczanie go tuż przed użyciem
lub rozcieńczanie w Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809.
Uwidocznienie: Zalecane są zestawy odczynnikowe DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679, oraz zestaw
DAKO EnVision™+/HRP, nr kat. K 4008 i K 4010. Procedura wykonania jest opisana w każdym z zestawów.
Automatyzacja: przeciwciało nadaję się do zastosowania w automatycznym urządzeniu do barwienia
immunohistochemicznego, na przykład Dako Autostainer.
Opis wyników
Komórki wybarwione przeciwciałem wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia. W skrawkach z prawidłowego
jelita grubego barwi się silnie błona od strony światła jelita i część podstawna komórek. W raku jelita grubego
dodatnia reakcja jest rozproszona w cytoplazmie i w świetle gruczołów (8).
Normalne tkanki: Przeciwciało znakuje komórki nabłonkowe jelita, oskrzeli i pęcherzyków płuc, a także
makrofagi pęcherzykowe w płucach, granulocyty segmentowane i makrofagi śledziony, powierzchniowe
warstwy nabłonka i komórki wydzielnicze żołądka. W wątrobie barwią się głównie kanaliki żółciowe (8).
Tkanki patologiczne: Spośród raków gruczołowych przewodu pokarmowego , trzustki I przewodów żółciowych,
przeciwciało barwiło 10/10 z przełyku i żołądka, 13/13 jelita grubego i odbytnicy, 2/3 trzustki i 5/6 przewodów
żółciowych. Spośród raków spoza przewodu pokarmowego barwiło się 7/7 z płuc, 0/5 z jajnika (typ surowiczy), 2/2
z jajnika (typ śluzowy), 0/11 z pęcherza moczowego (komórki przejściowe) i 1/1 z pęcherza (adenocarcinoma).
Dodatkowo przeciwciało barwiło 33/42 raki sutka i 6/14 raków prostaty, 1/6 carcinoids i 6/12 raków pierwotnych
wątroby (1). W badaniach nowotworów złośliwych wątroby, przeciwciało razem z Dako Anti-Hepatocyte, Clone
OCH1E5, i Anti-Epithelial-Related Antigen, Clone MOC-31, pozwoliło prawidłowo zaklasyfikować 99/100
przypadków, wśród nich 25 raków hepatocelularnych, 75 cholangiomas i raków przerzutowych (2). Stworzono
także immunoprofile wysoce swoiste dla gruczolakoraków szyjki macicy i endometrium, zawierające barwienie
anty-CEA, nr kat. A 0115. Większość nowotworów wykazywała jednak pośredni, nie całkiem swoisty
immunofenotyp (3). W czerniaku złośliwym obserwowano plamkowe, głównie błonowe barwienie w około 70%
przypadków (5).
Literatura
1.
Sheahan K, O'Brien MJ, Burke B, Dervan PA, O'Keane JC, Gottlieb LS, et al. Differential reactivities of
carcinoembryonic antigen (CEA) and CEA-related monoclonal and polyclonal antibodies in common
epithelial malignancies. Am J Clin Pathol 1990;94:157-64.
2.
Morrison C, Marsh W, Frankel WL. A comparison of CD10 to pCEA, MOC-31, and hepatocyte for the
distinction of malignant tumors in the liver. Mod Pathol 2002;15:1279-87.
3.
Alkushi A, Irving J, Hsu F, Dupuis B, Liu CL, Rijn M, et al. Immunoprofile of cervical and endometrial
adenocarcinomas using a tissue array. Virchows Arch 2003;442:271-7.
4.
Shield PW, Perkins G, Wright RG. Immunocytochemical staining of cytologic specimens. How helpful is
it? Am J Clin Pathol 1996;105:157-62.
5.
Sanders DSA, Evans AT, Allen CA, Bryant FJ, Johnson GD, Hopkins J, et al. Classification of CEA-related
positivity in primary and metastatic malignant melanoma. J Pathol 1994;172:343-8.
6.
Beauchemin N, Draber P, Dveksler G, Gold P, Gray-Owen S, Grunert F, et al. Nomenclature announcement.
Redefined nomenclature for members of carcinoembryonic antigen family. Exp Cell Res 1999;252:243-9.
7.
Skubitz KM, Micklem K, van der Schoot E. M14. CD66 and CD67 cluster workshop report. In: Knapp W,
Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25;
Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. Volume 1 p. 889-99.
8.
Nap M, Hoor KAT, Fleuren GJ. Cross-reactivity with normal antigens in commercial anti-CEA sera, used for
immunohistology. The need for tissue controls and absorptions. Am J Clin Pathol 1983;79:25-31.
Objaśnienia symboli
(106739-003)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
A 0115/PL/AI/15.08.03 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17