Monoclonal Mouse Anti-Human Calretinin Clone DAK

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Calretinin
Clone DAK Calret 1
Nr kat. M 7245
Wydanie z 20.01.03
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Calretinin, Clone DAK Calret 1, jest przeznaczone do badań
immunocytochemicznych. Ekspresję kalretyniny odnotowuje się zarówno w zdrowych jak i w zmienionych
nowotworowo komórkach mezotelialnych. Jest ona przydatnym markerem złośliwych międzybłoniaków typu
nabłonkowego oraz jest wykorzystywana do różnicowania tych zmian złośliwych z przerzutami gruczolakoraka
płuca (1-3). Identyfikacja różnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu przeciwciał. Interpretację powinien
przeprowadzić wykwalifikowany patolog w oparciu o historię choroby pacjenta oraz inne badania
diagnostyczne.
Wstęp
Kalretynina została po raz pierwszy zidentyfikowana poprzez sklonowanie cDNA pochodzącego z kurzej
siatkówki. Należy do nadrodziny białek wiążących wapń (ang. Calcium-binding proteins – CaBP), do której
należą również kalbindyna, parwalbumina oraz kalmodulina. Rodzina ta jest charakteryzowana sekwencją
aminokwasów, która zwija się w strukturę helisa – pętla – helisa tworzącą domenę wiążącą wapń (przedziały
palców-EF) (4). U ludzi cząsteczkowa masa kalretyniny wynosi 32 kDa a białko zawiera pięć miejsc wiążących
jony Ca2+ (5). Dużą ekspresję kalretyniny wykazują tkanki centralnego i obwodowego układu nerwowego, a
konkretnie siatkówka oraz neurony dróg czuciowych (5). Zaproponowano hipotezę, że kalretynina odgrywa
ważną rolę w przeżyciu komórek nerwowych przy zaburzeniach homeostazy wapniowej, ze względu na jej
możliwości buforowe (6). Odkrycie kalretyniny w komórkach wytwarzających adrogeny prowadzi do sugestii, że
ekspresja białka może być związana w wydzielaniem związków steroidowych (7).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
dializowany wobec 0,05 mol/L roztworu Tris/HCl o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: DAK Calret 1. Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiej IgG: zob. informację podaną na etykiecie fiolki.
Immunogen
Z linii komórkowej ludzkiego złośliwego międzybłoniaka, Mero-41 (8,9), gen kodujący kalretyninę został
amplifikowany w reakcji PCR, a jego ekspresja jest wyrażona jako zrekombinowane białko u E. Coli.
Oczyszczone białko zostało użyte do immunizacji.
Swoistość
Przeciwciało swoiście znakuje kalretyninę w immunocytochemii.
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
właściwe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8°C. Nie używać po dacie ważności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są
przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te warunki. Nie ma
oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek
pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór barwienia, którego
nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że przyczyną może być
problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy Technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować do znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie,
zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą proteinazy K lub
odzyskiwania epitopu wzbudzanego temperaturą. Optymalne wyniki wzbudzanego temperaturą odzyskiwania
epitopu uzyskuje się stosując Dako Target Retrieval Solution, o wysokim pH, nr kat. S 3308, lub 10 mmol/L
buforu Tris, 1 mmol/L EDTA, o pH 9,0. Gorsze wyniki daje stosowanie Dako Target Retrieval Solution, nr kat.
S 1700, lub 10 mmol/L buforu cytrynianowego o pH 6,0. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki
podczas przygotowania lub następującej po nim procedury barwienia immunocytochemicznego.
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciało Mouse Anti-Human Calretinin, nr kat. M 7245, można stosować w rozcieńczeniu w
stosunku 1:50-1:100 podczas stosowania na skrawkach międzybłoniaków utrwalonych w formalinie i
zatopionych w parafinie, stosując wzbudzane temperaturą odzyskiwanie epitopu w roztworze buforu Tris
10 mmol/L oraz 1 mmol/L EDTA o pH 9,0 przez 20 minut oraz inkubację w temperaturze pokojowej z
pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od próbki i
metody przygotowania i powinny być określone przez każde z poszczególnych laboratoriów. Zalecaną kontrolą
ujemną jest produkt Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczony do takiego samego stężenia mysiej IgG
(107650-002)
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark
M 7245/PL/COS/20.01.03 p. 1/2
· Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
jak pierwsze przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona
podczas rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed
użyciem lub rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Kontrolę dodatnią i ujemną
należy wykonać jednocześnie z testem próbki pacjenta.
Uwidocznienie: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 oraz K 4006. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do
wybranego zestawu uwidaczniania.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunocytochemicznego przy wykorzystaniu
platform zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują zarówno wzór barwienia cytoplazmatycznego jak i wzór barwienia
jądrowego.
Tkanki zdrowe: Przeciwciało znakuje zdrowe komórki mezotelialne, komórki nerwowe oraz siateczkowate
komórki okrężnicy. Przy badaniu innych zdrowych tkanek nie zaobserwowano wybarwienia nabłonka
jednowarstwowego płaskiego, tkanek nerek, wątroby, trzustki prostaty czy migdałków.
Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakuje międzybłoniaka, natomiast gruczolakorak płuca i okrężnicy, czerniak
złośliwy, rak gruczołu sutkowego oraz grasicy dają barwienie ujemne.
Piśmiennictwo
1. Barberis MCP, Faleri M, Veronese S, Casadio C, Viale G. Calretinin. A selective marker of normal and
neoplastic mesothelial cells in serous effusions. Acta Cytol 1997;41:1757-61.
2. Gotzos V, Vogt P, Celio MR. The calcium binding protein calretinin is a selective marker for malignant
pleural mesotheliomas of the epithelial type. Path Res Pract. 1996;192:137-47.
3. Cury PM, Butcher DN, Fisher C, Corrin B, Nicholson AG. Value of the mesothelium-associated antibodies
thrombomodulin, cytokeratin 5/6, calretinin, and CD44H in distinguishing epithelioid pleural mesothelioma
from adenocarcinoma metastatic to the pleura. Mod Pathol 2000;13:107-12.
4. Rogers JH. Calretinin: a gene for a novel calcium-binding protein expressed principally in neurons. J Cell
Biol 1987;105:1343-53.
5. Pochet R, Blachier F, Malaisse W, Parmentier M, Pasteels B, Pohl V, et al. Calbindin-D28 in mammalian
brain, retina, and endocrine pancreas: immunohistochemical comparison with calretinin. Adv Exp Med Biol
1989;255:435-43.
6. Lukas W, Jones KA. Cortical neurons containing calretinin are selectively resistant to calcium overload and
exitotoxicity in vitro. Neuroscience 1994;61:307-16.
7. Bertschy S, Genton CY, Gotzos V. Selective immunocytochemical localisation of calretinin in the human
ovary. Histochem Cell Biol 1998;109:59-66.
8. Versnel MA, Bouts MJ, Hoogsteden HC, van der Kwast TH, Delahaye M, Hagemeijer A. Establishment of
human malignant mesothelioma cell lines. Int J Cancer 1989;44:256-60.
9. Versnel MA, Hoogsteden HC, Hagemeijer A, Bouts MJ, van der Kwast TH, Delahaye M, et al.
Characterization of three human malignant mesothelioma cell lines. Cancer Genet Cytogenet 1989;42:11528.
Objaśnienia symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
(107650-002)
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark
Producent
M 7245/PL/COS/20.01.03 p. 2/2
· Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17