Pracownia biochemii

Pracownia biochemii
Wydział Chemii UW
Ćwiczenie 2: Lecytyny i cholesterol z żółtka jaja kurzego – izolacja i wykrywanie
Izolacja lecytyny
Dokładnie oddzielić żółtko od białka i zalać je w zlewce 75 cm 3 mieszaniny etanol – eter dietylowy
(2:1, v/v). Rozmieszać żółtko szklaną bagietką i pozostawić mieszaninę w temperaturze pokojowej
na ok. 10 min., od czasu do czasu mieszając. Mieszaninę odsączyć na sączku karbowanym do
suchej kolby kulistej a przesącz odparować na wyparce (temperatura łaźni nie przekraczająca
50oC). Żółtą mazistą pozostałość rozpuścić w 10 cm3 eteru dietylowego. Otrzymany roztwór
wkroplić powoli, mieszając, do zlewki zawierającej 30 cm3 acetonu. Wytrącony osad surowych
lecytyn odsączyć na sączku karbowanym. Niewielką część osadu przenieść do probówki
eppendorfa i zachować do analizy chromatograficznej. Pozostały osad rozpuścić w 20 cm3 etanolu i
dodać 20 cm3 nasyconego etanolowego roztworu CdCl2 – wytrąca się trwały, krystaliczny związek
addycyjny lecytyny z chlorkiem kadmu. Po paru minutach osad odsączyć.
Przesącz po wydzieleniu lecytyn odparować na wyparce (temperatura łaźni nie przekraczająca
50oC) a pozostałość zachować do analizy chromatograficznej.
Chromatografia cienkowarstwowa
Niewielkie próbki surowego ekstraktu lecytyn, kompleksu lecytyn z chlorkiem kadmu, pozostałości
lipidów po wydzieleniu lecytyn oraz wzorca cholesterolu rozpuścić w chloroformie i nanieść
kapilarą na płytkę chromatograficzną pokrytą żelem krzemionkowym. Płytki rozwinąć w dwóch
układach: chloroform – metanol – woda (65:25:4) oraz toluen – octan etylu (7:3). Chromatogramy
po rozwinięciu wysuszyć i wywołać w następujący sposób:
a)
spryskać 0.1% roztworem ninhydryny w etanolu i wstawić na parę minut do suszarki o temp.
120oC,
b) spryskać 1% roztworem jodu w metanolu lub wstawić na kilka minut do komory z jodem,
c)
spryskać 5% roztworem kwasu siarkowego w etanolu i wstawić na kilka minut do suszarki o
temp. 120oC.
Opis ćwiczenia powinien zawierać:
1. opis procesu izolacji wraz z krótkim uzasadnieniem wykonywania poszczególnych etapów
2. wyniki, analizę i wnioski z chromatografii cienkowarstwowej.