Dako AEC+ High Sensitivity Substrate Chromogen Gotowy

Dako
AEC+ High Sensitivity
Substrate Chromogen
Gotowy do uŜytku
Nr katalogowy K3461 15 mL
Nr katalogowy K3469 110 mL
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Niniejszy system substratu-chromogenu jest wysoce czułym AEC odpowiednim do uŜycia przy
immunohistochemicznych (IHC) metodach barwienia opartych na peroksydazie oraz przy metodach barwienia
hybrydyzacji in situ (ISH). Po utlenieniu, AEC tworzy produkt końcowy o czerwonym zabarwieniu w miejscu
docelowego antygenu lub kwasu nukleinowego.
Substrat-chromogen jest szczególnie uŜyteczny w zastosowaniach wymagających wysokiej czułości. AEC+
moŜe być uŜywany z zestawem LSAB®+/HRP lub z podobnymi systemami detekcji opartymi na peroksydazie.
Zobacz dokument Dako’s Ogólne Wskazówki Barwienia Immunohistochemicznego lub następujące części
instrukcji dla systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola jakości,
7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Odczynniki
dostarczane
Nr katalogowy K3464:
Zawiera 15 mL gotowego do uŜycia roztworu Substrate-Chromogen. Objętość ta wystarcza do wybarwienia
minimum 50 skrawków tkankowych.
Opis
Ilość
AEC+ Substrate-Chromogen
1x15 mL
3-amino-9-etylokarbazol zawierający nadtlenek wodoru, utrwalacze, środki wzmacniające i
środek przeciwbakteryjny.
Nr katalogowy K3469:
Zawiera 110 mL gotowego do uŜycia roztworu Substrate-Chromogen. Objętość ta wystarcza do
wybarwienia minimum 500 skrawków tkankowych.
Ilość
1x110mL
Środki ostroŜności
(127973-001)
Opis
AEC+ Substrate-Chromogen
3-amino-9-etylokarbazol zawierający nadtlenek wodoru, utrwalacze, środki wzmacniające i
środek przeciwbakteryjny.
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt AEC+ Substrate-Chromogen jest wraŜliwy na kontaminację przez szereg czynników utleniających
takich jak metale, bakterie, kurz oraz powszechnie uŜywane szklane naczynia laboratoryjne. W celu
uniknięcia kontaminacji i przedwczesnego wyparowania naleŜy unikać wystawiania roztworu AEC+ na
jakiekolwiek potencjalne źródło kontaminacji.
3. W celu uniknięcia skaŜenia nigdy nie pipetować bezpośrednio z butelki. Bez usuwania końcówki, odmierzyć
Ŝądaną ilość do czystego pojemnika i pipetować z niego. Nie wlewać z powrotem niewykorzystanego
roztworu AEC+ do pierwotnego pojemnika.
4. Nie przechowywać roztworu AEC+, ani prowadzić barwienia w silnym oświetleniu, takim jak bezpośrednie
światło słoneczne.
5. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
6. Niewykorzystany roztwórutylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
7. Na Ŝądanie dostępne są karty charakterystyki bezpieczeństwa materiału.
Niebezpieczeństwo
AEC+ Substrate-Chromogen: 5-10% Polyethylene glycol, 1-5% N-metylo-2-pirolidon, 0.1-1% kwas
octowy, 0.1-1% 3-amino-9-ethyl carbazole
H320
Wywołuje podraŜnienie oczu.
H350
MoŜe powodować raka.
P201
Przed uŜyciem zapoznać się ze specjalnymi środkami ostroŜności.
P202
Nie uŜywać przed zapoznaniem się i zrozumieniem wszystkich środków bezpieczeństwa.
P281
Stosować wymagane środki ochrony indywidualnej.
P280
Stosować ochronę oczu lub twarzy.
P264
Dokładnie umyć ręce po uŜyciu.
P308 + P313
W PRZYPADKU naraŜenia lub styczności: Zwrócić się o pomoc lekarską.
P305 + P351 +
W PRZYPADKU DOSTANIA SIĘ DO OCZU: OstroŜnie płukać wodą przez kilka minut.
P338
Wyjąć soczewki kontaktowe, jeŜeli są i moŜna je łatwo usunąć. Nadal płukać.
P04246PL_01/K3461_K3469/2015.07 s. 1/3
P337 + P313
P405
P501
Przechowywanie
Jeśli podraŜnienie oczu się utrzymuje: Zgłosić się do lekarza po poradę.
Przechowywać pod zamknięciem.
Zawartość i pojemnik usuwać zgodnie z lokalnymi, regionalnymi, krajowymi i
międzynarodowymi przepisami.
Przechowywać roztwór AEC+ w temperaturze 2–8°C.
PRZECHOWYWANIE W TEMPERATURZE POWYśEJ 8°C WPŁYWA NIEKORZYSTNIE NA STABILNO ŚĆ
PRODUKTU AEC+ SUBSTRAT-CHROMOGEN. DLA WYGODY, AEC+ SUBSTRATE-CHROMOGEN MOśE
BYĆ UśYTY NIEZWŁOCZNIE PO WYJĘCIU Z LODÓWKI I NIE MUSI BYĆ OGRZEWANY DO
TEMPERATURY POKOJOWEJ PRZED UśYCIEM. PO UśYCIU NALEśY DALEJ PRZECHOWYWAĆ W
TEMPERATURZE 2–8°C.
Brak oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktów. Dlatego teŜ naleŜy jednocześnie testować
kontrole dodatnie i ujemne podczas badania próbek pacjenta. W razie wystąpienia nieoczekiwanego
barwienia, którego nie moŜna wytłumaczyć róŜnicami w procedurach laboratoryjnych i podekjrzeniu, Ŝe
przyczyną mogą być komponenty zestawu, prosimy o kontakt z Działem Wsparcia Technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
odczynników
Gotowy do uŜytku
Postępowanie
W przypadku barwienia metodą IHC oraz ISH, po inkubacji z odczynnikiem HRP, próbki naleŜy umieścić w
łaźni wodnej. Strząsnąć nadmiar buforu ze szkiełka i ostroŜnie je wytrzeć dookoła próbki.
1. Pokryć próbkę gotowym do uŜycia roztworem AEC+. Inkubować przez 5–30 minut. W razie potrzeby
inkubację z produktem AEC+ Substrate-Chromogen moŜna przeprowadzać w wyŜszej temperaturze niŜ
temperatura pokojowa.
2. Delikatnie opłukać wodą destylowaną.
3. W razie potrzeby wykonać barwienie negatywne.
4. Przykryć szkiełkami nakrywkowymi przy pomocy wodnych środków mocujących.
Przy korzystaniu z metody odstępu kapilary naleŜy wziąć pod uwagę następujące zalecenia:
1. Nie jest konieczne dodawanie detergentów w celu obniŜenia napięcia powierzchniowego.
2. Sporządzić roztwór DAB+ Substrate-Chromogen na 20–30 sekund i osuszyć roztwór przynajmniej
dwukrotnie przed inkubacją przez okres 5–30 minut.
Wyniki
W wyniku procedur IHC oraz ISH, produkt AEC+ Substrate-Chromogen wytwarza czerwony produkt końcowy
w miejscu docelowego antygenu lub kwasu nukleinowego.
W celu dokonania prawidłowej interpretacji naleŜy wykonywać kontrolę ujemną jak i dodatnią przy kaŜdym
barwieniu. Kontrola dodatnia słuŜy jako wskaźnik prawidłowego wykonania obróbki próbki i prawidłowego się z
nią obchodzenia. Kontrole ujemne są przydatne do oceny nieswoistego barwienia. Nieswoiste barwienie, jeŜeli
obecne, ma rozmyty charakter.
Ograniczenia
Endogenna aktywność peroksydazowa i pseudoperksydazowa wykazana dla hemoglobiny, mioglobiny,
cytochromu i katalazy oraz neutrofilów, monocytów i eozynofilów, moŜe dawać wyniki fałszywie dodatnie. 1, W
tkance utrwalonej formaliną aktywność ta moŜe zostać zahamowana poprzez inkubację tkanki w 3% nadtlenku
wodoru na pięć minut przed zastosowaniem pierwszego przeciwciała lub sondy. Rozmazy krwi i szpiku
kostnego mogą być poddane działaniu Peroxidase Blocking Reagent (Nr katalogowy S2001). JednakŜe to
postępowanie nie eliminuje czerwonawo-brązowego zabarwienia hemoprotein . MoŜna uŜyć takŜe roztworu
metanolu i nadtlenku wodoru. JednakŜe, w trakcie tej procedury niektóre antygeny mogą ulec denaturacji.
AEC tworzy produkt końcowy rozpuszczalny w związkach organicznych. Dlatego konieczne jest uŜywanie
niealkoholowych barwników kontrastowych takich jak, hematoksylina Mayer'a lub Gill'a i środka mocującego
na bazie wody takiego jak, Glycergel® Mounting Medium (Nr katalogowy C0563) or Faramount, Aqueous
Mounting Medium gotowe do uŜycia (Nr. katalogowy S3025) lub Ultramount (Nr katalogowy S1964).
Intensywność czerwonego zabarwienia produktu końcowego moŜe ulec zmniejszeniu po długotrwałym
przechowywaniu, co jest typowe dla AEC, szczególnie, jeśli jest wystawiony na działanie światła.
Piśmiennictwo
(127973-001)
1. Elias JM, et al. Endogenous peroxidase activity in human cutaneous and adenoidal mast cells. Biotech
& Histochem 1987; 35:213
2. Elias JM. Immunohistopathology: A practical approach to diagnosis. Chicago: American Society of Clinical
Pathologists Press 1990; 46
P04246PL_01/K3461_K3469/2015.07 s. 2/3
Edition 07/15
(127973-001)
P04246PL_01/K3461_K3469/2015.07 s. 3/3