Monoclonal Mouse Anti-Human Melanosome Klon HMB45

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Melanosome
Klon HMB45
Nr kat. M0634
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Mysie przeciwciała monoklonalne skierowane przeciwko ludzkim melanosomom, klon HMB45, są przeznaczone do laboratoryjnej
identyfikacji jakościowej melanocytów, wykazujących tworzenie niedojrzałych melanosomów w preparatach tkanek prawidłowych i
patologicznych zatapianych w parafinie, przy uŜyciu mikroskopii świetlnej i metod immunohistochemicznych (IHC). Dodatnie wyniki testu
stosuje się w klasyfikacji czerniaków i zmian barwnikowych oraz w róŜnicowaniu przerzutów czerniaków bezbarwnikowych od innych
niskozróŜnicowanych nowotworów o nieznanym pochodzeniu. Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu powinna być
uzupełniona przez badania morfologiczne i histologiczne oraz wykonywanie odpowiednich prób kontrolnych. Ocena wyniku musi przebiegać
z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i wyników innych badań diagnostycznych przez wykwalifikowanego patologa.
Streszczenie i informacje ogólne
Obecność antygenu HMB45 oznacza występowanie aktywnego tworzenia melanosomów i tym samym róŜnicowania komórek
barwnikowych.5 Antygen występuje równieŜ w prawidłowych płodowych melanocytach 2.3, natomiast nie stwierdza się go w prawidłowych
ludzkich melanocytach w fazie spoczynku, niezaleŜnie od stopnia pigmentacji.1,3,6 Po aktywacji dojrzałe melanocyty mogą ponownie
wykazywać ekspresję HMB45, stwierdzanego w melanocytach płodowych. Tego typu melanocyty mogą być aktywowane przez róŜnorodne
bodźce. Na przykład komórki wykazujące obecność antygenu HMB45 wykryto w tkance pokrywającej ziarninę i tkankach sąsiednich,
naczyniakach krwionośnych, guzach podścieliska o bogatym unaczynieniu oraz rakach podstawnokomórkowych.5-8 Niekiedy mieszki
włosowe wykazują dodatni odczyn wywołany obecnością melanocytów w fazie pobudzenia.1 Dodatni odczyn z HMB45 nie występował w
przypadku melanocytów znajdujących się w obrębie plam soczewicowatych lub leŜących w obrębie naskórka ponad rozrostami
fibroblastycznymi, np. bliznowcach, włókniakach skóry oraz starych włókniejących naczyniakach krwionośnych.8 Prawidłowe tkanki
niezawierające melanocytów nie reagują z przeciwciałami HMB45.
Patrz dokument: „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące fragmenty instrukcji
systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie,
4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia,
9) Ograniczenia metody.
Dostarczony odczynnik
Mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci nadsączu hodowli komórkowej w buforze Tris/HCl o stęŜeniu 0,05 mol/L i
pH 7,2, zawierającym azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L. Produkt zawiera białko stabilizujące.
Izotyp: IgG1, kappa
Klon: HMB451
StęŜenie mysich IgG [mg/L]: Patrz: informacja podana na etykiecie fiolki.
Preparat M0634 moŜe być uŜywany w rozcieńczeniu 1:50 w IHC z zastosowaniem systemów detekcji EnVision™, EnVision™ Doublestain
lub LSAB™2. Są to jednak wyłącznie wytyczne. Optymalne stęŜenia przeciwciała mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i
sposobu jego przygotowania, i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium.
StęŜenie białek w róŜnych partiach moŜe się róŜnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. W celu zapewnienia jednolitości odczynów
immunohistochemicznych wykonywanych przy uŜyciu róŜnych partii produktu, miano kaŜdej partii jest porównywane i dostosowywane do
partii referencyjnej.
Immunogen
Wyciąg przerzutów czerniaka pigmentowanego do węzłów chłonnych.
Swoistość
Wykazano, Ŝe przeciwciała przeciwko melanosomom (HMB45) reagują z segmentem sialowanego glikokoniugatu podatnego na działanie
neuraminidazy, o masie 10 kD, występującego w premelanosomach i młodych (niedojrzałych) melanosomach.2-4
Materiały wymagane, ale niedostarczane
Zobacz Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako i/lub instrukcje do systemu detekcji. Zalecany
rozcieńczalnik do stosowania przy odczynach IHC:
Antibody Diluent (nr kat. S0809)
Zalecana ujemna kontrola odczynów IHC:
Mysie IgG1 (nr kat. X0931)
(122026-001)
303299PL_002 str. 1/3
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w
produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład
instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynników naleŜy uŜywać
duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydku metali w instalacji kanalizacyjnej.9
3. Jak w przypadku kaŜdego materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury obchodzenia się z nim.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą, naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystane odczynniki naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Nie u Ŝywać po upływie daty waŜności podanej na fiolce. JeŜeli odczynniki są przechowywane
w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, uŜytkownik powinien je zweryfikować.10 Nie ma jednoznacznych
oznak niestabilności produktu. Dlatego, równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i
ujemne próby kontrolne. JeŜeli zaobserwuje się nieoczekiwane barwienie, którego nie moŜna wyjaśnić odchyleniami w procedurach
laboratoryjnych i podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe
Przeciwciała przeciwko melanosomom HMB45 moŜna stosować do skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. Inne
środki utrwalające kompatybilne z przeciwciałami przeciwko melanosomom, HMB45 to methacarn, formalina z dodatkiem cynku, neutralna
buforowana formalina lub B5. Nie zaleca się trawienia tkanki enzymami proteolitycznymi.
Skrawki mroŜakowe i rozmazy cytologiczne
Przeciwciała przeciwko melanosomom, HMB45 mogą być stosowane do odczynów na utrwalonych w acetonie skrawkach mroŜakowych lub
utrwalonych rozmazach cytologicznych.
Wykonanie odczynu
Postępować według stosownej procedury dla wybranego systemu detekcji.
Interpretacja odczynu
Przeciwciała przeciwko melanosomom HMB45 dają odczyn cytoplazmatyczny.
Ograniczenia swoiste dla opisywanego produktu
1. Ujemny wynik testu z HMB45 nie pozwala na stwierdzenie braku czerniaka. Czerniaki desmoplastyczne rzadko dają odczyn
z przeciwciałami przeciwko melanosomom HMB45.4.11 Dlatego zaleca się stosowanie opisywanych przeciwciał w panelu obejmującym
przeciwciała anty-S-100, które dają odczyn z czerniakami desmoplastycznymi, ale nie wykazują swoistości wobec czerniaków,
charakterystycznej dla przeciwciał przeciwko melanosomom HMB45.
2. Przeciwciała przeciw melanosomom HMB45 reagują z antygenem melanocytarnym, a nie wykazują reakcji z antygenem czerniaka.
Przeciwciała przeciw melanosomom HMB45 nie pozwalają na róŜnicowanie łagodnych i złośliwych zmian barwnikowych. Złośliwość
zmian ustala się w oparciu o inne kryteria.
3. Pobudzone, prawidłowe i dojrzałe melanocyty (np. melanocyty znajdujące się w tkance pokrywającej ziarninę i tkankach sąsiednich,
naczyniakach krwionośnych, guzach podścieliska o bogatym unaczynieniu oraz rakach podstawnokomórkowych), mogą wykazywać
ekspresję antygenów melanocytarnych.5-8 W niektórych przypadkach raka podstawnokomórkowego niekiedy stwierdza się dodatni
odczyn z przeciwciałami HMB45 pojedynczych komórek o dendrytycznej morfologii, rozproszonych w sąsiedztwie nowotworu.
Wprawdzie pochodzenie tych komórek reagujących z przeciwciałami HMB45 jest niejasne, być moŜe naleŜą one do populacji
„odczynowych” komórek barwnikowych nowotworu.1
4. Pierwotne nowotwory nerek nie wykazują odczynu, z wyjątkiem guzów nerek o typie angiomyolipoma (RAML).12.13 Wydaje się, Ŝe
antygen docelowy dla przeciwciał HMB45, znajdujący się w składowej mieloidalnej RAML, wykazuje podobieństwo do antygenu
melanocytarnego czerniaka.12
5. Komórki mięśniowe gładkie limfangiomiomatozy płuc (PLAM) wykazują rzadki fenotyp, charakteryzujący się immunoreaktywnością
z przeciwciałami przeciwko melanosomom HMB45 w mechanizmie innym niŜ w przypadku pozostałych procesów rozrostowych z
komórek mięśniowych gładkich. Bonetti i wsp.14 badali 75 preparatów pobranych drogą biopsji transbronchialnej od pacjentów ze
schorzeniami płuc. Obecność komórek dających odczyn z przeciwciałami HMB45 wykazano w przypadku jedynie 6 PLAM
pochodzących od trojga pacjentów.
6. Opisywano rzadkie przypadki fałszywie dodatnich wyników reakcji przeciwciał przeciwko melanosomom HMB45 przygotowanym z
wysięku jamy otrzewnej z nowotworami niewywodzącymi się z melanocytów – np. rakiem gruczołowym,15.16 guzem o typie olfactory
neuroblastoma,12 chłoniakiem złośliwym,16 guzem jasnokomórkowym płuc12 i szpiczakiem mnogim17.15-17 Opisywano równieŜ nieswoisty
odczyn prawidłowego nabłonka gruczołów piersiowych, gruczołów potowych, komórek plazmatycznych i nabłonka oskrzeli,
wykazujących reakcję z przeciwciałami ascites-derived. W takich przypadkach stwierdzano odczyn błonowy i (lub) cytoplazmatyczny o
ziarnistym rozmieszczeniu zabarwienia.17 Opisane artefakty mogły powstać na skutek zanieczyszczeń podczas przygotowywania
materiału z wysięku z jamy otrzewnej lub niewłaściwego rozcieńczenia przeciwciał.4,15-17 Nie opisywano podobnych odczynów w
przypadku preparatów sporządzanych z nadsączy hodowli tkankowych. Przeciwciała przeciwko melanosomom HMB45 są wytwarzane
z nadsączu hodowli tkankowej. W przypadku fałszywie dodatnich wyników odczynu nowotworów innych niŜ melanocytarne lub
prawidłowej tkanki nabłonkowej z przeciwciałami przeciwko melanocytom HMB45, naleŜy sporządzić raport i przesłać do działu
wsparcia technicznego firmy Dako.
7. Opisywane przeciwciała nie nadają się do stosowania w testach metodą Western blot.1
(122026-001)
303299PL_002 str. 2/3
Charakterystyka wyników
Powtarzalność
Odczyn z przeciwciałami przeciwko melanosomom HMB45 badano w skrawkach seryjnych. Uzyskano zgodne wyniki odczynów
z przeciwciałami w badaniach dla jednej i kilku serii.
Tkanki prawidłowe
Do pochodzących od pacjentów dorosłych prawidłowych tkanek, które wykazują dodatni odczyn z przeciwciałami przeciwko melanosomom
HMB45, zalicza się melanocyty (komórki płodowe i subpopulacje melanocytów zawierające niedojrzałe melanosomy), nabłonek barwnikowy
siatkówki pochodzenia płodowego lub dziecięcego. Do struktur dających ujemny odczyn naleŜą: nadnercza, mózg, sutek, pęcherzyk
Ŝółciowy, tkanki przewodu pokarmowego, nerki, wątroby, płuc, tkanka limfoidalna, komórki mezenchymalne, trzustka, nerwy obwodowe,
nabłonek barwnikowy siatkówki (komórki dojrzałe), gruczoły ślinowe, skóra (prawidłowe melanocyty w fazie spoczynku, melanofagi, komórki
Langerhansa, keratynocyty, mieszki włosowe, nerwy skórne, gruczoły potowe i łojowe) oraz jądra.
Tkanki nieprawidłowe
Przeciwciała przeciwko melanosomom HMB45 wykazują dodatni odczyn w 245 na 256 (95,7%) przypadków czerniaków z wyłączeniem
postaci desmoplastycznej1,3,5,6,11-14,18-20 oraz w 245 na 291 (84,2%) przypadków czerniaków z uwzględnieniem postaci
desmoplastycznej.1,3,5,6,11,18-20 Dodatni wynik odczynu z przeciwciałami przeciw antygenom czerniaka stwierdza się równieŜ w przypadku
atypowej hiperplazji barwnikowej (2/2)1, melanocytarnej neuroendodermy u noworodków (1/1)6, guzie nerek o typie angiomyolipoma nerek
(27/29)13,14 oraz róŜnych odmian znamion barwnikowych (218/228)1,5,6,12.
Piśmiennictwo
1. Gown AM, Vogel AM. Monoclonal antibodies to intermediate filament proteins of human cells: Unique and cross-reacting antibodies.
J Cell Biol 1982;95(2 Pt 1):414-24
2. Kapur RP, Bigler SA, Skelly M, Gown AM. Anti-melanoma monoclonal antibody HMB45 identifies an oncofetal glycoconjugate associated
with immature melanosomes. J Histochem Cytochem 1992;40(2):207-12
3. Esclamado RM, Gown AM, Vogel AM. Unique proteins defined by monoclonal antibodies specific for human melanoma. Amer J Surg
1986;152(4):376-85
4. Taatjes DJ, Arendash-Durand B, von Turkovich M, Trainer TD. HMB-45 antibody demonstrates melanosome specificity by
immunoelectron microscopy. Arch Pathol Lab Med 1993;117(3):264-8
5. Skelton HG, Smith KJ, Barrett TL, Lupton GP, Graham JH. HMB-45 staining in benign and malignant melanocytic lesions. Amer J
Dermatopathol 1991;13(6):543-50
6. Colombari R, Bonetti F, Zamboni G, Scarpa A, Marino F, Tomezzoli A, Capelli P, Menestrina F, Chilosi M, Fiore-Donati L. Distribution of
melanoma specific antibody (HMB-45) in benign and malignant melanocytic tumors. Virch Arch A Pathol Anat 1988;413(1):17-24
7. Smoller BR, Hsu A, Krueger J. HMB-45 monoclonal antibody recognizes an inducible and reversible melanocyte cytoplasmic protein.
J Cutan Pathol 1991;18(5):315-22
8. Smoller BR, McNutt NS, Hsu A. HMB-45 recognizes stimulated melanocytes. J Cutan Pathol 1989;16(2):49-53
9. Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. “Procedures for the
decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides.” DHHS (NIOSH) Publ. No. 78-127, Current 13. August 16,
1976
10. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988: Final Rule, 57FR7163. February 28, 1992
11. Wick MR, Swanson PE, Rocamora A. Recognition of malignant melanoma by monoclonal antibody HMB-45. An immunohistochemical
study of 200 paraffin-embedded cutaneous tumors. J Cutan Pathol 1988;15(4):201-7
12. Ashfaq R, Weinberg AG, Albores-Saavedra J. Renal angiomyolipomas and HMB-45 reactivity. Canc 1993;71(10):3091-7
13. Pea M, Bonetti F, Zamboni G, Martignoni G, Riva M, Colombari R, Mombello A, Bonzanini M, Scarpa A, Ghimenton C, Donati LF.
Melanocyte-marker-HMB-45 is regularly expressed in angiomyolipoma of the kidney. Pathol 1991;23(3):185-8
14. Bonetti F, Chiodera PL, Pea M, Martignoni G, Bosi F, Zamboni G, Mariuzzi GM. Transbronchial biopsy in lymphangiomyomatosis of the
lung. HMB45 for diagnosis. Amer J Surg Pathol 1993;17(11):1092-102
15. Bonetti F, Pea M, Martignoni G, Mombello A, Colombari R, Zamboni G, Scarpa A, Piubello Q, Bacchi CE, Gown AM. False-positive
immunostaining of normal epithelia and carcinomas with ascites fluid preparation of antimelanoma monoclonal antibody HMB45. Amer J
Clin Pathol 1991;95(4):454-9
16. Bacchi CE, Gown AM. Letters to the Editor. Specificity of antibody HMB-45. Arch Pathol Lab Med. 1992;116(9):899-900
17. Leong AS-Y, Milios J. An assessment of a melanoma-specific antibody (HMB-45) and other immuno-histochemical markers of malignant
melanoma in paraffin-embedded tissues. Surg Pathol 1989;2(2):137-45
18. Ordonez NG, Ji XL, Hickey RC. Comparison of HMB-45 monoclonal antibody and S-100 protein in the immunohistochemical diagnosis of
melanoma. Amer J Clin Pathol 1988;90(4):385-90
19. Bacchi CE, Goldfogel GA, Greer BE, Gown AM. Paget’s disease and melanoma of the vulva. Gyn Oncol 1992;46(2):216-21
20. Herman GE. Unpublished data. Dako 1992
Wydanie 01/09
(122026-001)
303299PL_002 str. 3/3