Monoclonal Rabbit Anti-Human p53 Clone 318-6-11 Nr kat

Monoclonal Rabbit
Anti-Human p53
Clone 318-6-11
Nr kat. M3629
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała Monoclonal Rabbit Anti-Human p53, klon 318-6-11, są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii. Są one przydatne
w identyfikacji białka p53 w tkankach prawidłowych i nowotworowych. Wyniki panelu przeciwciał są pomocne w diagnostyce różnicowej.
Interpretacja wyniku musi być przeprowadzona przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników
innych metod diagnostycznych.
Streszczenie i informacje ogólne
Do aktywacji genu p53 wywierającego działanie supresorowe na nowotwory prowadzi uszkodzenie DNA, sygnały nieprawidłowego wzrostu
oraz inne czynniki wewnętrzne i zewnętrzne. Czynnik transkrypcyjny reguluje geny, które mogą prowadzić do zatrzymania wzrostu, naprawy
DNA lub apoptozy. Stężenie białka p53 jest regulowane automatycznie poprzez enzymy, takie jak MDM2, które powodują przyłączanie
ubikwityny. W prawidłowych komórkach stężenie białka p53 jest najczęściej poniżej progu detekcji metod immunohistochemicznych. Mutacje
genu p53 należą do najczęstszych zaburzeń molekularnych występujących w nowotworach u ludzi. Te mutacje mogą powodować
akumulację lub nadmierną ekspresję zmutowanego białka p53. Wiele z tych mutacji występuje w domenach białka wiążących DNA, co
uniemożliwia zmutowanemu białku p53 poprawne łączenie się z docelowym fragmentem DNA (1-4). Mutacje genu p53 zostały wykryte
w różnych typach nowotworów ludzkich w narządach takich jak płuca, okrężnica i odbytnica, przełyk, jajniki, trzustka, skóra, żołądek, głowa
i kark, pęcherz moczowy, gruczoł krokowy oraz wielu innych (4).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie,
4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia,
9) Ograniczenia metody.
Dostarczany odczynnik
Monoklonalne przeciwciało królicze jest dostarczane w postaci płynnej jako nadsącz hodowli komórkowej (zawierający płodową surowicę
bydlęcą), dializowany wobec roztworu Tris/HCl o stężeniu 0,05 mol/L, pH 7,2 i azydku sodu o stężeniu 0,015 mol/L. Produkt zawiera białko
stabilizujące.
Klon: 318-6-11
Stężenie króliczych lg [mg/L]: Zobacz etykietę na fiolce.
Immunogen
Syntetyczne białko z regionu ludzkiego białka p53 zawierającego aminokwasy 49-68.
Swoistość
W testach Western blot lizatów komórkowych A431 przeciwciało barwi główny prążek o masie cząsteczkowej 53 kD odpowiadający
oczekiwanej masie cząsteczkowej białka p53 (5, 6).
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3 występujące
w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład
instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości
wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować odpowiednie procedury
postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
5. Niewykorzystane odczynniki należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu. Jeżeli odczynniki są
przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów, należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można
wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem
wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek i materiały dodatkowe wymagane, ale niedostarczane
Skrawki parafinowe:
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Wymagana jest wstępna obróbka odparafinowanych skrawków tkankowych metodą cieplnego odmaskowania antygenu (HIER). Optymalne
wyniki uzyskuje się po wstępnej obróbce tkanek metodą HIER przy użyciu roztworu Dako Target Retrieval Solution, pH 9 (nr. katalogowe
S2368/S2367).
(114842-001)
306793PL_001 s. 1/2
HIER w łaźni wodnej: 20 minut w temperaturze 95–99°C. Przed zanurzeniem preparatów należy ogrzać roztwór do odmaskowania
antygenu.
Po zakończeniu ogrzewania należy odstawić pojemnik z buforem zawierającym preparaty w temperaturze pokojowej na 20 minut. Po
zakończeniu procedury HIER skrawki ostrożnie przepłukać roztworem buforu lub dejonizowaną wodą. W trakcie przygotowywania
i procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do
szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Skrawki mrożone i rozmazy cytologiczne:
Opisywane przeciwciała mogą być stosowane do odczynów na utrwalonych w acetonie skrawkach mrożonych lub utrwalonych rozmazach
cytologicznych.
Procedura wykonania odczynu i materiały dodatkowe wymagane, ale niedostarczane
Rozcieńczenie: Przeciwciała Monoclonal Rabbit Anti-Human p53, nr kat. M3629, mogą być używane w rozcieńczeniu 1:50 na poddanych
wstępnej obróbce utrwalonych w formalinie skrawkach zatopionych w parafinie, przy 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej.
Zalecane jest rozcieńczanie przeciwciał w odczynniku Dako Antibody Diluent with Background-Reducing Components (nr kat. S3022).
Podane informacje mają charakter wyłącznie orientacyjny. Optymalne stężenie może się zmieniać w zależności od rodzaju materiału
i sposobu jego przygotowania. Optymalne stężenie powinno być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna
to odczynnik Dako Negative Control, Rabbit Immunoglobulin Fraction (Solid-Phase Absorbed) (nr kat. X0936) rozcieńczony do takiego
samego stężenia białek, co przeciwciało główne. O ile nie potwierdzono stabilności rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej
w rzeczywistej procedurze wykonania odczynu, zaleca się rozcieńczenie tych odczynników bezpośrednio przed użyciem. Równolegle
z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne.
Wizualizacja: Zalecany jest odczynnik Dako EnVision™+ System/HRP, Rabbit (nr. katalogowe K4010/K4011). Postępować zgodnie
z procedurą dostarczoną z systemami do wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych w systemach zautomatyzowanych,
takich jak Dako Autostainer.
Interpretacja odczynu
Przeciwciała dają odczyn jądrowy.
Charakterystyka wydajnościowa
Tkanki prawidłowe:
Spośród tkanek prawidłowych przeciwciało anty-p53 znakuje jądra komórek wyściełających pęcherzyki płucne w 1/3 przypadki płuc oraz
komórki warstwy przypodstawnej nabłonka wielowarstwowego płaskiego w 2/3 przypadki migdałków. Następujące tkanki prawidłowe nie
wykazywały reaktywności z przeciwciałem anty-p53: (3/3) nadnercza, (3/3) szpik kostny, (2/2) sutek, (3/3) mózg (móżdżek), (3/3) mózg
(mózgowie), (2/2) szyjka macicy, (2/2) jelito grube, (2/2) przełyk, (3/3) serce, (3/3) nerka, (3/3) wątroba, (2/2) komórki międzynabłonka, (2/2)
nerwy, (3/3) jajnik, (3/3) trzustka, (3/3) przytarczyca, (3/3) przysadka, (2/2) gruczoł krokowy, (3/3) ślinianka, (3/3) mięśnie szkieletowe, (3/3)
skóra, (3/3) jelito cienkie, (3/3) śledziona, (3/3) żołądek, (3/3) jądra, (3/3) grasica, (2/2) tarczyca i (2/2) macica (7).
Tkanki nieprawidłowe:
W przebadanych tkankach nowotworowych przeciwciało anty-p53 wykazało dodatni odczyn w jądrach komórek nowotworowych w 26/49
przypadków guzów, w tym 9/12 przypadków raka płaskonabłonkowego płuc, 1/1 przypadek raka drobnokomórkowego płuc, 2/4 przypadki
raka gruczołowego płuca, 1/2 przypadki nowotworów neuroendokrynnych płuc, 1/10 przypadków raka gruczołowego gruczołu krokowego
i 12/20 przypadków raka gruczołowego okrężnicy (8).
Piśmiennictwo
1. Harris SL, Levine AJ. The p53 pathway: positive and negative feedback loops [review]. Oncogene 2005 Apr 18;24(17):2899-908.
2. Oren M. Regulation of the p53 tumor suppressor protein [review]. J Biol Chem 1999 Dec 17;274(51):36031-4.
3. Steele RJ, Lane DP. P53 in cancer: a paradigm for modern management of cancer [review]. Surgeon 2005 Jun;3(3):197-205.
4. Vogelstein B, Lane D, Levine AJ. Surfing the p53 network [review]. Nature 2000 Nov 16;408(6810):307-10.
5. Vojtesek B, Bartek J, Midgley CA, Lane DP. An immunohistochemical analysis of the human nuclear phosphoprotein p53. New
monoclonal antibodies and epitope mapping using recombinant p53. J Immunol Methods 1992 Jul 6:151(1-2):237-44.
6. M3629 Specificity Report On File
7. M3629 IHC003 Report On File
8. M3629 IHC Report On File
Ten licencjonowany produkt jest produkowany przez firmę Epitomics Inc. przy użyciu zastrzeżonej technologii produkcji monoklonalnych
przeciwciał króliczych firmy Epitomics.
(114842-001)
306793PL_001 s. 2/2