Monoclonal Mouse Anti-Human Melan-A klon A103 Nr kat

Monoclonal Mouse
Anti-Human Melan-A
klon A103
Nr kat. M7196
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Melan-A, klon A103, jest przeznaczone do badań
immunohistochemicznych. Przeciwciało znakuje komórki barwnikowe i jest cennym narzędziem do identyfikacji
czerniaków (1, 2) oraz, jeŜeli czerniaki zostały wykluczone, do identyfikacji przypadków raka
korowonadnerczowego (3, 4). Ponadto przeciwciało moŜna równieŜ stosować jako cenny marker
naczyniakomięśniakotłuszczaków (5). Identyfikacja róŜnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu
przeciwciał. Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę
morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w
kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy
MART-1 (1).
Streszczenie
i informacje ogólne
Melan-A wyizolowany jako antygen swoisty dla czerniaków złośliwych, jest białkiem przezbłonowym składającym
się ze 118 aminokwasów o nieustalonej funkcji (1). Gen Melan-A został sklonowany z linii komórek ludzkiego
czerniaka złośliwego a jego ekspresja na czerniakach jest rozpoznawana przez autologiczne cytotoksyczne
komórki T (6). Ekspresja genu Melan-A występuje na skórze, siatkówce i większości hodowanych komórek
barwnikowych i czerniaków podczas, gdy olbrzymia większość innych tkanek oraz badanych przypadków raka
takiej ekspresji nie wykazuje (1, 6, 7). Jednak ekspresja tego genu występuje w naczyniakomięśniakotłuszczakach
(5). Wraz z genem Melan-A wyróŜniono siedem innych antygenów czerniaka złośliwego: MAGE-1, MAGE-3,
tyrozynaza, gp100, gp75, BAGE-1i GAGE-1. Wszystkie zostały rozpoznane przez autologiczne cytotoksyczne
komórki T (1).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
dializowany wobec 0,05 mol/L Tris/HCL o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: A103 (1). Izotyp: IgG1, kappa.
StęŜenie mysiej IgG: Partrz: informacja podana na etykiecie fiolki.
StęŜenie białek w róŜnych partiach moŜe się róŜnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. W celu
zapewnienia jednolitości odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy uŜyciu róŜnych partii
produktu, miano kaŜdej partii jest porównywane i dostosowywane do partii referencyjnej.
Immunogen
Ekspresja rekombinantu białka w E.coli odpowiadająca antygenowi Melan-A (1).
Swoistość
Podczas stosowania techniki Western blotting wobec lizatów komórek z linii komórek z mRNA o dodatnim
odczynie Melan-A przeciwciało znakuje dublet białka o cięŜarze cząsteczkowym 20-22 kDa natomiast nie
wykrywa się znakowania linii komórek z mRNA o ujemnym odczynie Melan-A (1).
W immunoprecypitatach linii komórek SK-MEL-13 i SK-MEL-19 o dodatnim odczynie Melan-A przeciwciało
znakuje dublet białka o cięŜarze cząsteczkowym 20-22 kDa odpowiadającym Melan-A podczas, gdy nie
wykrywa się Ŝadnego precypitatu w liniach komórek z mRNA o ujemnym odczynie Melan-A (1).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu.
JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania,
uŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu.
Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i
ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami
w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z
działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało moŜna stosować do znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie,
zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą podwyŜszonej temperatury
podczas odzyskiwania epitopu. Optymalne wyniki uzyskuje się przy uŜyciu Dako Target Retrieval Solution o
wysokim pH, nr kat. S3308 lub 10 mmol/l buforu Tris, 1 mmol/l EDTA o pH 9,0. Zastosowanie roztworów Dako
Target Retrieval Solution, nr kat. S1700 i buforu cytrynianowego 10 mmol/L o pH 6,0 lub przygotowanie tkanki z
proteinazą K okazało się nieskuteczne. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki podczas
przygotowania lub następującej po nim procedury barwienia immunohistochemicznego. Jeśli stabilność
rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona podczas rzeczywistej procedury barwienia,
zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed uŜyciem lub rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako
(108113-002)
M7196/PL/KRM/2008.09.30 s. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Antibody Diluent, nr kat. S0809. Kontrolę dodatnią i ujemną naleŜy wykonać jednocześnie z testem próbki
pacjenta.
Skrawki zamroŜone i przygotowanie komórek: Przeciwciało moŜna stosować do znakowania zamroŜonych
skrawków utrwalonych w acetonie oraz do preparatów komórkowych (1).
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Melan-A, nr kat. M7196, moŜna stosować w
rozcieńczeniu w stosunku 1:25-1:50 podczas stosowania na skrawkach ludzkiego czerniaka złośliwego
utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie, stosując podwyŜszoną temperaturę do odzyskiwania
epitopu w Dako Target Retrieval Solution, o wysokim pH nr kat. S3308 przez 20 minut oraz inkubację w
temperaturze pokojowej z pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w
zaleŜności od próbki i metody przygotowania i powinny być określone przez kaŜde z poszczególnych
laboratoriów. Zalecaną kontrolą ujemną jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X0931, rozcieńczona do takiego
samego stęŜenia mysiej IgG jak pierwsze przeciwciało.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu Dako LSAB™+/HRP, nr kat. K0679 oraz zestawów Dako
EnVision™+/HRP, nr kat. K4004 oraz K4006. Zestaw Dako APAAP, nr kat. K0670, stanowi dobrą alternatywę
dla zamroŜonych skrawków i przygotowywania komórek, jeśli pod uwagę brane jest barwienie peroksydazą
endogenną. NaleŜy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunohistochemicznego przy wykorzystaniu
platform automatycznych, takich jak Dako Autostainer (4).
Ograniczenia specyficzne
dla produktu
W związku z nieswoistą immunoreaktywnością stwierdzono, Ŝe przeciwciało znakuje korę nadnerczy,
gruczolaka korowonadnerczowego, pierwotnego i przerzutowego raka korowonadnerczowego (ACC),
naczyniakomięśniakotłuszczaki (AML) (5), komórki i guzy Leydiga jąder, warstwę ziarnistą pęcherzyka Graafa i
komórki osłonowe jajnika oraz guza jajnika z komórek Sertoliego-Leydiga (2, 3). Szczególnie w przypadku
guzów korowonadnerczowych przeciwciało okazuje się cennym narzędziem do rozróŜniania pomiędzy
nowotworami korowonadnerczowymi a innymi nowotworami i guzami chromochłonnymi (4).
Przy uŜyciu buforu Tris 10 mmol/L, EDTA 1 mmol/L, o pH 9,0 do odzyskiwania epitopu przy zastosowaniu
podwyŜszonej temperatury, przeciwciało moŜe wykazywać barwienie tła w pojedynczych komórkach nerek.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia (1).
Tkanki normalne: Przeciwciało znakuje skórę, natomiast tkanki Ŝołądka, okręŜnicy, płuc, wątroby, śledziony, nerek,
jąder, pęcherza moczowego, piersi, jajnika, mięśnia gładkiego i tkanki tłuszczowej nie są znakowane przez
przeciwciało (1, 5). Odnotowano, Ŝe przeciwciało znakuje komórki produkujące steroidy kory nadnerczy, jajnika i
jądra (2). Zobacz takŜe ograniczenia specyficzne dla produktu.
Tkanki patologiczne: W przerzutowych czerniakach złośliwych, z wyjątkiem jednego przypadku, który
wykazywał skupione wybarwienie, 16/21 przypadków było znakowanych przez przeciwciało wykazując dodatnie
jednolite cytoplazmatyczne wybarwienie w >80-90% komórek czerniaka (1). W innym badaniu obejmującym 10
łagodnych znamion melanocytowych, 10 pierwotnych czerniaków złośliwych i 75 przerzutowych czerniaków
złośliwych przeciwciało znakowało 10/10 łagodnych znamion melanocytowych, 7/10 pierwotnych czerniaków
złośliwych i 61/75 przerzutowych czerniaków (2).
Z pośród 111 przypadków raka, głównie obejmujących gruczolaki i raka płaskokomórkowego, 40 guzów
komórek zarodkowych i 33 przypadki róŜnych guzów nabłonkowych nie-melanocytowych, przeciwciało nie
znakowało Ŝadnego z nich. Przeciwciało znakowało 5/5 gruczolaków korowonadnerczowych, 16/16 raków
pierwotnych i 13/13 przerzutowych raków korowonadnerczowych, a takŜe 4/4 guzy Leydiga jąder i 3/4 guzy z
komórek Sertoliego-Leydiga jajnika (3). W innym badaniu obejmującym 316 przypadków, w tym 21 guzów
korowonadnerczowych, 16 raków przerzutowych do nadnerczy, 10 guzów chromochłonnych i 269 raków pozanadnerczowych przeciwciało znakowało 14/14 gruczolaków korowonadnerczowych, 7/7 raków
korowonadnerczowych i 0/16 raków przerzutowych do nadnerczy oraz 0/10 guzów chromochłonnych. Z pośród
269 raków poza-nadnerczowych przeciwciało znakowało pojedynczy przypadek raka surowiczego jajnika (4).
W badaniu 18 naczyniakomięśniakotłuszczaków przeciwciało znakowało wszystkie 18 przypadków (5). W
innym raporcie z badania wszystkie trzy przypadki naczyniakomięśniakogruczolaka były znakowane przez
przeciwciało (2).
Piśmiennictwo
1. Chen Y-T, Stockert E, Jungbluth A, Tsang S, Coplan KA, Scanlan MJ, et al. Serological analysis of MelanA(MART-1), a melanocyte-specific protein homogeneously expressed in human melanomas. Proc Natl Acad
Sci 1996;93:5915-9.
2. Jungbluth AA, Busam KJ, Gerald WL, Stockert E, Coplan KA, Iversen K, et al. An anti-Melan-A monoclonal
antibody for the detection of malignant melanoma in paraffin-embedded tissues. Am J Surg Pathol
1998;22:595-602.
3. Busam KJ, Iversen K, Coplan KA, Old LJ, Stockert E, Chen Y-T, et al. Immunoreactivity for A103, an antibody
to Melan-A (Mart-1), in adrenocortical and other steroid tumors. Am J Surg Pathol 1998;22:57-63.
4. Loy TS, Phillips RW, Linder CL. A103 immunostaining in the diagnosis of adrenal cortical tumors. Arch
Pathol Lab Med 2002;126:170-2.
5. Jungbluth AA, Iversen K, Coplan K, Williamson B, Chen Y-T, Stockert T, et al. Expression of melanocyteassociated markers gp-100 and Melan-A/MART-1 in angiomyolipomas. Virchows Arch 1999;434:429-35.
6. Coulie PG, Brichard V, Van Pel A, Wölfel T, Schneider J, Traversari C, et al. A new gene coding for a
differentiation antigen recognized by autologous cytolytic T lymphocytes on HLA-A2 melanomas. J Exp
Med 1994;180:35-42.
7. Kawakami Y, Eliyahu S, Delgado CH, Robbins PF, Rivoltini L, Topalian SL, et al. Cloning of the gene
coding for a shared human melanoma antigen recognized by autologous T cells infiltrating into tumor. Proc
Natl Acad Sci 1994;91:3515-9.
(108113-002)
M7196/PL/KRM/2008.09.30 s. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Objaśnienia symboli
(108113-002)
N um er k at alogow y
Tem peratura przechowywania
W yrób m edyc zny do
diagnos tyki in vitro
Numer serii
Spraw dzić w inst rukc ji
s tosowania
ZuŜyć przed
Produc ent
M7196/PL/KRM/2008.09.30 s. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17