Monoclonal Mouse Anti-Vimentin Klon V9 Nr kat. M 0725
Transkrypt
Monoclonal Mouse Anti-Vimentin Klon V9 Nr kat. M 0725
Monoclonal Mouse Anti-Vimentin Klon V9 Nr kat. M 0725 Wydanie 18.12.02 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Monoclonal Mouse Anti-Vimentin, klon V9, jest przeznaczone do użytku w immunocytochemii. To przeciwciało znakuje głównie komórki pochodzenia mezenchymalnego w prawidłowych i nowotworowo zmienionych tkankach, i jest wartościowe w diagnostyce nowotworów. Identyfikacja różnicowa jest wspomagana wynikami z panelu przeciwciał-szczególnie przeciwko innym rodzajom pośrednich włókien (1). Interpretacja wyników musi być dokonana przez wykwalifikowanego patologa w kontekście wywiadu chorobowego pacjenta i innych badań diagnostycznych. Wprowadzenie Wimentyna jest białkiem włókna pośredniego (IF) o masie 57 kDa, która jest częścią struktur podporowych komórek kręgowców. Wśród pięciu klas IF, obejmujących dziewięć grup, wimentyna należy do klasy III, wykazującej wysoki stopień swoistości do komórek pochodzenia mezenchymalnego. Jak początkowo myślano ten typ swoistości komórkowej wykazywanej przez każdy z podtypów IF, był w komórkach nowotworowych jak również w ich prawidłowych odpowiednikach co czyniło IF ważnym markerem diagnostycznym w histogenezie. Jak obecnie dowiedziono, koekspresja pośrednich włókien, szczególnie wimentyny i cytokeratyny, w różnorodnych prawidłowych komórkach/tkankach i w zmianach nowotworowych, wymaga użycia panelu przeciwciał do różnicowej diagnostyki nowotworów (2). * Ostatnio została utworzona dodatkowa klasa (klasa VI) dla nestyny (2). Dostarczony odczynnik Monoklonalne mysie przeciwciało dostarczane w postaci ciekłej jako supernatant hodowli komórkowej zdializowanej 0.05 mol/L Tris/HCl, pH 7.2, i zawierającej 15 mmol/L NaN3. Klon: V9 (3). Isotyp: IgG1, kappa. Stężenie mysiego IgG: patrz etykieta na fiolce. Immunogen Oczyszczona wimentyna z soczewki świńskiego oka (3). Swoistość W metodzie Western blotting z użyciem oczyszczonej świńskiej wimentyny, przeciwciało znakuje pojedynczy prążek o masie 57 kDa odpowiadający wimentynie. Kiedy stosuje się pełne wyciągi komórkowe z linii komórkowych wyrażających wimentynę oraz kwaśne włókniste białko glejowe (GFAP) a także odpowiednio wimentynę oraz desminę, to przeciwciało znakuje swoiście prążek wimentyny o masie 57 kD. Jak bezpośrednio wykazano w tych doświadczeniach, przeciwciało nie reaguje z dwoma białkami IF najściślej powiązanymi z wimentyną, tj. desminą oraz GFAP (3). W immunocytochemii przeciwciało znakuje wimentyno-pozytywne ludzkie linie komórkowe IMR90, RD, glejaka i HeLa (3). Jak wykazano w immunocytochemii, przeciwciało reaguje krzyżowo z białkiem-równoważnikiem wimentyny człowieka, krowy, psa, chomika, konia, rezusa i afrykańskiej zielonej małpy, królika, szczura i szczurzego kangura. Wykazano brak reakcji krzyżowej z mysią wimentyną, a wyniki na próbkach kurczaka są sprzeczne (3, 4). Środki ostrożności 1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), odczynnik wysoce toksyczny w czystej postaci. W stężeniu obecnym w produkcie, chociaż niesklasyfikowanym jako niebezpieczny, azydek sodu może reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe nagromadzenie azydków metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydków metali w kanalizacji. 3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury obchodzenia się z nim. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2-8 C. Nie używać po upływie daty ważności podanej na fiolce. Jeżeli odczynniki przechowywane były w innych warunkach niż wymagane, użytkownik musi sprawdzić ich stan. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność tego produktu, dlatego pozytywne i negatywne kontrole powinny być oznaczone równocześnie z próbkami pobranymi od pacjenta. Jeżeli zaobserwuje się nieoczekiwane barwienie, którego nie można wyjaśnić odchyleniami w procedurach laboratoryjnych i podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy skontaktować się z serwisem technicznym producenta. Przygotowanie próbek Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być używane do znakowania wycinków tkanki utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek przy pomocy metody odzyskiwania epitopu wywołanego przez ogrzewanie. Optymalne wyniki są uzyskiwane przy pomocy Dako Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308 lub 10mmol/L buforu cytrynianoweg pH 6.0. Mniej optymalne wyniki uzyskuje się przy pomocy 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA pH 9.0. Natomiast Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700 i wstępne przygotowanie tkanek przy pomocy proteinazy K działają destrukcyjnie na epitop. Wycinki tkanki nie mogą wyschnąć podczas przygotowania ani podczas następującej po nim procedurze barwienia immunocytochemicznego. (108418-002) M 0725/PL/CE/18.12.02 str. 1/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17 Zamrożone wycinki i preparaty komórkowe: Przeciwciało może być użyte do znakowania zamrożonych wycinków lub utrwalonych rozmazów komórkowych (3). Procedura barwienia Rozcieńczanie: Monoclonal Mouse Anti-Vimentin, nr kat. M 0725, może być użyte w rozcieńczeniu 1:50-1:100 w przypadku badania utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie wycinków ludzkiego migdałka i przy użyciu odzyskiwania determinanty antygenowej wywołanego ogrzewaniem przez 20 minut w Dako Target Retrieval solution, High pH, nr kat. S 3308, i 30 minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej z pierwszym przeciwciałem. Optymalne warunki mogą różnić się w zależności od badanego materiału, metody przygotowania i powinny być ustalone przez każde laboratorium. Zaleca się jako kontrolę ujemną Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczone do takiego samego stężenia mysiego IgG jak pierwsze przeciwciało. Jeżeli nie ustalono stabilności rozcieńczonego przeciwciała i kontroli negatywnej w aktualnej procedurze barwienia, zaleca się rozcieńczyć te odczynniki tuż przed użyciem lub rozcieńczyć w Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Pozytywne i negatywne kontrole powinny być użyte równocześnie z próbkami badanymi. Wizualizacja: Zalecane są zestawy DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679, i DAKO EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 i K 4006. Zestaw Dako APAAP nr kat. K 0670 jest dobrym zamiennikiem jeśli chodzi o barwienie endogennej peroksydazy w zamrożonych wycinkach i preparatach komórkowych. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego zestawu uwidaczniania. Automatyzacja: Przeciwciało nadaje się bardzo dobrze do barwienia immunocytochemicznego przy użyciu automatycznych urządzeń barwiących takich jak Dako Autostainer. Charakterystyka wyników Komórki oznakowane przez przeciwciało wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia. Tkanki prawidłowe: Ogólnie, większość komórek mezenchymalnych jest znakowana przez to przeciwciało, wliczając w to fibroblasty, adypocyty, komórki mięśni gładkich, komórki nabłonka naczyń, astrocyty, komórki nerwów obwodowych (Schwanna), makrofagi (włącznie z komórkami Kupfera), jak również mięśniowonabłonkowe komórki gruczołów potowych ślinowych oraz piersi, które są silnie znakowane. Również pozytywne, ze zmienną intensywnością i rozmieszczeniem, są komórki pęcherzykowe tarczycy, kory nadnerczy, kanalików nerkowych dalszych, mezangialne i śródbłonkowe komórki kłębków nerkowych, jak również groniaste komórki trzustki (1, 3). W ludzkim oku, przeciwciało barwi tylne i przednie pigmentowane nabłonki ludzkiej tęczówki, włączając w to przednie nabłonki części mięśniówki (rozwieracz źrenicy), jak również pigmentowane i niepigmentowane nabłonki rzęskowe (5). W nabłonkach rzęskowych, wimentyna wykazywała koekspresję z cytokeratyną (5). Komórki mięśni szkieletowych i sercowych, naskórkowe, łuskowate, nabłonki dróg moczowych, śluzówka okrężnicy i żołądka, komórki glejowe, jak również neurony są stale ujemne w reakcji z tym przeciwciałem (1, 3). Tkanki nieprawidłowe Przeciwciało znakowało 17/20 przypadków mięsaka, 16/18 przypadków czerniaka, 4/4 przypadki oponiaka, 3/3 przypadki nerwiaka i barwienie było wyłącznym jednym włóknem pośrednim w tych nowotworach. Dodatkowo, zmienny procent (10-57%) raków, raków neurowewnątrzwydzielniczych, niedojrzałych nerwiaków, grasiczaków i międzybłoniaków był pozytywny z tym przeciwciałem. W tych nowotworach, z wyjątkiem niedojrzałych nerwiaków, występowała koekspresja cytokeratyny i wimentyny. Wśród gruczolakoraków, ponad 50% raków brodawkowych tarczycy jak również raków nerek, śluzówki macicy, jajników i płuc było znakowane przez to przeciwciało i wykazywanło koekspresję keratyn i wimentyny (1). Piśmiennictwo 1. Azumi N, Battifora H. The distribution of vimentin and keratin in epithelial and nonepithelial neoplasms. Am J Clin Pathol 1987;88:286-96. 2. Herrmann H, Aebi U. Intermediate filaments and their associates: multi-talented structural elements specifying cytoarchitecture and cytodynamics. Curr Opin Cell Biol 2000;12:79-90. 3. Osborn M, Debus E, Weber K. Monoclonal antibodies specific for vimentin. Eur J Cell Biol 1984;34:13743. 4. Bohn W, Wiegers W, Beuttenmüller M, Traub P. Species-specific recognition patterns of monoclonal antibodies directed against vimentin. Exp Cell Res 1992;201:1-7. 5. Kivelä T, Fuchs U, Tarkkanen A. Cytoskeleton in neuroectodermally derived epithelial and muscle cells of the human iris and ciliary body. J Histochem Cytochem 1992;40:1517-26. Objaśnienia symboli (108418-002) Numer katalogowy Zakres temperatur Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Numer serii Przed użyciem zapoznać się z instrukcjami Termin ważności Producent M 0725/PL/CE/18.12.02 str. 2/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17