CONFIRM anti-S100 (4C4.9) Primary Antibody

DOSTARCZANY ODCZYNNIK
CONFIRM anti-S100 (4C4.9) Primary Antibody
790-2914
05278104001
50
PRZEZNACZENIE
To przeciwciało jest przeznaczone do
stosowania w diagnostyce in vitro
(IVD). CONFIRM anti-S100 (4C4.9)
Primary Antibody firmy Ventana
Medical Systems (Ventana) to
monoklonalne przeciwciało mysie
(IgG2a) skierowane przeciwko białku
S100. Przeciwciało jest przeznaczone
do jakościowej identyfikacji białka S100
w skrawkach tkanek utrwalonych
w formalinie i zatopionych w parafinie
przy użyciu automatu do barwienia
Rysunek 1. Przeciwciało CONFIRM antipreparatów firmy Ventana oraz
S100 (4C4.9) Primary Antibody
mikroskopu świetlnego.
wykazujące jądrowy i cytoplazmatyczny
Interpretacja kliniczna każdego
schemat barwienia w tkance czerniaka.
stwierdzonego wybarwienia lub jego
braku powinna być uzupełniona badaniami morfologicznymi oraz wykonywaniem
odpowiednich prób kontrolnych. Ocena wyniku powinna być dokonywana przez
wykwalifikowanego patologa, z uwzględnieniem historii klinicznej pacjenta oraz wyników
innych badań diagnostycznych. Wydawać tylko z przepisu lekarza.
PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA
S100 ulega ekspresji na szeregu rodzajów komórek pochodzenia mezodermalnego,
neuroektodermalnego i nabłonkowego, w tym komórkach glejowych i nerwowych,
komórkach Schwanna, melanocytach, komórkach tkanki chrzęstnej i tłuszczowej,
komórkach mięśniowo-nabłonkowych oraz komórkach Langerhansa.
S100 to mające masę 20 kD kwaśne białko wiążące wapń o nieznanej funkcji składające
się z dwóch podjednostek, z których każda może należeć do jednego z dwóch typów: alfa
albo beta. Te podjednostki ulegają ekspresji w różny sposób w wielu tkankach ludzkich1.
S100 to czuły marker czerniaka. Przeciwciała skierowane przeciwko białku S100 barwią
czerniaki bezbarwnikowe silniej niż nowotwory pigmentowane i umożliwiają wykrycie
czerniaków dających często odczyn negatywny w badaniu innymi markerami
melanocytów, np. czerniaków desmoplastycznych. Wzorzec barwienia jest
cytoplazmatyczny i jądrowy.
S100 ma bardzo wysoką czułość w przypadku czerniaków, ale wykazuje także pozytywne
wyniki w przypadku wielu guzów o charakterze innym niż melanocytyczny. S100 zwykle
występuje w komórkach nerwowych (komórkach glejowych i Schwanna) oraz atakujących
je komórkach rakowych.1 Zaletą powszechnego występowania wysoce
immunoreaktywnego białka S100 w nerwach obwodowych obecnych w niemal każdej
tkance prawidłowej i chorobowej jest to, że charakteryzuje się kontrolą pozytywną w
niemal każdym barwieniu immunologicznym S1002.
ZASADY PRZEPROWADZANIA PROCEDURY
CONFIRM anti-S100 (4C4.9) Primary Antibody to mysie przeciwciało monoklonalne
wytwarzane przeciw oczyszczonemu białku S100 mózgu bydlęcego. CONFIRM anti-S100
(4C4.9) Primary Antibody wiąże się z białkiem S100 w zatopionych w parafinie skrawkach
tkanki i wykazuje schemat barwienia jądrowego i cytoplazmatycznego. To przeciwciało
można uwidocznić przy użyciu zestawu OptiView DAB IHC Detection Kit
(nr kat. 760-700/06396500001), a następnie zestawu ultraView Universal DAB Detection
Kit (nr kat. 760-500/05269806001) lub zestawu do detekcji ultraView Universal Alkaline
Phosphatase Red Detection Kit (nr kat. 760-501/05269814001). Dodatkowe informacje,
patrz odpowiednie ulotki dołączone do opakowania.
2016-10-10
FT0700-410m
1/4
CONFIRM anti-S100 (4C4.9) Primary Antibody zawiera odczynnik w ilości wystarczającej
na 50 testów.
Jeden dozownik 5 ml przeciwciała CONFIRM anti-S100 (4C4.9) Primary Antibody zawiera
około 50 μg mysiego przeciwciała monoklonalnego.
Przeciwciało jest rozcieńczone w buforowanym fosforanem roztworze soli, zawierającym
białko nośnikowe i 0,05% ProClin 300 jako konserwant.
Całkowite stężenie białka w odczynniku wynosi około 3 mg/ml. Stężenie swoistego
przeciwciała wynosi około 10 μg/ml. Nie jest znana żadna nieswoista reaktywność
przeciwciał zawartych w tym produkcie.
CONFIRM anti-S100 (4C4.9) Primary Antibody jest mysim przeciwciałem monoklonalnym,
otrzymywanym jako oczyszczony supernatant z hodowli komórkowej.
Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki firmy VENTANA, dołączonej
do opakowania zestawu do detekcji, aby uzyskać szczegółowy opis następujących
kwestii: Zasady przeprowadzania procedury, Potrzebne materiały i odczynniki
niedołączone do zestawu, Pobranie próbki i przygotowanie do analizy, Procedury kontroli
jakości, Interpretacja wyników, Ogólne ograniczenia i Rozwiązywanie problemów.
MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIEDOSTARCZANE
Nie dołączono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji firmy VENTANA,
ani elementów pomocniczych, takich jak pozytywne i negatywne kontrolne preparaty
tkankowe.
Nie wszystkie produkty przedstawione w ulotce dołączonej do opakowania są dostępne
we wszystkich rejonach geograficznych. Należy skonsultować się z lokalnym
przedstawicielem odpowiedzialnym za wsparcie techniczne.
PRZECHOWYWANIE
Po otrzymaniu i gdy preparat nie jest używany, należy go przechowywać
w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać.
W celu zapewnienia właściwego dozowania odczynnika i trwałości przeciwciała po
każdym użyciu należy założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce
w pozycji pionowej.
Na każdym dozowniku przeciwciała podana jest data ważności. Prawidłowo
przechowywany odczynnik zachowuje trwałość do daty określonej na etykiecie. Nie należy
stosować odczynnika po upływie terminu ważności.
PRZYGOTOWANIE PRÓBKI
Do stosowania z tym przeciwciałem pierwszorzędowym nadają się rutynowo
przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem
stosowania zestawów do detekcji firmy VENTANA i zautomatyzowanych urządzeń serii
VENTANA BenchMark IHC/ISH. Zalecanym środkiem do utrwalania tkanek jest 10%
obojętna, zbuforowana formalina3. Preparaty należy niezwłocznie wybarwić, ponieważ
antygenowość ciętych skrawków tkanek może z czasem ulegać osłabieniu.
Przy badaniu nieznanych preparatów zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli
pozytywnej i negatywnej.
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
2.
Wyłącznie do zastosowania profesjonalnego.
3.
W tym preparacie jako konserwant zastosowano ProClin 300. Został on uznany
za środek drażniący i jego kontakt ze skórą może powodować uczulenie. Podczas
pracy z produktem należy w uzasadnionym stopniu stosować środki ostrożności.
Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. Stosować
odzież i rękawice ochronne.
4.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały
niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych środków
ostrożności.
5.
Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu
odczynników z wrażliwymi miejscami spłukiwać obfitą ilością wody.
6.
Skażenie mikrobiologiczne odczynników może skutkować otrzymaniem
nieprawidłowych wyników.
7.
W celu uzyskania informacji na temat zalecanej metody utylizacji produktu należy
skontaktować się z władzami lokalnymi i/lub krajowymi.
8.
Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie
charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zwrotach dotyczących
zagrożeń na stronie www.ventana.com.
18060PL Rev D
PROCEDURA BARWIENIA
Przeciwciała podstawowe firmy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania
w urządzeniach VENTANA BenchMark IHC/ISH razem z zestawami do detekcji
i akcesoriami firmy VENTANA. Opis zalecanego protokołu wybarwiania zawiera Tabela 1,
Tabela 2 i Tabela 3.
Te przeciwciała zostały zoptymalizowane do określonego czasu inkubacji, jednak
użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego
odczynnika.
Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane
zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi urządzenia. Więcej informacji na temat
procedur barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej
do opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA.
Tabela 1. Zalecane protokoły barwienia dla odczynnika CONFIRM anti-S100 (4C4.9)
Primary Antibody z użyciem zestawu do detekcji ultraView DAB IHC Detection Kit oraz
urządzenia BenchMark GX, Benchmark XT i BenchMark ULTRA.
Rodzaj procedury
Tabela 3. Zalecane protokoły barwienia dla odczynnika CONFIRM anti-S100 (4C4.9)
Primary Antibody z użyciem zestawu do detekcji OptiView DAB IHC Detection Kit oraz
urządzeń BenchMark GX, Benchmark XT i BenchMark ULTRA.
Rodzaj procedury
Metoda
Odparafinowanie
Wybrana
Cell Conditioning
(odsłanianie antygenu)
Cell Conditioning 1
Urządzenie BenchMark GX 8 min
Urządzenia BenchMark XT i ULTRA 16 min
Inhibitor peroksydazy przed
przeciwciałem
podstawowym
Przeciwciało (pierwotne)
Metoda
Odparafinowanie
Wybrana
Cell Conditioning
(odsłanianie antygenu)
Cell Conditioning 1
BenchMark GX i XT Mild (30 min)
Urządzenie BenchMark ULTRA 36 min (łagodnie)
Przeciwciało (pierwotne)
Urządzenie BenchMark GX i XT
4 minuty, 37°C
Urządzenie BenchMark ULTRA
4 minuty, 36°C
ultraBlock*
8 minut
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
Wybrana
Urządzenie BenchMark GX i XT
4 minuty, 37°C
Urządzenie BenchMark ULTRA
4 minuty, 36°C
Opcja 2*
8 minut
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
* Odczynnik blokujący (P/N 760-219)
Bluing, 4 minuty
Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, jak również zmienność między
poszczególnymi urządzeniami i warunkami środowiska laboratoryjnego, konieczne może
być wydłużenie lub skrócenie czasu inkubacji przeciwciała pierwotnego i kondycjonowania
komórek (cell conditioning) lub ich wstępnej obróbki proteazą, zależnie od próbki,
zastosowanej metody detekcji i preferencji użytkownika. Więcej informacji na temat
zmiennych związanych z utrwalaniem można znaleźć w pracy „Immunohistochemistry
Principles and Advances” (Podstawy i postępy immunohistochemii)4.
* Odczynnik blokujący (P/N 760-219)
TKANKA DO DODATNIEJ PRÓBY KONTROLNEJ
Tabela 2. Zalecany protokół barwienia dla przeciwciała CONFIRM anti-S100 (4C4.9)
Primary Antibody z użyciem zestawu do detekcji ultraView Universal Alkaline
Phosphatase Red Detection Kit oraz urządzeń BenchMark GX, Benchmark XT i
BenchMark ULTRA.
Rodzaj procedury
Metoda
Odparafinowanie
Wybrana
Cell Conditioning
(odsłanianie antygenu)
Cell Conditioning 1
BenchMark GX i XT Mild (30 min)
Urządzenie BenchMark ULTRA 36 min (łagodnie)
Przeciwciało (pierwotne)
Urządzenie BenchMark GX
4 minuty, 37°C
Urządzenie BenchMark XT
8 minut, 37°C
Urządzenie BenchMark ULTRA
8 minut, 36°C
ultraBlock*
8 minut
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
Zalecana pozytywna kontrola tkankowa to wyrostek. Komórki Schwanna we włóknach
nerwów obwodowych, zwojowe komórki satelitarne w warstwie mięśni i podśluzówce
powinny być silnie pozytywne podobnie jak adipocyty i komórki dendrytyczne oraz
makrofagi w blaszce właściwej. Komórki nabłonkowe powinny być negatywne.
INTERPRETACJA WYBARWIENIA / OCZEKIWANE WYNIKI
Wzór barwienia komórek dla przeciwciała CONFIRM anti-S100 (4C4.9) jest jądrowy
i cytoplazmatyczny.
SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA
System detekcji OptiView jest ogólnie bardziej czuły niż inne systemy detekcji. Użytkownik
musi walidować wyniki uzyskane przy użyciu tego odczynnika oraz systemów detekcji.
Zaobserwowano, że tkanki prawidłowe i nowotworowe, które barwią się negatywnie pod
względem przeciwciała CONFIRM anti-S100 (4C4.9) Primary Antibody przy użyciu
zestawu iView DAB Detection mogą barwić się pozytywnie przy użyciu systemów
detekcyjnych wymienionych w ulotce dołączonej do opakowania.
Obserwowano pozytywne barwienie mięśnia gładkiego.
CHARAKTERYSTYKA ROBOCZA
Przeprowadzono badania barwienia odczynnikiem pod kątem jego swoistości, czułości
i powtarzalności, a wyniki zostały zamieszczone w Tabeli 4, Tabeli 5 oraz w części
Powtarzalność.
* Odczynnik blokujący (P/N 760-219)
2016-10-10
FT0700-410m
2/4
18060PL Rev D
Swoistość
Tabela 4. Swoistość przeciwciała CONFIRM anti-S100 (4C4.9) Primary Antibody
oceniano na podstawie badania próbek tkanek zdrowych, po ich utrwaleniu w formalinie
i zatopieniu w parafinie.
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Tkanka
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Mózg
3/3
Grasica
0/3
Móżdżek
3/3
Szpik kostny
0/3
Nadnerczea
2/3
Płuco
Jajnik
0/3
Trzustkab
2/3
Nowotwór
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Rak zarodkowy
0/1
Rak rdzeniowy tarczycy
1/1
Rak brodawkowaty tarczycy
0/1
Inwazyjny rak przewodowy
0/8
Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuca
0/1
0/3
Rak płaskonabłonkowy płuca
0/2
Mezotelium płuca
0/3
Gruczolakorak płuca
0/1
Serce
0/3
Gruczolakorak przełyku
0/1
Węzeł chłonny
0/3
Przełyk
0/3
Gruczolakorak śluzowy
0/1
Przytarczyce
0/3
Żołądek
0/3
Gruczolakorak jelita cienkiego
0/1
Przysadka
0/3
Jelito cienkie
0/3
Złośliwy guz podścieliskowy jelita cienkiego
0/1
Jądroc
2/3
Okrężnica
0/3
Gruczolakorak okrężnicy
0/1
Tarczyca
0/4
Wątroba
0/3
Nowotwór z komórek śródmiąższowych okrężnicy
0/1
Sutekd
5/5
Ślinianka
0/3
Gruczolakorak (odbytu)
0/1
Śledziona
0/3
Nerka
0/3
Złośliwy guz podścieliskowy odbytu o umiarkowanej złośliwości
0/1
Migdałek
0/3
Gruczoł krokowy
0/3
Rak wątrobowokomórkowy
0/1
Endometrium
0/3
Szyjka macicy
0/3
Wątrobiak zarodkowy
0/1
Mięśnie szkieletowe
0/3
Skóra
Rak jasnokomórkowy nerek
0/1
Gruczolakorak (punktacja Gleasona: 3+3) (gruczołu krokowego)
0/1
Gruczolakorak (punktacja Gleasona: 3+4) (gruczołu krokowego)
0/1
Mięśniak gładkokomórkowy macicy
0/1
Czułość
Gruczolakorak macicy
0/1
Tabela 5. Czułość przeciwciała CONFIRM anti-S100 (4C4.9) Primary Antibody oceniano
na podstawie badania próbek tkanek nowotworowych, po ich utrwaleniu w formalinie
i zatopieniu w parafinie.
Rak jasnokomórkowy macicy
0/1
Rak płaskonabłonkowy szyjki macicy
0/2
Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy
0/1
Czerniak złośliwy odbytnicy
1/1
Rak podstawnokomórkowy
0/1
Rak płaskonabłonkowy skóry
0/1
Nerwiakowłókniak
5/7
Nerwiak płodowy
0/1
Międzybłoniak złośliwy
0/1
Rak nabłonka dróg moczowych
0/1
Mięsak gładkokomórkowy o niskim stopniu złośliwości
0/1
Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych
0/1
Mięsak gładkokomórkowy o umiarkowanym stopniu złośliwości
0/1
Chłoniak rozlany z limfocytów B wielkokomórkowy
0/3
Tkanka
Nerw obwodowy
10/10
Pęcherz moczowy
46/47
0/3
a Komórki koszyczkowe, b komórki wysepek, c komórki Sertoliego, d komórki mięśniowo-
nabłonkowe
Nowotwór
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Glejak
2/2
Oponiak
2/4
Wyściółczak złośliwy
2/2
Skąpodrzewiak
1/1
Surowiczy gruczolakorak jajnika
1/1
Gruczolakorak jajnika
0/1
Rak komórek wyspowych
0/1
Gruczolakorak trzustki
0/1
Nasieniak
0/1
2016-10-10
FT0700-410m
3/4
18060PL Rev D
Nowotwór
Liczba
pozytywnych/
wszystkich
przypadków
Ziarnica złośliwa
0/1
Chłoniak anaplastyczny wielkokomórkowy
0/1
Czerniak złośliwy
41/45
Hiperplazja sutka
5/5
Gruczolakowłókniak sutka
3/3
Inwazyjny rak zrazikowy
0/2
Choroba Pageta (sutek)
0/1
Tłuszczakomięsak
8/8
Skąpodrzewiakogwiaździak
1/1
Gwiaździak
2/2
Glejakomięsak
1/1
Chłoniak z limfocytów T
1/1
Złośliwy nerwiak
6/20
Niedojrzały guz neuroektodermalny
0/2
Nerwiak osłonkowy
Nerwiak zwojowy
DANE KONTAKTOWE
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
11/12
2/2
Powtarzalność
Przeprowadzono badania powtarzalności dla przeciwciała CONFIRM anti-S100 (4C4.9)
Primary Antibody w celu określenia:
•
odtwarzalności w obrębie jednej lub kilku serii na aparacie BenchMark ULTRA;
•
odtwarzalności wyników w obrębie platformy za pomocą urządzeń BenchMark GX,
BenchMark XT i BenchMark ULTRA;
•
odtwarzalności między platformami oraz między urządzeniami BenchMark GX,
BenchMark XT oraz BenchMark ULTRA.
Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy.
PIŚMIENNICTWO
1.
2.
3.
4.
Taylor RT and Cote RJ. Immunomicroscopy: A Diagnostic Tool for the Surgical
Pathologist, 2nd Edition. Philadelphia: W.B. Saunders Company; 1994.
True L. Atlas of Diagnostic Immunohistopathology. Philadelphia: J.B. Lippincott
Company; 1990.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong
Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of
Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002.
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
BENCHMARK, CONFIRM, OPTIVIEW, ULTRAVIEW i VENTANA są znakami towarowymi
firmy Roche.
Wszystkie pozostałe znaki towarowe stanowią własność odpowiednich właścicieli.
© 2016 Ventana Medical Systems, Inc.
2016-10-10
FT0700-410m
4/4
18060PL Rev D