Jak zrobić bufor TBE — protokół

Jak zrobić bufor TBE — protokół
TBE jest buforem do elektroforezy, który wykorzystuje się najczęściej do
elektroforezy kwasów nukleinowych (DNA i RNA). Idealnie nadaje się do
elektroforezy na żelu agrozowym, jak i na żelu poliakrylamidowym kwasów
nukleinowych krótszych fragmentów DNA; najlepiej poniżej 600bp.
Dłuższe fragmenty, szczególnie powyżej 1000bp, warto rozpuszczać w
buforze TAE, który posiada niższą pojemność buforującą oraz wyższe
przewodnictwo elektryczne od buforu TBE.
TBE jest świetnym buforem do rozdziału krótszych produktów
źródło własne, dom, publ.
W przypadku, kiedy decydujesz się na reamplifikację prążka, nigdy nie zawieszaj
go w TBE (tylko, na przykład, w wodzie). TBE ze względu na zawartość w swoim
składzie kwasu borowego jest inhibitorem wielu enzymów (choćby polimeraz,
ligaz czy restryktaz).
JAK ZROBIĆ 10xTBE (1 litr).
Co musisz mieć:
1. Woda destylowana (zwykła lub ddH2O)
2. Tris (np. Sigma)
3. Kwas borowy (np. Sigma, Prochem).
4. EDTA (np. Sigma)
Do 750-800 ml najlepiej destylowanej wody dodaj:
108 g Tris
55 g kwasu borowego
40 ml zrobionego wcześniej 0,5 M EDTA (pH 8.0).
Uzupełnij objętość wodą do 1000ml, przesącz, żeby uniknąć krystalizowania.
Przechowuj bufor w lodówce, w zamkniętej szklanej butelce, w temperaturze od 4
do 8 °C.
Żeby przygotować 1xTBE, którego będziesz używać do elektroforezy,
rozcieńcz powyższy roztwór TBE — 10 razy, czyli naprzykład 100ml
odmierzonego roztworu 10xTBE dopełnij wodą do 1000ml. Pamiętaj, żeby
bufor zamieszać po dopełnieniu wodą.
Nie zapominaj o tym, że EDTA rozpuszcza się w wodzie TYLKO w pH 8.0.
Ostrożnie ustawiaj pH trakcie mieszania roztworu — jedna kropla NaOH, która
spowoduje przekroczenie pH 8.0 sprawi, że Twój roztwór EDTA będzie do
wyrzucenia a praca (i odczynniki) pójdą na marne.
Data publikacji: 29.07.2015r.