instrukcja wykonania testu

INSTRUKCJA WYKONANIA TESTU
Zestaw diagnostyczny LATEKS STAPHYLOCOCCUS AUREUS przeznaczony jest do
identyfikacji szczepów Staphylococcus aureus (w tym metycylinoopornych – MRSA)
wyrastających na podłożu stałym. Zasadą testu jest połączenie aglutynacji lateksowej z
hemaglutynacją.
W teście wykrywana jest:
obecność białka A i innych swoistych antygenów
S. aureus (aglutynacja lateksowa)
obecność czynnika zlepnego – clumping factor – w odczynie hemaglutynacji.
ZESTAW PRZEZNACZONY JEST DO BADAŃ Z UŻYCIEM MATERIAŁU
POCHODZENIA LUDZKIEGO (KLINICZNEGO).
SKŁAD ZESTAWU LATEKS STAPHYLOCOCCUS AUREUS
Odczynnik diagnostyczny
Odczynnik kontrolny
Instrukcja wykonania testu
1 x 3 ml
1 x 3 ml
Butelki z odczynnikami wyposażone są w zakrętki z pipetami (zakraplaczami)
umożliwiającymi dozowanie kropli o objętości 25-27 μl.
WYKONANIE TESTU
Test należy wykonywać z 18 – 24 godzinną czystą hodowlą badanego szczepu gronkowca
na jednej z następujących pożywek: agar Mueller-Hintona, Tryptic Soy Agar, Columbia agar,
Columbia agar z krwią, agar odżywczy lub agar odżywczy z krwią; przy użyciu
mikroskopowych szkiełek podstawowych. Odczynniki należy wyjąć z chłodni na okres
wystarczający do osiągnięcia temperatury pokojowej, a bezpośrednio przed użyciem
dokładnie wymieszać przez energiczne wstrząsanie butelkami. Następnie należy otworzyć
każdą butelkę; znajdujące się w pipetach pozostałości odczynników wprowadzić do
buteleczek i powtórnie wymieszać.
Na dokładnie umyte mikroskopowe szkiełko podstawowe należy nanieść 1 kroplę
odczynnika diagnostycznego oraz 1 kroplę odczynnika kontrolnego tak, aby nie stykały się ze
sobą. Następnie w każdej kropli (rozpoczynając od odczynnika kontrolnego) należy
rozprowadzić ezą (w ciągu 10 – 15 sekund) masę bakteryjną pobraną z 1 – 2 dużych kolonii
lub odpowiednio większej liczby kolonii średnich i małych.
Ruchem kolistym delikatnie kołysać szkiełkiem przez 1 minutę. Odczytać wynik reakcji.
WYNIKI I ICH INTERPRETACJA
Wynik ujemny
Brak reakcji zlepnej w kroplach odczynnika diagnostycznego i kontrolnego po 1 minucie
kołysania bakterii z odczynnikami.
Wynik dodatni
Dodatni wynik testu charakteryzuje się hemaglutynacją krwinek czerwonych występującą
z reguły podczas rozprowadzania masy bakteryjnej w kropli odczynnika diagnostycznego
i/lub wystąpieniem białego (lekko różowego) aglutynatu cząstek lateksu w ciągu 1 minuty
kołysania bakterii z tym odczynnikiem. Brak reakcji z odczynnikiem kontrolnym.
Warianty dodatniego wyniku:
Przypadek I:
Występuje zarówno aglutynacja krwinek jak i cząsteczek lateksu. W kropli odczynnika
diagnostycznego powstają duże brunatne aglutynaty krwinek jak i drobniejsze białe lub lekko
różowe aglutynaty lateksu. Wystąpienie tych reakcji zlepnych świadczy o obecności clumping
factor oraz białka A i/lub innych swoistych dla S. aureus białkowych antygenów.
Przypadek II:
W kropli odczynnika diagnostycznego występuje tylko hemaglutynacja krwinek –
aglutynat koloru brunatnego. Pojawienie się tej aglutynacji świadczy o obecności czynnika
zlepnego (clumping factor).
Przypadek III:
W kropli odczynnika diagnostycznego występuje tylko aglutynacja cząstek lateksu –
aglutynat biały lub lekko różowy. Aglutynacja cząstek lateksu wskazuje na obecność białka A
występującego u większości szczepów S. aureus lub/i obecności innych swoistych antygenów
białkowych na powierzchni komórek badanego izolatu.
Uwagi:
1.
Jeżeli aglutynacja występuje zarówno z odczynnikiem diagnostycznym jak i kontrolnym
oraz gdy zaobserwuje się niecharakterystyczne strąty różniące się wyglądem od
typowego aglutynatu – badanie należy powtórzyć po ponownym rozsiewie badanego
szczepu. Ponowne wystąpienie reakcji zlepnej z odczynnikiem kontrolnym wyklucza
możliwość interpretacji wyniku badania danego izolatu w teście.
2. W przypadku pojawienia się:
bardzo słabej aglutynacji z odczynnikiem diagnostycznym,
bardzo słabej aglutynacji z odczynnikiem diagnostycznym i kontrolnym,
efektu zbijania komórek,
należy ponownie rozsiać badany szczep na podłoże stałe, a następnie wykonać probówkowy
odczyn na obecność koagulazy, przeprowadzić biochemiczną identyfikację szczepu i
ewentualnie powtórzyć test lateksowy
CZUŁOŚĆ I SWOISTOŚĆ TESTU
1. Czułość testu
- Odczynnik diagnostyczny aglutynuje w ciągu 1 min. z zawiesiną bakteryjną wzorcowych
szczepów S. aureus w tym metycylinoopornych o zawartości 6 x 108 komórek/ml i większej.
2. Swoistość testu
- Odczynnik diagnostyczny nie aglutynuje w ciągu 1 min. z zawiesiną bakteryjną szczepów
S. epidermidis o zawartości 1 x 1010 komórek/ml i mniejszej.
- Odczynnik kontrolny nie aglutynuje w ciągu 1 min. z zawiesinami bakteryjnymi
wzorcowych szczepów S. aureus w tym metycylinoopornych oraz szczepów S. epidermidis
o zawartości 1 x 1010 komórek/ml i mniejszej.
- Hemaglutynacja krwinek może również wystąpić w przypadku izolacji innych niż S. aureus
clumping factor dodatnich gatunków takich jak: S. intermedius, S. lugdunensis i S.
schleiferi subsp. schleiferi.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
3.
4.
5.
Odczynniki wchodzące w skład zestawu służą jedynie do diagnostyki in vitro.
Zachować środki ostrożności przewidziane przy pracy z materiałem zakaźnym.
Należy unikać kontaktu odczynnika ze skóra lub z błonami śluzowymi.
W przypadku kontaktu ze skóra lub błoną śluzową miejsce przemyć dużą ilością wody.
Pozostałości odczynników traktować jako odpady medyczne o kodzie 18 01 07.
UWAGI
-
-
Przedłużenie czasu kołysania próbki z odczynnikami ponad zalecaną 1 minutę, może
prowadzić do uzyskania nieswoistych reakcji.
Użyte do badania szkiełka mikroskopowe należy traktować jak materiał zakaźny – po
wykonaniu badania poddać je działaniu odpowiednich środków dezynfekcyjnych.
Aktywność odczynników należy raz w miesiącu sprawdzać przy użyciu wzorcowych
szczepów S. aureus w tym metycylinoopornych. Nie używać odczynników po upływie
terminu ważności.
Odczynniki wchodzące w skład zestawu należy przechowywać w temperaturze od +4°C
do +8°C i chronić przed zamrożeniem.
Odczynniki po zamrożeniu nie nadają się do użycia.
Odczynniki wchodzące w skład zestawu zawierają mniej niż 0,05% tiomersalu i mniej
niż 0,01% azydku sodu jako środka konserwującego.
ZESTAW DIAGNOSTYCZNY LATEKS
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
P. W. BIOMEX Spółka z o.o.
30-009 Kraków, ul. Friedleina 4-6, lok. 117
DATA AKTUALIZACJI: 02.2015
DO DIAGNOSTYKI IN VITRO