Struktura kropli lipidowych

Błona komórkowa neuronu w TEM
Grubość: 5 nm
1
2015-11-29
Błona komórkowa neuronu (x436 tys.)
2
2015-11-29
Struktura fosfolipidów
fosfatydylocholina
3
2015-11-29
Diagram dwuwarstwy lipidowej
4
2015-11-29
Cholesterol w błonie komórek
zwierzęcych
5
2015-11-29
Cholesterol
6
2015-11-29
7
2015-11-29
Stężenie jonów
w mM
wewnątrz kom.
Na+
K+
Mg2+
Ca2+
H+
Cl-
5-15
140
0,5
10-4
10-7,2M
5-15
zewnątrz kom.
145
5
1-2
1-2
10-7,4M
110
8
2015-11-29
Obraz błony w metodzie freeze-fracture
9
2015-11-29
Metoda freeze-fracture
10
2015-11-29
Metoda freeze-fracture
zamrożenie tkanki
 rozłupnie preparatu
 pokrycie odsłoniętej powierzchni warstwą węgla
 trawienie tkanki kwasem
 osadzenie repliki na siatce i pokrycie jej warstwą
złota
 obserwacja w TEM i wykonanie zdjęć

11
2015-11-29
Połączenia międzykomórkowe
12
2015-11-29
Obraz połączenia szczelinowego w TEM
13
2015-11-29
Model połączenia szczelinowego
14
2015-11-29
Struktura koneksyn
15
2015-11-29
Typy koneksonów
16
2015-11-29
Połączenia szczelinowe w mięśniówce
macicy świni (Cx-43 z Cy3)
circ
long
17
2015-11-29
18
2015-11-29
Połączenia szczelinowe w siatkówce
myszy
19
2015-11-29
Połączenie zamykające w TEM
20
2015-11-29
Model połączenia zamykającego
21
2015-11-29
Erytrocyty
22
2015-11-29
EDTA (kwas wersenowy)
Sól disodowa: wersenian sodu
Środek kompleksujący
kationy metali np.:
Ca2+, Mg2+ Fe3+
Kompleks chelatowy EDTA z jonem metalu Me
23
2015-11-29
Rozpuszczanie błony komórkowej
erytrocytów myszy
24
2015-11-29
Transport przez błonę komórkową
25
2015-11-29
26
2015-11-29
27
2015-11-29
Dyfuzja prosta
28
2015-11-29
Ciśnienie osmotyczne
P = cRT
R = 8,314 [J/(Kmol)] = 0,0821 [dm3atm/(Kmol)]
T = 309 [K] , c – stężenie molowe
Stężenie molowe
Wody destylowanej: 55,56 mol/dm3
Wody w roztworze soli fizjologicznej: 55,06 mol/dm3
Więc: P = 12,68 atm
29
2015-11-29
30
2015-11-29
Micele i liposomy
31
2015-11-29
Liposomy – PEG-Po
5-(4’-acryloyloxyphenyl)-10,15,20-tri(p-tolyl) porphyrin
32
2015-11-29
Struktura kropli lipidowych
TEM
Fujimoto i wsp. 2011
Skład kropli lipidowych
Rdzeń:
Tri - trójglicerydy
eCh - estry cholesterolu
Monowarstwa lipidowa:
Ph - fosfolipidy
fosfatydylocholina
Ch - cholesterol
Struktura triglicerydu
Białka kropli lipidowych
Strukturalne białka PAT:
perylipiny, adipofilina, TIP47
Enzymy syntezy lipidów:
syntaza acylo-CoA
acylotransferaza diacyloglicerolu
Lipazy:
hormonalnie zależna lipaza
adipocytowa lipaza triglicerydów
Białka transportu pęcherzyków:
Rab, ARF1, SNARE, białka motoryczne
Funkcje kropli lipidowych
1. magazynowanie lipidów
2. magazynowanie białek (np. histonów)
3. wewnątrzkomórkowy transport lipidów i białek
4. kontrola metabolizmu lipidów
Komórka tłuszczowa - adipocyt
LD w komórkach  wysp Langerhansa trzustki
LD w hepatocytach
Krople tłuszczu w zarodkach świni
40
2015-11-29
Oil red O
41
2015-11-29
Drożdże
Bodipy FL
Goodman i wsp. 2006
Nicień
Czerwień Nilu
Ruwkun 2009
Przygotowanie materiału do
mikroskopu świetlnego
1. Uśmiercenie zwierząt i preparacja wycinków (szybko)
2. Utrwalanie tkanek i komórek
(zwykle w temp. 4ºC lub pokojowej, od kilkudziesięciu minut do paru dni w
zależności od użytego utrwalacza i wielkości wycinka)
3. Odwodnienie utrwalonego materiału
(w etanolu lub w acetonie, od kilkunastu minut do kilku godzin)
4. Przepojenie
5. Zatopienie w parafinie (lub w innych mediach)
6. Skrawanie skrawków
8. Odparafinowanie skrawków
9. Uwodnienie skrawków
10. Barwienie
11. Odwodnienie skrawków
12. Zabezpieczenie preparatów
43
2015-11-29
Metody barwienia (kontrastowania)
1.
2.
3.
4.
Histologiczne
Histochemiczne
Reakcje enzymatyczne
Immunocytochemiczne
44
2015-11-29
Trzustka psa, pęcherzyki końcowe części
egzokrynowe.
Powiększenie: 960. Barwienie: H+E
45
2015-11-29
RER komórka pęcherzykowa trzustki
nietoperza
46
2015-11-29
Komórki nerwowe zwoju rdzenowego kota. Powiększenie: 960.
Barwienie: osmowanie wg. Kolatscheva + safranina
47
2015-11-29
Komórki nabłonkowe kanalików nerwowych. Powiększenie: 960
Barwienie: met. Fernandez-Galiano
48
2015-11-29
Ad. 2. Reakcje histochemiczne
Wykrywanie ściśle określonych składników komórkowych
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
kationów (AS, Zn, Al., Mg, Cu, K, Na, Ca, Fe)
anionów, węglanów i fosforanów
białek i aminokwasów
histonów
kwasów nukleinowych
lipidów
wielocukrów
hormonów
Przykład: reakcja PAS na glikogen
49
2015-11-29
Reakcja PAS (Periodic Acid Schiff)
Reakcja polega na utlenieniu kwasem
nadjodowym sąsiadujących ze sobą
grup OH. Powstałe w łańcuchu
wielocukrów grupy aldehydowe
reagują z odczynnikiem Shiffa dając
purpurowy produkt reakcji.
WYKONANIE REAKCJI:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Odparafinowane skrawki płukać w 70%
alkoholu
5 min. w roztworze kw. Nadjodowego
Przemyć w 70% alkoholu
1 min. w płynie redukującym
Płukanie w 70% alkoholu
Barwienie w odczynniku Schiffa
Płukanie w bieżącej wodzie
Odwodnienie
50
2015-11-29
Tkanka łączna prowadząca naczynia krwionośne w śliniance
podżuchwowej. Powiększenie: 200. Barwienie: PAS.
51
2015-11-29
52
2015-11-29
Oil red O
53
2015-11-29
Czterotlenek osmu
54
2015-11-29
Histochemiczna analiza lipidów w zarodkach świni
Czerwień oleista
Siarczan błękitu Nilu
zygota  późna blastocysta
rozwój in vivo i in vitro
cytoplazma:
wolne kwasy tłuszczowe
krople tłuszczu:
wolne kwasy tłuszczowe
lipidy nasycone
lipidy nienasycone
nienasycone estry
Osm - etanol
Sudan czarny B
Romek M, Gajda B, Krzysztofowicz E, Smorag Z. (2010) Theriogenology 74: 265–276
Reakcje enzymatyczne - kwaśna fosfataza
56
2015-11-29
Reakcje immunocytochemiczne
57
2015-11-29
Cytokeratin 7, nowotwór embrionalny
58
2015-11-29