Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1 Klon EP12 Nr kat

Monoclonal Rabbit
Anti-Human
Cyclin D1
Klon EP12
Nr kat. M3642
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Odczynnik Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, klon EP12, przeznaczony jest do stosowania w
immunohistochemii. Przeciwciała przeciwko cyklinie D1 są przydatne w identyfikacji chłoniaków z komórek
płaszcza (1-3). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania
morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez
wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem historii klinicznej pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy
PRAD-1, CCND1, Bcl-1 (1).
Streszczenie i
informacje ogólne
Cyklina D1 jest białkiem o masie 36 kDa kodowanym przez gen CCND1 (bcl-1) zlokalizowany na chromosomie
11q13. Cyklina D1 wiąŜe się i aktywuje cyklinozaleŜne kinazy (CDK) CDK4 i CDK6 (1,4,5). Białko to działa jako
zaleŜny od cyklinozaleŜnych kinaz regulator cyklu komórkowego, wywołując fosforylację i inaktywację białka
retinoblastomy, co pozwala na przejście fazy G1-S cyklu komórkowego (1,4,5). Cyklina D1 odgrywa takŜe rolę w
cyklu komórkowym lub funkcjach niezaleŜnych od cyklinozaleŜnych kinaz, w tym łączenie się i regulację
rozmaitych czynników transkrypcji oraz koregulatorów transkrypcji. Wykazano ponadto, Ŝe cyklina D1 ma udział
w regulacji metabolizmu komórkowego, róŜnicowaniu komórek tłuszczowych i migracji komórek (1,4,5).
Nadekspresja cykliny D1 jest związana z rozwojem nowotworu, stwierdzono zwiększenie poziomu i/lub
nadekspresję cykliny D1 w róŜnych rodzajach nowotworów ludzkich, w tym w chłoniakach z komórek płaszcza,
rakach piersi, rakach płaskonabłonkowych głowy i szyi oraz rakach przełyku (1,6). Wśród nowotworów
limfoidalnych ekspresję cykliny D1 obserwowano w podzbiorze przypadków przewlekłej białaczki limfocytarnej,
chłoniaka drobnokomórkowego limfocytarnego i szpiczaka mnogiego. Stwierdzono, Ŝe następujące nowotwory
są ujemne w teście na ekspresję cykliny D1: rozlany chłoniak z duŜych komórek B, chłoniak strefy brzeŜnej
pozawęzłowy typu MALT, chłoniak pęcherzykowy, chłoniak strefy brzeŜnej, chłoniak limfoplazmatyczny (z linii
komórkowych 1T i 1B), pozawęzłowy chłoniak z komórek NK/T, chłoniak obwodowy z komórek T, pozostałe
nowotwory osobno niewymienione, anaplastyczny chłoniak wielokomórkowy, chłoniak ziarniczy (7, 8).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub
następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Procedura barwienia,
6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Królicze przeciwciała monoklonalne dostarczane są w formie ciekłej jako przeciwciała wyizolowane ze względu
na powinowactwo w buforze fosforanowym o stęŜeniu 0,02 mol/l, pH 6,9–7,2, zawierający NaCl w stęŜeniu
0,1 mol/l i azydek sodu w stęŜeniu 0,015 mol/l. Produkt zawiera białko stabilizujące.
Klon: EP12
StęŜenie króliczych IgG: Patrz: informacja podana na etykiecie fiolki.
StęŜenie białek w róŜnych partiach moŜe się róŜnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. W celu
zapewnienia jednolitości odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy uŜyciu róŜnych partii
produktu, miano kaŜdej partii jest porównywane i dostosowywane do partii referencyjnej.
Immunogen
Syntetyczny peptyd odpowiadający resztom w pobliŜu końca C ludzkiej cykliny D1.
Swoistość
W testach Western blot lizatów komórkowych MCF7 przeciwciało barwi główny prąŜek o masie cząsteczkowej
ok. 36 kD odpowiadający oczekiwanej masie cząsteczkowej cykliny D1.
Środki ostroŜności
1.
Do stosowania przez wyszkolony personel.
2.
Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie
wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się
azydku metalu w kanalizacji.
3.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
Przechowywanie
(121298-002)
4.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5.
Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywać w temperaturze 2-8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
P01466PL_002_M3642/2011.04 str. 1/3
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się
problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków
zatapianych w parafinie. Wymagane jest poddanie preparatów tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER).
Optymalne wyniki uzyskuje się przy zastosowaniu odczynnika EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(nr kat. K8004) i techniki połączonego odparafinowania/HIER typu „3 w 1” w aparatach Dako PT Link
(nr kat. PT100/PT101). Patrz instrukcje w Podręczniku uŜytkownika aparatu PT Link. Dla aparatów PT Link naleŜy
stosować następujące parametry: Temperatura wstępnego ogrzewania: 65°C; temperatura i czas odmaskow ania
antygenu: 97°C przez 20 (±1) minut; schłodzi ć do 65°C. Wyj ąć stojak na szkiełka ze zbiornika PT i niezwłocznie
zanurzyć szkiełka w słoju lub zbiorniku (np. PT Link Rinse Station, nr kat. PT109) zawierającym rozcieńczony bufor
EnVision™ FLEX Wash Buffer (20X) (nr kat. K8000/K8010) w temperaturze pokojowej. Zostawia szkiełka w buforze
Wash Buffer na 1–5 minut. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe naleŜy poddać odwodnieniu,
oczyszczeniu i osadzić za pomocą środka do trwałego osadzania preparatu.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Skrawki mroŜone i rozmazy komórkowe: Nie zaleca się stosowania tego przeciwciała do znakowania skrawków
mroŜonych.
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciała Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, klon EP12, nr kat. M3642, mogą być
uŜywane w rozcieńczeniu 1:100 na poddanych wstępnej obróbce utrwalonych w formalinie skrawkach
zatopionych w parafinie, przy 20-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej. Zaleca się rozcieńczenie
przeciwciał odczynnikiem Antibody Diluent with Background Reducing Components (nr kat. S3022). Nie zaleca
się stosowania odczynnika EnVisionTM FLEX Antibody Diluent (nr kat. K8006) z tymi przeciwciałami. Są to
jednak wyłącznie wytyczne. Optymalne warunki mogą się róŜnić w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu
jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to
odczynnik Dako Rabbit Immunoglobulin Fraction (Solid-Phase Absorbed) (nr kat. X0936), rozcieńczony do tego
samego stęŜenia króliczych IgG, co przeciwciało pierwotne. O ile nie potwierdzono stabilności rozcieńczonych
przeciwciał i kontroli ujemnej w rzeczywistej procedurze wykonania odczynu, zaleca się rozcieńczenie tych
odczynników bezpośrednio przed uŜyciem. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów
naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka działania”.
Wizualizacja: Zaleca się uŜycie odczynnika EnVision™ FLEX, High pH (nr kat. K8000/K8010/K8023/K8024) przy
stosowaniu trwającego 20 minut okresu inkubacji w temperaturze pokojowej. Postępować zgodnie z procedurą
dostarczoną z zestawem do wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania barwień immunohistochemicznych w systemach
zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer, Autostainer Plus i Autostainer Link.
Interpretacja
wybarwienia
Przeciwciała dają głównie odczyn jądrowy.
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe: (9)
Rodzaj tkanki
(liczba testowanych
przypadków)
Grasica (3)
Gruczoł krokowy (3)
Gruczoły sutkowe (2)
Jajniki (3)
Jądra (3)
Jelito cienkie (3)
Jelito grube (3)
Komórki międzybłonka (3)
Macica (3)
Mięsień sercowy (3)
Mięśnie szkieletowe (3)
Migdałki (3)
Mózgowie (3)
MóŜdŜek (3)
Nadnercza (3)
Nerki (3)
(121298-002)
Składniki komórkowe dające dodatni odczyn
3/3 Komórki limfoidalne (<1%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka gruczołowego i komórki zrębu (10%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka gruczołowego i komórki zrębu (<5%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka gruczołowego (<10%), komórki zrębu (<5%), jądrowy
1/2 Komórki nabłonka przewodów (<10%), jądrowy
1/2 Komórki nabłonka przewodów (<1%), jądrowy
2/3 Komórki zrębu jajnika (nieliczne), jądrowy
3/3 Komórki zrębu (<1%), jądrowy
3/3 Komórki nabłonka mieszka (40–50%), jądrowy
3/3 Komórki nabłonka (20–30%), jądrowy, komórki zrębu (nieliczne), jądrowy
0/3
3/3 Komórki nabłonka endometrium i komórki zrębu (<5%), jądrowy
1/3 Komórki mięśnia sercowego (<10%), jądrowy, komórki tkanki łącznej i zrębu
(<5%), jądrowy
1/3 Tkanka łączna (<5%), jądrowy
0/3
3/3 Komórki nabłonka (30%), jądrowy, limfocyty (nieliczne), jądrowy
2/3 Nieliczne komórki dodatnie (<1%), jądrowy
2/3 Astrocyty (<1%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka (<1%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka (<5%), jądrowy
2/3 Komórki nabłonka (10–20%), jądrowy
P01466PL_002_M3642/2011.04 str. 2/3
Nerwy obwodowe (3)
Płuca (3)
Przełyk (3)
Przysadka mózgowa (3)
Przytarczyce (3)
Skóra (3)
Szpik kostny (3)
Szyjka macicy (2)
Śledziona (3)
Ślinianki (3)
Tarczyca (3)
Trzustka (3)
Wątroba (3)
śołądek (3)
1/3 Komórki nabłonkowe mezenchymalne (<1%), jądrowy
1/3 Komórki Schwanna (<5%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka pęcherzyków (30%)
2/3 Komórki nabłonka pęcherzyków (10–20%)
3/3 Komórki nabłonka (20–30%), jądrowy, komórki zrębu (nieliczne), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka (<10%), jądrowy
2/3 Komórki nabłonka (40%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka (<1%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka (<5%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka (30%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka płaskiego (30–40%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka płaskiego (<5%), jądrowy
1/3 Komórki szpikowe (<1%), jądrowy
1/2 Komórki nabłonka warstwy przypodstawnej (10%), jądrowy
1/2 Komórki nabłonka warstwy przypodstawnej (40%), jądrowy
1/3 Limfocyty i komórki brzeŜne (10%), jądrowy
2/3 Limfocyty i komórki brzeŜne (5%), jądrowy
2/3 Komórki nabłonka gruczołowego (<5%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka gruczołowego (10%), jądrowy i cytoplazmatyczny
2/3 Komórki nabłonka pęcherzyków i komórki zrębu (<1%), jądrowy
3/3 Komórki nabłonka (25–30%), jądrowy
1/3 Komórki nabłonka miąŜszu (20%), jądrowy
2/3 Komórki nabłonka miąŜszu (<1%), jądrowy
2/3 Komórki nabłonka (<5%), jądrowy
Uwaga: W większości badanych tkanek prawidłowych obserwowano dodatni odczyn komórek nabłonka.
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Donnellan R, Chetty R. Cyclin D1 and human neoplasia. J Clin Pathol: Mol Pathol 1998;51:1-7.
De Boer CJ, Schuuring E, Dreef E, Peters G, Bartek J, Kluin PM, van Krieken HJM. Cyclin D1 protein
analysis in the diagnosis of mantle cell lymphoma. Blood 1995;86:2715-23.
Falini B, Martelli MP, Tiacci E, Ascani S, Thiede C, Pileri SA. Immunohistochemical surrogates for genetic
alterations of CCDN1, PML, ALK, and NPM1 genes in lymphomas and acute myeloid leukemia. Best
Practice & Research Clin Haematol 2010:23:417-31.
Lukas J, Pagano M, Staskova Z, Draetta G, Bartek J. Cyclin D1 protein oscillates and is essential for cell
cycle progression in human tumour cell lines. Oncogene 1994;9:707-18.
Fu M, Wang C, Li Z, Sakamaki T, Pestell RG. Minireview: Cyclin D1: normal and abnormal functions.
Endocrin 2004;145:5439-47.
Reis-Filho JS, Savage K, Lambros MBK, James M, Steele D, Jones RL, et al. Cyclin D1 protein
overexpression and CCND1, PML, ALK, and NPM1 genes in lymphomas and AML. Clin Haematology.
2006:19:999-1009.
Cheuk W, Wong K, Wong C, Chan J. Consistent immunostaining for Cyclin D1 can be achieved on a
routine basis using a newly available rabbit monoclonal antibody. Am J Surg Pathol 2004;28:801-7.
Rossi S, Laurino L, Furlanetto A, Chinellato S, Orvieto E, Canal F, et al. Rabbit monoclonal antibodies: A
comparative study between a novel category of immunoreagents and the corresponding mouse monoclonal
antibodies. Am J Clin Pathol 2005;124:1-8.
M3642 (IHC003-D03559).
Przeciwciała Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, klon EP12, są produkowane przez firmę Epitomics Inc.
przy uŜyciu technologii produkcji monoklonalnych przeciwciał króliczych chronionej patentami nr 5,675,063 oraz
7,402,409.
Wydanie 05/11
(121298-002)
P01466PL_002_M3642/2011.04 str. 3/3