Dako EnVision™+ Dual Link System-HRP Nr kat. K4063 15

Dako
EnVision™+ Dual Link System-HRP
Nr kat. K4063
15 ml
Nr kat. K4061 10x11 ml
Gotowy do użycia
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
EnVision+ Dual Link System-HRP został optymalnie rozcieńczony do stosowania z przeciwciałami pierwotnymi mysimi i króliczymi w
procedurach immunohistochemicznych, w oparciu o metodę znakowanego polimeru (Labelled Polymer). Poniżej przedstawiono listę
zalecanych kompatybilnych produktów firmy Dako.
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Materiały wymagane, ale niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie
preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia
metody.
Streszczenie i informacje ogólne
W systemie EnVision+ Dual Link System-HRP stosowana jest dwuetapowa technika wykonywania odczynów immunohistochemicznych
(IHC). W opisywanym systemie wykorzystywany jest polimer znakowany peroksydazą chrzanową (HRP) skoniugowany z przeciwciałami
wtórnymi. Znakowany polimer nie zawiera awidyny ani biotyny. Dzięki temu uzyskano wyraźne zmniejszenie lub wyeliminowano nieswoisty
odczyn wywołany endogennym wiązaniem awidyny i biotyny w wątrobie, nerkach, tkance chłonnej i przy stosowaniu skrawków
mrożakowych.
Dostarczany odczynnik
Odczynnik zawiera wtórne przeciwciała kozie skierowane przeciwko antygenom mysim i króliczym, skoniugowane z polimerem znakowanym
peroksydazą, w buforze Tris-HCl z dodatkiem białka stabilizującego i substancji o działaniu przeciwbakteryjnym.
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych użytkowników.
2. Unikać zanieczyszczeń mikrobiologicznych odczynnika. W przeciwnym razie może dojść do nasilenia nieswoistego barwienia.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować odpowiednie procedury
postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
6. Karta charakterystyki substancji niebezpiecznej jest dostępna na żądanie.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C.
Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności odczynników, dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów, należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W razie uzyskania nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można
wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, jeżeli podejrzewa się problem z zestawem, należy się skontaktować z działem pomocy
technicznej firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Przed wykonaniem odczynu IHC tkanki należy utrwalić i poddać obróbce. Utrwalenie zabezpiecza przed autolizą i rozkładem wycinków
tkanek, utrzymuje antygenowość, zwiększa współczynnik załamania światła przez struktury tkankowe i zwiększa odporność elementów
komórkowych na obróbkę. Obróbka tkanki polega na odwodnieniu, usunięciu środków odwadniających, przepojeniu substancją zatapiającą,
zatopieniu i wykonaniu wycinków. Utrwalacze najczęściej stosowane podczas przygotowania tkanek do diagnostyki IHC przedstawiono w
dokumencie „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych”. Podane informacje mają charakter wyłącznie
orientacyjny. Optymalne procedury muszą zostać ustalone i zweryfikowane przez użytkownika.
Charakterystyka wydajnościowa
Przeciwciała zawarte w produkcie zostały absorbowane w fazie stałej, aby usunąć reagujące krzyżowo przeciwciała przeciwko
immunoglobulinom ludzkim. Przeciwciała kozie skierowane przeciwko antygenom mysim i króliczym poddano oczyszczaniu za pomocą
kolumnowej chromatografii powinowactwa do przeciwciał – odpowiednio – mysich i króliczych. Kozie przeciwciała przeciwko antygenom
mysim obecne na polimerze, reagują ze wszystkimi podklasami mysich IgG oraz z mysimi IgM. Może wystąpić reaktywność krzyżowa z
innymi immunoglobulinami mysimi poprzez łańcuchy lekkie. Kozie przeciwciała przeciwko antygenom króliczym, obecne na polimerze,
reagują z immunoglobulinami króliczymi. Jak określono na podstawie ELISA, produkt ten reaguje w sposób minimalny z ludzkimi Ig.
Występować może jednak reaktywność krzyżowa z Ig innych gatunków.
Peroksydaza chrzanowa (HRP) obecna w polimerze została przygotowana z HRP o wysokoswoistej aktywności. Nieskoniugowane
cząsteczki enzymu usunięto metodą żelowej chromatografii filtracyjnej.
(112904-002)
304870PL_001 p. 1/3
Stosowanie
Odczynnik nadaje się dobrze do dwuetapowych procedur immunohistochemicznych. EnVision+ Dual Link System-HRP dostarczony jest w
postaci gotowej do użycia. Dodatkowe rozcieńczenie odczynnika lub modyfikacje czasu lub temperatury inkubacji mogą prowadzić do
uzyskania błędnych wyników. EnVision+ Dual Link przeznaczony jest do stosowania z gotowymi do użycia przeciwciałami pierwotnymi firmy
Dako lub stężonymi roztworami przeciwciał zoptymalizowanymi przez użytkownika.
Procedura
Procedura automatyczna
Zaprogramować system automatyczny w następujący sposób:
ETAP 1: Wybrać funkcję Protocol Template Auto Program (automatyczne programowanie wzoru protokołu).
ETAP 2: Umieścić odczynniki w statywie na odczynniki w aparacie Dako Autostainer, a następnie napełnić pojemnik na bufor płuczący i
butelki na wodę dejonizowaną.
ETAP 3: Umieścić szkiełka w aparacie Dako Autostainer.
ETAP 4: Rozpocząć serię odczynów.
ETAP 5: Wyjąć szkiełka z aparatu Dako Autostainer.
Procedura ręczna
Wszystkie etapy należy przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Wszystkie odczynniki należy doprowadzić do temperatury pokojowej.
(Dla każdego etapu, zobacz poniższą listę kompatybilnych produktów firmy Dako.)
ETAP 1: BLOKOWANIE ENDOGENNEJ PEROKSYDAZY
Strząsnąć nadmiar buforu. Nanieść wystarczającą ilość odczynnika Dual Endogenous Enzyme Block, aby zakryć próbkę.
Inkubować przez 5–10 minut, w zależności od stężenia enzymu endogennego w badanej tkance.
Ostrożnie przepłukać wodą destylowaną lub roztworem buforowym z butelki na płyn płuczący (nie należy kierować strumienia
płynu bezpośrednio na tkankę), a następnie umieścić preparat w świeżej kąpieli z buforem.
ETAP 2: PRZECIWCIAŁA PIERWOTNE LUB ODCZYNNIK DO KONTROLI UJEMNEJ
Strząsnąć nadmiar buforu i przetrzeć preparaty jak poprzednio. Nanieść optymalnie rozcieńczony roztwór przeciwciał pierwotnych
lub odczynnika do kontroli ujemnej, aż próbka zostanie zakryta. Inkubować przez 30 (±1) minut.
Ostrożnie przepłukać roztworem buforowym z butelki na płyn płuczący (nie należy kierować strumienia płynu bezpośrednio na
tkankę), a następnie umieścić preparat w świeżej kąpieli z buforem.
ETAP 3: ZNAKOWANY POLIMER-HRP
Strząsnąć nadmiar buforu i przetrzeć preparaty jak poprzednio. Dodać tyle polimeru znakowanego peroksydazą, aby zakryć
próbkę. Inkubować przez 30 (±1) minut.
Opłukać preparaty jak w etapie 2 i umieścić w kąpieli z buforem na 5 (±1) minut.
ETAP 4: ROZTWÓR SUBSTRAT-CHROMOGEN
Wytrzeć preparaty jak poprzednio. Nanieść tyle roztworu substrat-chromogen, aby zakryć próbkę. Inkubować przez 5–30 min z
AEC+ lub 5–10 min z DAB+.
Ostrożnie przepłukać wodą destylowaną z butelki (nie kierować strumienia wody bezpośrednio na tkankę). Umieścić pozostały
roztwór substrat-chromogen w pojemniku na materiały niebezpieczne w celu właściwej likwidacji.
ETAP 5: BARWIENIE KONTRASTOWE HEMATOKSYLINĄ (opcjonalnie)
Zanurzyć preparaty w kąpieli z roztworu hematoksyliny. Długość okresu inkubacji zależy od stężenia stosowanego roztworu
hematoksyliny.
Przepłukać w kąpieli z wody destylowanej lub dejonizowanej przez 2–5 minut.
Próbki
Skrawki tkankowe utrwalane w formalinie i zatopione w parafinie, preparaty mrożakowe i rozmazy cytologiczne.
Zalecane kompatybilne produkty firmy Dako
Nr kat. Dako
Nazwa produktu
Gotowe do użycia przeciwciała
pierwotne firmy Dako
Typ produktu
Gotowe do użycia przeciwciała pierwotne do:
EnVision+ Dual Link
EnVision+ i LSAB+
S2003
Dual Endogenous Enzyme Block
Odczynnik blokujący endogenną peroksydazę
S3006
Wash Buffer 10x
Do automatycznych i ręcznych
barwień IHC
Bufor płuczący
S3001
TBS (Tris-Buffered Saline)
Bufor płuczący
S3024
PBS (Phosphate-Buffered Saline)
Bufor płuczący
K3461/K3469
K3467/K3468
AEC+ Ready-to-use
Liquid DAB+
System substratu
(112904-002)
304870PL_001 p. 2/3
Wydanie 05/07
(112904-002)
304870PL_001 p. 3/3