cobas HbA1c Test

06380247001V2
cobas HbA1c Test
Hemoglobina A1c
REF 06378676 190
10
cobas b 101
Polski
Zastosowanie
System cobas b 101 zawiera testy do ilościowego onaczania in vitro
hemoglobiny (%) A1c (DCCT/NGSP) oraz hemoglobiny A1c (mmol/mol)
(IFCC) w ludzkiej krwi włośniczkowej i pełnej krwi żylnej metodą transmisji
fotometrycznej. System cobas b 101 wylicza średnie stężenie glukozy
(eAG). System przeznaczony jest do użytku profesjonalnego w laboratorium
klinicznym lub do stosowania "Przy łóżku pacjenta".
Podsumowanie
Hemoglobina (Hb) jest znajdującym się w erytrocytach, zabarwionym
na czerwono, zawierającym żelazo białkiem. Jej główną funkcją jest
transport tlenu i dwutlenku węgla we krwi. Skład Hb ma wiele wariantów
(jak np. HbA dorosłych czy HbF płodowa) i pochodnych (np. acetylowana,
glikowana). HbA tworzy u dorosłych największą frakcję (> 95 %) i składa
się z 4 łańcuchów białkowych (2 łańcuchy alfa i dwa 2 beta). HbA1c jest
jedną z hemoglobin glikowanych, podfrakcją utworzoną przez przyłączenie
do cząsteczki HbA różnego rodzaju cukrów. Tworzenie się HbA1c zachodzi
dwustopniowo na drodze nieenzymatycznej reakcji glukozy z N-końcową
grupą aminową łańcucha Beta hemoglobiny normalnej dorosłych (HbA).
Pierwsza część reakcji jest odwracalna i prowadzi do powstania niestabilnej
HbA1c. Następnie dochodzi do utworzenia stabilnej HbA1c w drugim etapie
reakcji. W erytrocytach względna ilość HbA przekształcanej w stabilną
HbA1c wzrasta wraz ze wzrostem średniego stężenia glukozy we krwi.
Przemiana w stabilną HbA1c ograniczona jest długością życia erytrocytów
wynoszącą około 100 do 120 dni. W wyniku tego HbA1c odzwierciedla
średni poziom glukozy we krwi w ciągu ostatnich 2 do 3 miesięcy; na
podstawie jej poziomu nie można określić dziennych wahań poziomu
glukozy. Dzięki temu HbA1c umożliwia długoterminowe monitorowanie
stężenia glukozy we krwi u chorych na cukrzycę.1,2,3,4,5,6
Zasada pomiaru
W celu uwolnienia hemoglobiny z erytrocytów próbka krwi rozcieńczana
jest i mieszana z buforem TRIS. Część próbki przenoszona jest do komory
reakcyjnej, w której zostaje zmieszana z laurylosiarczanem sodowym (SLS).
SLS tworzy kompleks SLS-hemoglobina. Stężenie całkowite hemoglobiny
wylicza się oznaczając ilość kompleksu SLS-hemoglobina przy długości
fali 525 nm. Hemoglobina A1c (HbA1c) w następnej części próbki jest
najpierw denaturowana za pomocą żelazicjanku potasu i laurenianu
sacharozy. Zdenaturowana HbA1c łączy się na cząsteczce lateksu z
przeciwciałem anty-HbA1c. Następnie, dzieki reakcji z posiadającym
syntetyczny antygen mogący połączyć się z przeciwciałem anty-HbA1c
odczynnikiem aglutynującym, zachodzi reakcja inhibicji aglutynacji
lateksem. Stężenie HbA1c wyliczane jest poprzez oznaczanie reakcji
inhibicji aglutynacji lateksem przy długości fali 625 nm.
Wynik % hemoglobiny A1c podany zostaje w postaci proporcji stężenia
HbA1c do stężenia hematoglobiny calkowitej.
Odczynniki
Jeden test paskowy zawiera:
Bufor do rozcieńczeń: TRIS (trihydroksymetyloaminometan): 0.94 mg
Hemoliza erytrocytów: Laurylosiarczan sodowy: 0.15 mg
Chlorek sodu: 0.21 mg
Denaturacja: Żelazicyjanek potasu: 60 µg, laurenian sacharozy: 40 µg
Koniugat przeciwciało anty-HbA1c-lateks: 85 µg
Aglutynacja: Koniugat globuliny-glikopeptyd: 2 µg
osuszającego lub jego rozsypania lub inne zanieczyszczenia, szczególnie
w polu nanoszenia krwi, to taki dysk należy wyrzucić. Kontrolę cobas
HbA1c Control nanosi się identycznie jak próbkę krwi.
Stabilność próbki na dysku
Po aplikacji próbki dysk należy natychmiast włożyć natychmiast,
nie później niż 60 sekund od aplikacji. Nalezy postępować zgodnie
z zaleceniami Instrukcji Obsługi.
Przechowywanie i trwałość
Przechowywać w temp. 2-30 ℃, do upływu znajdującej się na opakowaniu
daty ważności. Nie zamrażać. W wypadku przechowywania w lodówce,
przed użyciem ogrzewać test nie otwierając opakowania przez co najmniej
20 minut. Po otwarciu opakowania test należy zużyć w ciągu 20 minut.
Zabezpieczyć test przed bezpośrednim wpływem światła słonecznego.
Nie przechowywać w lodówce testów, których opakowanie jest otwarte.
Pobieranie i przygotowanie materiału
W celu pobrania i przygotowania materiału należy stosować jedynie
przeznaczone do tego probówki lub pojemniki.
Stosować wyłącznie krew włośniczkową pobraną na heparynę litową lub pełną
krew pobraną na K2-EDTA. Nie należy używać innych antykoagulantów ani
dodatków. Próbkę należy nanieść na wyraźnie oznakowane pole dysku. Jeśli
próbka pochodzi z nakłucia żyły lub jest nią materiał kontrolny, do uformowania
kropli należy użyć zakraplacza Dysk wchłania próbkę samoistnie. Nie należy
wcierać próbki w dysk. Nie używać strzykawek. Należy upewnić się, że krew
nie przedostała się poza pole aplikacji dysku i pokrywę zawiasu.
Objętość próbki: 2 µL
Materiały dostarczone w zestawie
REF 06378676190, cobas HbA1c Test, 10 testów
Niezbędne materiały dodatkowe (nie dostarczone w zestawie)
• Jednorazowy nakłuwacz (np. Accu-Chek Safe-T-Pro Plus)
• REF 06380204190, cobas HbA1c Control
• REF 06378668190, analiaztor cobas b 101
• Dysk kontroli optycznej
• Ogólne wyposażenie laboratoryjne (np. pipeta do przenoszenia próbek
dla krwi żylnej, waciki z alkoholem do dezynfekcji miejsca nakłucia)
• Timer
Kalibracja
Metoda standaryzowana wobec metody referencyjnej IFCC do oznaczeń
HbA1c we krwi ludzkiej,7,8 a wyniki oznaczeń mogą być także podawane
wg. DCCT/NGSP, po zastosowaniu odpowiedniego wzoru. Zapewniona
jest spójność pomiarowa każdej serii dysków cobas HbA1c Test z
IFCC. Apara automatycznie wczytuje z wydrukowanego na dysku kodu
kreskowego swoiste dla serii dane kalibracyjne, eliminując tym samym
konieczność wykonywania kalibracji przez użytkownika.
Kontrola jakości
Do kontroli jakości należy stosować cobas HbA1c Control. Częstotliwość i
zakres przeprowadzania kontroli muszą być dostosowane do indywidualnych
wymogów danego laboratorium. Uzyskane wartości winny zawierać się w
wyznaczonych granicach. Wskazane jest, by każde laboratorium opracowało
procedury naprawcze, które należy wdrożyć, gdy wyniki uzyskane dla
materiałów kontrolnych znajdą się poza podanym zakresem. Procedury
kontroli jakości należy stosować zgodnie z właściwymi zaleceniami
organów państwowych oraz lokalnymi wytycznymi.
Zalecenia i środki ostrożności
Przeznaczone do celów diagnostyki in vitro.
Należy stosować standardowe procedury postępowania z odczynnikami.
Wszelkie odpady należy usuwać zgodnie z lokalnymi przepisami.
Karta charakterystyki produktu dostępna na życzenie.
Dysk informacyjny kontroli jakości
Każdy zestaw cobas HbA1c Control zawiera swoisty dla danej serii dysk
informacyjny QC stosowany do kontroli jakości. Na dysku QC znajdują się
wartości docelowae i zakresy testu cobas HbA1c Test. Na wyświetlaczu
aparatu pojawi się komenda włożenia dysku QC. Aparat cobas b 101 odczyta
dysk, na którym znajdują się swoiste dla serii zakresy docelowe.
Postępowanie z odczynnikami
Ostrożnie oderwać zaczynając od specjalnego wcięcia w folii. Jesli doszło
do uszkodzenia folii lub uszkodzenia dysku lub stwierdzono brak środka
Wyświetlanie wyników
Po zakończeniu automatycznego oznaczania wyniki wyświetlone zostaną
na wyświetlaczu aparatu cobas b 101 w czasie do 6 minut. Wyniki
2012-10, V 2 Polski
1/3
cobas b 101
cobas HbA1c Test
Hemoglobina A1c
oznaczenia pokazane zostaną w % dla hemoglobiny A1c (DCCT/NGSP)
oraz w mmol/mol dla hemoglobiny A1c (IFCC).9
Przeprowadzono badania nad przybliżoną zależnością pomiędzy HbA1c
i średnim poziomem glukozy we krwi z ostatnich dwóch do trzech
miesięcy10. Określono następujące współzależności:
Standaryzacja DCCT / NGSP (% HbA1c)
Oszacowane średnie stężenie glukozy (eAG) [mmol/L] =
1.59 × HbA1c (%) - 2.59 lub
Oszacowane średnie stężenie glukozy (eAG) [mg/dL] = 28.7 × HbA1c (%) - 46.7
W celu pokazania eAG na wyświetlaczu, należy uaktywnić właściwą funkcję.
Szczegółowe informacje znajdują się w Instrukcji Obsługi.
Ograniczenia - substancje interferujące
1. Test ten nie jest przeznaczony do diagnozowania cukrzycy, ani do
codziennej kontroli poziomu glukozy, nie powinien zatem zastępować
codziennych pomiarów glukozy we krwi lub moczu dokonywanych
przez pacjenta w warunkach domowych.
2. Wyniki HbA1c otrzymane od pacjentów z wariantami Hb należy
interpretować z wielką ostrożnością. Patologiczne hemoglobiny mogą
wpłynąć na okres półtrwania czerwonych krwinek lub na tempo
glikowania in vivo. W takich wypadkach nawet poprawne analitycznie
wyniki nie odzwierciedlają takiego poziomu kontroli glikemii, jaki byłby
oczekiwany u pacjentów z hemoglobiną prawidłową.11
3. Jakakolwiek przyczyna skracająca czas życia erytrocytów w konsekwencji
obniżać będzie ich ekspozycję na glukozę, a tym samym obniżać
wartości w mmol/mol HbA1c (IFCC) i % HbA1c (DCCT/NGSP), nawet
jeśli średni poziom glukozy we krwi w tym czasie jest podwyższony.
Wśród takich przyczyn wyróżnić można niedokrwistość hemolityczną i
inne choroby hemolityczne, homozygotyczną postać anemii sierpowatej,
ciążę, niedawno przebyte masywne krwotoki, jak i przewlekłą utratę krwi.
W takich warunkach należy ostrożnie interpretować wyniki HbA1c.
4. Glikowana HbF nie jest w teście wykrywana, ponieważ nie zawiera
glikowanych łańcuchów Beta charakterystycznych dla HbA1c. Niemniej
HbF jest oznaczana testem Total Hb i w konsekwencji próbki zawierające
wysokie stężenie HbF (> 10 %) mogą dać wynik niższy od oczekiwanego
w mmol/mol HbA1c (IFCC) i % HbA1c (DCCT/NGSP).12,13
5. Jeśli stężenie hemoglobiny jest mniejsze niż 6 g/dL lub wyższe
niż 20 g/dL, nie podany zostanie żaden wynik.
Kryterium: Odzysk ≤ 10 % wartości początkowej przy stężeniu
HbA1c wynoszącym 6 % HbA1c.
Żółtaczka: Brak istotnej interferencji do stężenia bilirubiny
związanej/niezwiązanej wynoszącego 1000 µmol/L lub 60 mg/dL.
Lipemia (Intralipid): Brak istotnej interferencji do stężenia
intralipidów 500 mg/dL. Istnieje słaba korelacja pomiędzy
zmętnieniem i stężeniem triglicerydów.
Glikemia: Brak istotnej interferencji do stężenia glukozy wynoszącego
111 mmol/L (2000 mg/dL). Nie jest konieczne pobieranie próbek na czczo.
Czynnik reumatoidalny: Brak istotnej interferencji do stężenia czynnika
reumatoidalnego wynoszącego 750 IU/mL.
Leki: Brak interferencji z najczęściej używanymi lekami w
stężeniu terapeutycznym.14,15
W stężeniu fizjologicznym nie wykryto reakcji krzyżowych z HbA0,
HbA1a, HbA1b, hemoglobiną acetylowaną, hemoglobiną karbamylowaną
czy labilną HbA1c. Test jest swoisty dla hemoglobiny glikowanej przy
końcu N łańcucha Beta. W związku z tym za pomocą testu można
określić stan metaboliczny pacjenta z najczęściej występującymi
hemoglobinopatiami (HbAS, HbAC, HbAE).
Dla celów diagnostycznych wyniki powinny być interpretowane
z uwzględnieniem historii choroby, badań klinicznych oraz
innych danych o pacjencie.
Zakres pomiarowy
20-130 mmol/mol (IFCC) lub 4-14 % (DCCT/NGSP)
Wartości oczekiwane
W roku 2009 międzynarodowy Komitet Ekspertów, wśród których znaleźli
się przedstawiciele ADA (Amerykańskiego Towarzystwa Diabetologicznego),
Międzynarodowej Federacji Diabetologicznej (IDF) i Europejskiego
Towarzystwa Badań Cukrzycy (EASD) zalecił użycie testów do oznaczania
cobas b 101
HbA1c w diagnostyce cukrzycy dla wartości progowej ≥ 6.5 %16;
ADA zaadoptowało te kryteria w roku 2010.17,18
Stosowane metody oznaczania HbA1c muszą być certyfikowane przez Krajowy
Program Standaryzacji Glikohemoglobiny (NGSP) oraz standaryzowane
wobec i spójne pomiarowo z testem referencyjnym Diabetes Control and
Complications Trial (DCCT)19. Dostępność wyników HbA1c podczas
wizyty pacjenta (oznaczanie przy łóżku pacjenta) dało w wyniku wzrost
intensyfikacji leczenia i polepszenie kontroli glikemii.20
Poziom HbA1c przewyższający wartości referencyjne wskazuje na utrzymującą
się przez okres poprzednich 2 do 3 miesięcy (a nawet dłużej) hiperglikemię.
ADA zaleca oznaczanie HbA1c u pacjentów z cukrzycą 2-4 razy w ciagu roku.
Obniżenie stężenia HbA1c do lub poniżej 7 % wykazało redukcję cukrzycowych
powikłań mikronaczyniowych i neuropatycznych i - jeśli uzyskane zostało
krótko po rozpoznaniu cukrzycy - prowadzi do długoterminowej redukcji
chorób mikronaczyniowych. W związku z tym rozsądnym celem stężenia
HbA1c u pacjentów (z wyjątkim pacjentek w ciąży) jest < 7 %.16
W wypadku pacjentów z HbA1c o wartości > 8.0 % należy
przeanalizować ponownie sposób ich leczenia.
Pacjenci z HbA1c na poziomie 5.7–6.4 % powinni być poddani
skutecznemu programowi mającemu na celu utratę ich masy ciała
o 7 % i wzrost umiarkowanej aktywności fizycznej (np. spacer)
przynajmniej do 150 minut w tygodniu.
Dla wybranych pacjentów mogą być ustanowione bardziej rygorystyczne
cele HbA1c, pod warunkiem, że ich osiągnięcie nie spowoduje wystąpienia
hipogoglikemii czy innych skutków niepożądanych.
Poziom HbA1c poniżej ustalonego zakresu referencyjnego może wskazywać
na przebyte niedawno epizody hipoglikemiczne, obecność różnych wariantów
hemoglobiny czy skróconego czasu życia erytrocytów.
W oparciu o populacje pacjentów każde laboratorium powinno określić poziom
wartości oczekiwanych lub wyznaczyć własne zakresy wartości referencyjnych.
Szczegółowe dane o teście
Dane uzyskane przy użyciu aparatów podano poniżej. Wyniki uzyskane
w poszczególnych laboratoriach mogą się różnić.
Precyzja
Precyzję oznaczono w oparciu o próbki krwi i próbki kontrolne zgodnie
z przyjętym protokołem wewnętrznym. Precyzję pośrednią wyliczono za
pomocą 3 serii testów HbA1c stosując 4 różne próbki krwi pobranej na EDTA
w momencie podejmowania decyzji terapeutycznej i 2 roztwory kontrolne
w ciągu 21 dni, każdy w 2 seriach, randomizowane próbki, oznaczenia
podwójne dla każdej serii i materiału. Powtarzalność określono oznaczając
próbki pełnej krwi w seriach 21 oznaczeń każdej próbki.
Uzyskano następujące wyniki:
Precyzja pośrednia b
Powtarzalnośća
Próbka
Próbka niska
Decyzja próbki
Medium próbki
Próbka wysoka
Kontrola Poziom 1
Kontrola Poziom 2
Wart. śr.
OS
%HbA1c %HbA1c
5.3
6.2
8.0
13.0
5.7
9.9
0.11
0.12
0.12
0.22
0.14
0.17
WZ
%
2.0
2.0
1.5
1.7
2.5
1.8
Wart. śr.
OS
WZ
%HbA1c %HbA1c %
4.9
6.3
7.3
10.5
5.5
9.3
0.14
0.11
0.10
0.11
0.13
0.20
2.8
1.7
1.4
1.0
2.3
2.2
a) Powtarzalność = precyzja w serii
b) precyzja pośrednia = precyzja całkowita/precyzja pomiędzy seriami/ precyzja pomiędzy dniami
Porównanie metod
Dokonano porównania wyników uzyskanych dla 3 różnych serii testów w
aparacie cobas HbA1c Test w cobas b 101 używając próbek heparynizowanej
pełnej krwi z wynikami uzyskanymi w analizatorze cobas c 501 z
użyciem odczynnika Tina-quant Hemoglobin A1c Gen. 3. Używając
serii reprezentatywnej uzyskano następujące wyniki.
Ilość próbek (n) = 108
Średnia różnica = 0.24 % HbA1c
Dolny 95 % przedział ufności dla różnic = -0.17 % HbA1c
Górny 95 % przedział ufności dla różnic = 0.66 % HbA1c
Stężenie próbek zawarte było pomiędzy 4.2 – 9.9 % HbA1c
(wartości NGSP/DCCT).
2/3
2012-10, V 2 Polski
06380247001V2
cobas HbA1c Test
Hemoglobina A1c
Literatura
1. Goldstein DE, Little RR, Wiedmeyer HM et al. Glycated hemoglobin:
methodologies and clinical applications. Clin Chem 32 (1986): B64–B70.
2. Goldstein DE, Little RR, Lorenz RA et al. Tests of glycemia in
diabetes. Diabetes Care 1995;18:896-909.
3. Goldstein DE, Little RR. More than you ever wanted to know (but need to
know) about glycohemoglobin testing. Diabetes Care 1994;17:938-939.
4. Santiago JV. Lessons from the diabetes control and complications
trial. Diabetes 1993;42:1549-1554.
5. Flückiger R, Mortensen HB. Review: glycated haemoglobins.
J Chromatogr 1988;429:279-292.
6. Bunn HF, Gabbay KH, Gallop PM. The glycosylation of hemoglobin:
relevance to diabetes mellitus. Science 1978;200:21-27.
7. Kobold U, Jeppsson JO, Duelffer T et al. Candidate reference methods for
hemoglobin A1c based on peptide mapping. Clin Chem 1997;43:1944-1951.
8. Jeppsson JO, Kobold U, Finke A, et al. Approved IFCC reference
method for the measurement of HbA1c in human blood. Clin
Chem Lab Med 2002;40:78-89.
9. Consensus statement on the Worldwide Standardization of the
Hemoglobin A1c Measurement. American Diabetes Association,
European Association for the Study of Diabetes, International Federation
of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine and International Diabetes
Federation Consensus Committee Diabetes Care 2007; 30:2399-2400.
10. Nathan DM, Kuenen J, Borg R et al. Translating the A1c Assay Into
Estimated Average Glucose Values. Diabetes Care 2008;31:1473-1478.
11. Miedema K. Influence of hemoglobin variants on the determination
of glycated hemoglobin. Klin Lab 1993;39:1029-1032.
12. Chang J, Hoke C, Ettinger B et al. Evaluation and interference
study of hemoglobin A1c measured by turbidimetric inhibition
immunoassay. Am J Clin Pathol 1998;109:274-278.
13. Rohlfing C, Connolly S, England J et al. Effect of elevated fetal hemoglobin
on HbA1c measurements: four common assay methods compared to
the IFCC reference method. Clin Chem 2006;52 Suppl 6: A108.
14. Breuer J. Report on the Symposium “Drug Effects in Clinical Chemistry
Methods”. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34:385-386.
15. Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry:
recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug
interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38:376-385.
16. The International Expert Committee. International Expert Committee
Report on the Role of the A1C Assay in the Diagnosis of Diabetes.
Diabetes Care 2009, 32: 1327–1334.
17. American Diabetes Association. Standards of Medical Care in
Diabetes-2010. Diabetes Care, 2010; 33 Suppl. 1: S11-S61.
18. American Diabetes Association. Standards of Medical Care in
Diabetes-2011[J]. Diabetes Care, 2011, 34 Suppl. 1: S11-S61.
19. The Diabetes Control and Complications Trial Research Group.
The effect of intensive treatment of diabetes on the development
and progression of long-term complications in insulin-dependent
diabetes mellitus. N Engl J Med 1993;329:977-986.
20. American Diabetes Association Clinical Practice Recommendations:
Executive Summary: Standards of Medical Care in Diabetes-2010.
Diabetes Care, 2010; 33 Suppl. 1: S4-5.
Istotne dodatki oraz zmiany zostały oznaczone na marginesie.
© 2012, Roche Diagnostics
Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim
www.roche.com
W celu uzyskania dalszych informacji należy odnieść się do Instrukcji Obsługi i
ulotek produktowych.
W niniejszej ulotce metodycznej jako separatora dziesiętnego oddzielającego
w liczbach dziesiętnych jednostki od ułamków używana jest zawsze kropka
(okres/stop). Separatorów oddzielających tysiące nie używa się.
2012-10, V 2 Polski
3/3
cobas b 101