Monoclonal Mouse Anti-Human CD41, Platelet

Monoclonal Mouse Anti-Human CD41, Platelet

Monoclonal Mouse Anti-Human CD41, Platelet Glycoprotein llb, Clone 5B12
Numer katalogowy F 7088
Numer katalogowy R 7058
Przeznaczenie
sprzęgnięte z FITC
sprzęgnięte z RPE
Do diagnostyki in vitro.
F 7088 i R 7058 są przeznaczone do użycia w cytometrii przepływowej. CD41 jest selektywnym markerem
płytek i prekursorów płytek, a przeciwciała przeciwko CD41 mogą być przydatne do immunofenotypowania
białaczek megakariocytarnych i do identyfikowania trombastenii Glanzmanna (1). Interpretacji wyników może
dokonywać wykwalifikowany patolog w oparciu o wywiad kliniczny i inne testy diagnostyczne.
Synonimy antygenu
Glycoprotein llb (GPllb), llintegrin (1).
Wprowadzenie
CD41 jest podjednostką  kompleksu CD41/CD61 (GPllb-llla), heterodimeru wapnio-zależnego, związanego
niekowalencyjnie. CD41 jest cząsteczką o masie 135 kDa, składającą się z dwóch peptydów: łańcucha
omasie 120 kDa i łańcucha o masie 23 kDa. Łańcuchy  i  są związane pojedynczym mostkiem
dwusiarczkowym. Łańcuch  zawiera cztery miejsca wiążące wapń i jest całkowicie zewnątrzkomórkowy,
podczas gdy łańcuch  ma domeny zewnątrzkomórkową, transbłonową i cytoplazmatyczną (1).
Kompleks CD41/CD61 pojawia się tylko podczas dojrzewania megakariocytów (2). Aktywowany kompleks
CD41/CD61 jest receptorem dla czynnika von Willebranda, rozpuszczalnego fibrynogenu i fibronektyny (1) i
odgrywa kluczową rolę podczas aktywacji i agregacji płytek (1, 3).
CD41 ulega zmiennej ekspresji w białaczkach megakarioblastycznych/megakariocytarnych (4). Jest
nieobecny lub uszkodzony na płytkach chorych na trombastenię Glanzmanna (5).
Odczynnik dostarczony
Przeciwciała Anti-CD41, F 7088 i R 7058, zostały wyprodukowane z oczyszczonych monoklonalnych
przeciwciał mysich. Są one dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% albuminy z surowicy
wołu (BSA) i 15 mmol/L NaN3, o pH 7,2. Każda fiolka zawiera ilość przeciwciała na 100 oznaczeń (10 L
przeciwciała na maksymalnie 106 leukocytów z normalnej ludzkiej krwi obwodowej).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: zobacz etykietka na fiolce.
Przeciwciało,
Fluorochrom
Kontrola negatywna,
nr katalogowy
F 7088
FITC (Fluorescein Isothiocyanate Isomer 1)
X 0927
R 7058
RPE (R-Phycoerythrin)
X 0928
nr katalogowy
Immunogen
Normalne ludzkie płytki krwi.
Swoistość
Anti-CD41, 5B12, zostało zakwalifikowane podczas piątego International Workshop and Conference on Human
Leucocyte Differentitation Antigens (Boston 1993), a badania w licznych laboratoriach potwierdziły jego
reaktywność z CD41. W wyniku błędu klon został określony jako SB12 (6).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali.
Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Ponieważ
nie ma wyraźnych oznak wskazujących na zmianę trwałości produktu, zawsze należy badać dodatnią i ujemną
kontrolę równolegle z próbką badaną. Jeżeli pojawia się nieswoiste barwienie bez zmiany procedur
laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako.
1. Pobrać krew żylną do probówki zawierającej EDTA jako środek przeciwkrzepliwy.
Procedura barwienia
(108364-002)
2.
W ciągu 5 minut odwirować przy 200 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej.
3.
Pobrać z górnej warstwy 100 L osocza bogatopłytkowego (wystarcza to na 20 oznaczeń) i zmieszać z 1
mL 1% paraformaldehydu w 0,01 mol/L PBS, o pH 7,4. Inkubować w 4 C przez pół godziny do godziny.
4.
Odwirować przy 1200 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej. Delikatnie odciągnąć i odrzucić
supernatant, zostawiając około 50 L płynu.
5.
Dodać 2 mL 0,01 mol/L PBS, o pH 7,4, i zawiesić płytki przez dokładne wymieszanie.
6.
Odwirować przy 1200 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej. Delikatnie odciągnąć i odrzucić
supernatant, zostawiając około 50 L płynu.
F 7088/R 7058/PL/MBH/01.07.02 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
7.
Dodać 1 mL 2% płodowej surowicy cielęcej w 0,01 mol/L PBS i zawiesić płytki przez dokładne
wymieszanie.
8.
Zmieszać 50 L zawiesiny płytek z 10 L Anti-CD41 sprzęgniętego z odpowiednim fluorochromem.
9.
Użyć niereagującego przeciwciała o tym samym izotypie i sprzęgniętego z tym samym fluorochromem jako
kontroli ujemnej (patrz tabela).
10.
Inkubować w ciemnościach przy 4 C przez 20 minutes.
11.
Przepłukać dwukrotnie PBS zawierającym 2% albuminy z surowicy wołu. Zawiesić płytki w płynie
odpowiednim do cytometrii, np. 0,3 mL roztworu zawierającego 1% paraformaldehyd jako utrwalacz w 0,01
mol/L PBS, o pH 7,4. Zamieszać.
12.
Zanalizować na cytometrze przepływowym.
Zaleca się użyć odpowiedniej kontroli dodatniej i ujemnej przy każdym pomiarze dla sprawdzenia odczynnika i
przygotowania próbki. Proszę zwrócić uwagę, że odczynniki sprzęgnięte z fluorochromami są wrażliwe na
światło i próbki powinny być przed nim chronione podczas barwienia aż do czasu analizy.
Literatura
1.
Sun QH, Newman PJ. CD guide. CD41. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM,
Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New
York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 1139.
2.
Vinci G, Tabilio A, Deschamps JF, van Haeke D, Henri A, Guichard J, et al. Immunological study of in
vitro maturation of human megakaryocytes. Br J Haematol 1984;56:589-605.
3.
Nachman RL, Leung LLK. Complex formation of platelet membrane glycoproteins IIb and IIIa with
fibrinogen. J Clin Invest 1982;69:263-9.
4.
Breton-Gorius J, Tabilio A, Vainchenker W, Vinci G, van Haeke D, Henri A, et al. Diagnosis of
megakaryoblastic leukemias. Verh Dtsch Ges Path 1983;67:166-81.
5.
George JN, Caen JP, Nurden AT. Glanzmann's thrombasthenia: the spectrum of clinical disease
(review). Blood 1990;75:1383-95.
6.
Honda S, Felding-Habermann B, Loftus J, Annis D, Kunicki TJ. CD41/CD61 cluster workshop report:
localization of epitopes on integrins IIb 3(CD41/CD61) and v 3(CD51/CD61). In: Schlossman SF,
Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7;
Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. p. 1293-8.
Objaśnienia symboli
(108364-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
(sprawdź w rozdz.
przechowywanie)
Producent
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Numer serii
F 7088/R 7058/PL/MBH/01.07.02 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17