Specsheet Template CE

Monoclonal Mouse Anti-Human CD61, Platelet Glycoprotein IIIa/APC, Clone Y2/51
Monoclonal Mouse Anti-Human CD61, Platelet Glycoprotein IIIa/FITC, Clone Y2/51
Przeznaczenie
Nr kat. C7280
Nr kat. F0803
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Odczynniki C7280 i F0803 są przeznaczone do stosowania w cytometrii przepływowej. CD61 to wybiórczy
marker płytek i prekursorów płytek krwi, a przeciwciała skierowane przeciw CD61 mogą mieć znaczenie
w identyfikacji białaczek megakarioblastycznych (1, 2). Interpretacji wyniku — z uwzględnieniem kontekstu
klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych — powinien dokonać wykwalifikowany patolog.
Synonimy antygenu
9-o-acetyl-GD3 (1).
Wprowadzenie
CD61 to białko o jednym łańcuchu i masie 110 kDa, stanowiące wspólną podjednostkę  kompleksów
CD41/CD61 i CD51/CD61, składających się z heterodimerów nie związanych kowalencyjnie. Do utrzymania
integralności i funkcji receptorowych kompleksy wymagają obecności kationów dwuwartościowych (1).
Kompleks CD41/CD61 pojawia się na wczesnym etapie dojrzewania megakariocytów (3). Aktywny kompleks
CD41/CD61 jest receptorem czynnika von Willebranda, rozpuszczalnego fibrynogenu i fibronektyny (1), oraz
pełni kluczową rolę w aktywacji i agregacji płytek krwi (4).
Trombastenia Glanzmanna to dobrze opisane, choć rzadkie dziedziczne zaburzenie funkcjonowania płytek
krwi. Spowodowana jest niedoborem lub nieprawidłowością kompleksu CD41/CD61, objawiając się
krwawieniami w związku z wadliwym tworzeniem skrzepu przez płytki krwi. Trombastenię Glanzmanna
podzielono na dwa typy: typ 1, w którym CD41/CD61 praktycznie w ogóle nie występuje, i typ 2, w którym
ekspresji ulega 5–20% kompleksu (5). Retrakcja skrzepu nie występuje w typie 1, natomiast w typie 2 jest
normalna lub umiarkowanie osłabiona.
Kompleksy CD51/CD61 biorą udział w procesach przerzutów nowotworowych oraz infekcjach adenowirusów (1).
Dostarczany odczynnik
Koniugaty Anti-CD61, C7280 i F0803, wyprodukowane zostały z oczyszczonych mysich przeciwciał
monoklonalnych. Koniugaty dostarczane są w postaci ciekłej w buforze zawierającym 1% albuminy surowicy
wołowej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3, pH 7,2. Każda fiolka zawiera koniugat na 100 testów (10 µL koniugatu
dla płytek w ilości do 106, z prawidłowej ludzkiej krwi obwodowej).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatów (mg/L): patrz etykieta na fiolce.
Nr kat.
przeciwciała
Fluorochrom
Nr kat. odczynnika
kontrolnego
C7280
APC (allofikocyjanina)
X0968
F0803
FITC (izomer 1 izotiocyjanianu fluoresceiny)
X0927
Immunogen
Komórki krwi obwodowej stymulowane fitohemoaglutyniną (PHA) (6).
Swoistość
Przeciwciała anty-CD61, Y2/51, opisano podczas warsztatów Fourth International Workshop and Conference
on Human Leucocyte Differentiation Antigens (4. międzynarodowe warsztaty i konferencja na temat antygenów
różnicujących ludzkie leukocyty), a ich reaktywność z CD61 została potwierdzona przez wiele laboratoriów (7).
Przeciwciała Anti-CD61 umożliwiają wykrycie płytek w krwi obwodowej i szpiku kostnym a także reagują
z megakariocytami (6).
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie
NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3
z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe
azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć
gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w ciemności w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na
opakowaniu. Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do
opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących
o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów,
należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego
nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem,
należy się skontaktować z naszym działem wsparcia technicznego.
Wykonanie odczynu
1.
Pobrać krew żylną do probówki zawierającej środek przeciwkrzepliwy EDTA.
2.
W ciągu 5 minut poddać wirowaniu przy 200 g przez 5 minut w temperaturze pokojowej.
3.
Zebrać 100 L górnego osocza bogatego w płytki (wystarczy to na 20 testów) i zmieszać z 1 mL 1%
paraformaldehydu w 0,01 mol/L PBS, pH 7,4. Inkubować w temperaturze 4 C przez ½–1 godziny.
4.
Odwirować próbkę z przy 1200 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej. Delikatnie odciągnąć
supernatant i odrzucić go, pozostawiając około 50 µL cieczy.
5.
Dodać 2 mL 0,01 mol/L PBS pH 7,4 i zawiesić płytki przez mieszanie mieszadłem wibracyjnym.
(108348-003)
C7280/F0803/PL/SSA/30.05.05 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
6.
Odwirować próbkę przy 1200 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej. Delikatnie odciągnąć
supernatant i odrzucić go, pozostawiając około 50 µL cieczy.
7.
Dodać 1 mL 0,01 mol/L PBS zawierającego 2% płodowej surowicy cielęcej i zawiesić płytki przez
mieszanie mieszadłem wibracyjnym.
8.
Zmieszać 50 L zawiesiny płytek z 10 L skoniugowanego z fluorochromem przeciwciała anty-CD61.
9.
Inkubować w ciemności przez 20 minut w temperaturze 4 °C.
10.
Przepłukać PBS. Zawiesić płytki w odpowiednim płynie do cytometrii przepływowej, np. 0,3 mL
1-procentowego roztworu paraformaldehydu (środka utrwalającego) w buforze PBS 0,01 mol/L, pH 7,4.
11.
Poddać analizie w cytometrze przepływowym.
Należy pamiętać, że koniugaty fluorochromowe są wrażliwe na światło, w związku z czym w trakcie
wykonywania odczynu i do wykonania analizy próbki powinny być chronione przed światłem.
Uwagi dotyczące procedury Etap 1: Opcjonalnie do każdego pomiaru można dołączyć odpowiednie dodatnie i ujemne próbki kontrolne
w celu weryfikacji odczynnika i przygotowania próbek.
Etap 8: Zalecana objętość koniugatu jest jedynie wartością orientacyjną. Optymalne warunki barwienia mogą
się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone
indywidualnie w każdym laboratorium.
Uwzględnienie probówki z odczynnikiem kontrolnym jest opcjonalne. Odczynnik kontrolny powinien być
dopasowany do izotypu i fluorochromu sprzężonego przeciwciała. Zalecane odczynniki kontrolne przedstawiono
w tabeli powyżej.
Ograniczenia swoiste dla
opisywanego produktu
Przy użyciu C7280 i F0803 w procedurze lizy Dako tworzą agregaty płytkowo-leukocytowe (PLA).
PLA można usunąć stosując procedurę bez lizy i płukania (no-lyse-no-wash) (8).
Piśmiennictwo
1.
Sun Q-H, Newman PJ. CD Guide. CD61. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin C, Clark
E, et al., editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 7th
International Workshop and Conference; 2000 Jun 19-23; Harrogate, United Kingdom. New York: Oxford
University Press Inc.; 2002. p. 810.
2.
Van Dongen JJM, Adriaansen HJ. Immunobiology of leukemia. In: Henderson ES, Lister TA, Greaves
MF, editors. Leukemia. Philadelphia, London, Toronto, Montreal, Sydney, Tokyo: WB Saunders
Company; 1996 p. 83-130.
3.
Vinci G, Tabilio A, Deschamps JF, van Haeke D, Henri A, Guichard J, et al. Immunological study of in
vitro maturation of human megakaryocytes. Br J Haematol 1984;56:589-605.
4.
Nachman RL, Leung LLK. Complex formation of platelet membrane glycoproteins IIb and IIIa with
fibrinogen. J Clin Invest 1982;69:263-9.
5.
George JN, Caen JP, Nurden AT. Glanzmann’s thrombasthenia: the spectrum of clinical disease. Blood
1990;75:1383-95.
6.
Gatter KC, Cordell JL, Turley H, Heryet A, Kieffer N, Anstee DJ, et al. The immunohistological detection
of platelets, megakaryocytes and thrombi in routinely processed specimens. Histopathology 1988;13:25767.
7.
von dem Borne AEG, Modderman PW, Admiraal LG, Nieuwenhuis HK. Joint report of the platelet section.
P1: Platelet antibodies, the overall results. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE,
Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th
International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo:
Oxford University Press; 1989. p 951-66.
8.
Hagberg IA, Lyberg T. Evaluation of circulating platelet-leukocyte conjugates: a sensitive flow cytometric
assay well suited for clinical studies. Platelets 2000;11:151-60.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
W
y
d
i
a
r
g
ó
b
n
m
o
s
e
t
d
y
k
y
i
c
i
n
z
n
v
y
i
t
d
r
Temperatura przechowywania
o
o
Chronić przed słońcem (patrz
s
e
k
c
j
a
n
t
.
p
r
z
e
c
h
o
w
y
w
a
n
i
a
Zużyć przed
Producent
)
Sprawdzić w instrukcji
N
s
(108348-003)
t
o
s
o
w
a
n
i
u
m
e
r
s
e
r
i
i
a
C7280/F0803/PL/SSA/30.05.05 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17