Monoclonal Mouse Anti-Human N-Cadherin Clone 6G11

Monoclonal Mouse
Anti-Human
N-Cadherin
Clone 6G11
Nr kat. M3613
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała przeznaczone do zastosowań laboratoryjnych, w celu identyfikacji jakościowej komórek wykazujących ekspresję N-cadherin (Nkadheryny) w tkankach prawidłowych i nowotworowych, przy użyciu mikroskopii świetlnej i metod immunohistochemicznych (IHC). Dodatnie
wyniki stanowią pomoc diagnostyczną w klasyfikacji międzybłoniaków.2-4 Zastosowanie panelu przeciwciał ułatwia identyfikację i
różnicowanie. Interpretacja wyniku musi przebiegać z uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych
przez wykwalifikowanego patologa.
Synonim
Kadheryna komórek nerwowych, kadheryna typu nerwowego (NCAD)
Streszczenie i informacje ogólne
N-cadherin jest białkiem o masie cząsteczkowej 140 kD, należącym do rodziny cząsteczek przezbłonowych, uczestniczących w adhezji
komórkowej zależnej od wapnia. Kadheryny uczestniczą w kontroli ruchów morfogenetycznych podczas rozwoju osobniczego i regulacji
przylegania komórek poprzez jednorodną adhezję z tym samym typem kadheryn. Działanie N-cadherin zależy od jej połączenia z
cytoszkieletem aktynowym, zachodzącym poprzez interakcję końca C N-cadherin z białkami cytoplazmatycznymi z grupy katenin. Stabilność
tego połączenia jest regulowana dzięki procesowi fosforylacji i defosforylacji β-kateniny.5,6
Ekspresję N-cadherin stwierdzono w wielu prawidłowych tkankach, w tym w tkance nerwowej, śródbłonku, komórkach mięśniowych i w
subpopulacji wczesnych prekursorów komórek krwiotwórczych.7 Wśród tkanek nowotworowych, ekspresję N-cadherin stwierdzono w
złośliwych nowotworach nienabłonkowych, w tym w międzybłoniakach2-4,8, struniakach, mięsakach maziówkowych, czerniakach złośliwych,
mięsakach nabłonkowatych, nabłonkowatych mięsakach naczyniowych i w mięsakach jasnokomórkowych.8 Stwierdzono dodatni odczyn w
kierunku N-cadherin w surowiczych i endometrioidalnych nowotworach jajnika i ujemny odczyn w nowotworach śluzowych.9 Do innych
nowotworów wykazujących dodatni odczyn na N-cadherin należy rak jasnokomórkowy nerki i niektóre typy nowotworów sutka, w tym rak
rdzeniasty i mięsakowaty rak metaplastyczny.10,11
Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie
preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia
metody.
Dostarczany odczynnik
Przeciwciała przeciwko N-cadherin są dostarczane w postaci płynnej jako nadsącz hodowli tkankowej (zawierający płodową surowicę
bydlęcą), dializowany wobec roztworu Tris-HCl o stężeniu 0,05 mol/L , pH 7,2 i azydku sodu o stężeniu 0,015 mol/L. Preparat zawiera białko
stabilizujące.
Izotyp: IgG1, kappa
Clone: 6G111
Stężenie mysich IgG mg/l: Zobacz etykietę na fiolce.
Preparat M3613 może być używany w rozcieńczeniu 1:50 w IHC podczas diagnostyki z zastosowaniem systemu detekcji EnVision+™.
Podane wartości mają charakter wyłącznie orientacyjny. Optymalne stężenie przeciwciał może się zmieniać w zależności od rodzaju
materiału i sposobu jego przygotowania. Optymalne stężenie powinno być określone indywidualnie w każdym laboratorium.
Immunogen
Peptyd syntetyczny o sekwencji odpowiadającej aminokwasom878-905 ludzkiej N-cadherin (N-kadheryny)1
Swoistość
Klon 6G11 jest swoisty dla peptydu użytego do immunizacji i nie reaguje z białkiem nośnikowym KLH. Sekwencja użyta do immunizacji jest
homologiczna w białkach N-cadherin u ludzi, myszy, szczurów i kurcząt. Sekwencja nie wykazuje homologii z innymi kadherynami — Ekadheryną, P-kadheryną, kadheryną-6, kadheryną-12, ani z kateninami (alfa, beta i gamma).1
Materiały wymagane, ale niedostarczone
Zobacz „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako i/lub instrukcje do systemu detekcji. Zalecany
rozcieńczalnik (rozcieńczalniki) do stosowania przy odczynach IHC:
Antibody Diluent (rozcieńczalnik do przeciwciał) (nr kat. S0809).
Zalecana ujemna kontrola do odczynów IHC:
Mouse IgG1 (mysie IgG1, nr kat. X0931)
(108355-002)
305844PL_001 str. 1/3
Środki ostrożności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3 występujące w
produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład
instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości
wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować odpowiednie procedury
postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
5. Niewykorzystane odczynniki należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie należy używać odczynników po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeżeli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić
różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie materiału
Skrawki parafinowe
Przeciwciała przeciwko N-cadherin można stosować do skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. Nie zaleca się
trawienia tkanki enzymami proteolitycznymi.
Po odparafinowaniu, przed wykonaniem odczynu IHC skrawki powinny być poddane obróbce cieplnej (odmaskowaniu antygenu). Cieplne
odmaskowanie antygenu (Heat-induced epitope retrieval — HIER) polega na umieszczeniu skrawków w ogrzanym uprzednio roztworze
buforu i utrzymaniu temperatury w kąpieli wodnej lub parowej (95–99 °C), albo w szybkowarze (121 °C). W celu uzyskania lepszego
przylegania wycinków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek typu Silanized Slides (sylanizowanych) (nr kat. S3003).
Zaleca się używanie Target Retrieval Solution (roztworu do odzyskiwania antygenu) (nr kat. S1700) lub preparatu 10x Concentrate (10x
koncentrat, nr kat. S1699) zgodnie z protokołem ogrzewania HIER, przez40 minut w temperaturze 95–99 °C. Po zakończeniu ogrzewania
należy odstawić pojemnik z buforem zawierającym preparaty w temperaturze pokojowej przez 20 minut. Dokładnie przepłukać roztworem
buforu lub dejonizowaną wodą. Optymalne czasy inkubacji dla HIER w temperaturze ponad 99 °C powinny być ustalone indywidualnie w
każdej pracowni.
Skrawki mrożakowe i rozmazy cytologiczne
Przeciwciała przeciwko N-cadherin mogą być stosowane do odczynów na utrwalonych w acetonie skrawkach mrożakowych lub utrwalonych
rozmazach cytologicznych.
Przed wykonaniem odczynów IHC należy wykonać utrwalenie i przeprowadzenie. Utrwalenie zabezpiecza przed autolizą i gniciem
wycinków, utrzymuje antygenowość, zwiększa współczynnik załamania światła przez składniki tkanki i zwiększa odporność składników
komórek na przeprowadzenie. Przeprowadzenie tkanki polega na odwodnieniu, usunięciu środków odwadniających, przepojeniu substancją
zatapiającą, zatopieniu i wykonaniu wycinków. Utrwalacze najczęściej stosowane podczas przygotowania tkanek do diagnostyki IHC
przedstawiono w dokumencie „General Instructions for Immunohistochemical Staining”. Podane wartości mają charakter wyłącznie
orientacyjny. Optymalna procedura powinna zostać ustalona i zweryfikowana przez Użytkownika.
Wykonanie odczynu
Należy postępować według stosownej procedury dla wybranego systemu detekcji.
Interpretacja odczynu
Przeciwciała przeciwko N-cadherin dają odczyn błonowy i cytoplazmatyczny.
Charakterystyka wyników
Prawidłowe tkanki12
Przeciwciała przeciwko N-cadherin charakteryzują się silną immunoreaktywnością z komórkami zwojowymi i komórkami nerwowymi w wielu
rodzajach prawidłowych tkanek.
Rodzaj tkanki (liczba testowanych
przypadków)
Nadnercza (3)
Mózgowie, móżdżek (3)
Mózg, mózgowie (3)
Żołądek (3)
Błona śluzowa trzonu macicy (3)
Nerki (3)
Jajniki (3)
Trzustka (3)
(108355-002)
Składniki komórkowe dające dodatni odczyn
3/3 błona komórkowa i cytoplazma komórek kory i rdzenia
nadnerczy
3/3 rozlany odczyn w wypustkach nerwowych i błonie komórkowej
komórek Purkinjego
3/3 rozlany odczyn w sieci wypustek nerwowych
3/3 odczyn błonowy i cytoplazmatyczny w komórkach głównych
okładzinowych i oksyfilnych
3/3 błona komórkowa i cytoplazma komórek gruczołów i
cytoplazma komórek podścieliska
3/3 błona komórkowa i cytoplazma komórek nabłonka
kanalikowego
1/3 błona komórkowa i cytoplazma komórek nabłonka powierzchni
i nabłonka torbieli inkluzyjnych
3/3 błona komórkowa i cytoplazma komórek zrazikowych
305844PL_001 str. 2/3
Przysadka mózgowa (3)
Serce (3)
Wątroba (3)
Śledziona (3)
Jądra (3)
Migdałek (3)
Przytarczyce (3)
Mięśnie szkieletowe (3)
Jelito grube (3)
Przełyk (3)
Płuca (3)
Skóra (3)
Szpik kostny (3)
Gruczoły sutkowe (3)
Szyjka macicy (3)
Gruczoł krokowy (3)
Grasica (3)
Komórki międzybłonka (3)
Nerwy obwodowe (3)
Ślinianki (3)
Jelito cienkie (3)
Tarczyca (3)
3/3 rozlany odczyn wypustek komórek w części nerwowej
przysadki oraz błona komórkowa i cytoplazma komórek
części gruczołowej przysadki
3/3 połączenia międzykomórkowe i cytoplazma 100 % miocytów
3/3 błona komórkowa i cytoplazma hepatocytów i błona
komórkowa komórek nabłonka przewodów żółciowych
3/3 błona komórkowa i cytoplazma komórek zatok śledzionowych
3/3 błona komórkowa i cytoplazma 100 % komórek Sertoliego,
spermatogonia i kanaliki nasienne
3/3 cytoplazma komórek ośrodków rozmnażania
3/3 błona komórkowa i cytoplazma komórek głównych
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
1/3 błona komórkowa komórek nabłonka przewodów (1 przewód)
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
0/3
Piśmiennictwo
1. Report on File
2. Abutaily AS, Addis BJ, Roche WR. Immunohistochemistry in the distinction between malignant mesothelioma and pulmonary
adenocarcinoma: a critical evaluation of new antibodies. J Clin Pathol. 2002; 55(9):662
3. Thirkettle I, Harvey P, Hasleton PS, Ball RY, Warn RM. Immunoreactivity for cadherins, HGF/SF, met, and erbB-2 in pleural malignant
mesotheliomas. Histopathology. 2000; 36(6):522
4. Han AC, Peralta Soler A, Knudsen KA, Wheelock MJ, Johnson KR, Salazar H. Differential expression of N-cadherin in pleural
mesotheliomas and E-cadherin in lung adenocarcinomas in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. Hum Pathol. 1997; 28(6):641
5. Takeichi M. The cadherins: cell-cell adhesion molecules controlling animal morphogenesis. Development. 1988; 102(4):639
6. Balsamo J, Arregui C, Leung T, Lilien J. The nonreceptor protein tyrosine phosphatase PTP1B binds to the cytoplasmic domain of Ncadherin and regulates the cadherin-actin linkage. J Cell Biol. 1998; 143(2):523
7. Puch S, Armeanu S, Kibler C, Johnson KR, Muller CA, Wheelock MJ, Klein G. N-cadherin is developmentally regulated and functionally
involved in early hematopoietic cell differentiation. J Cell Sci. 2001; 114(8):1567
8. Laskin WB, Miettinen M. Epithelial-type and neural-type cadherin expression in malignant noncarcinomatous neoplasms with epithelioid
features that involve the soft tissues. Arch Pathol Lab Med. 2002; 126(4):425
9. Peralta Soler A, Knudsen KA, Tecson-Miguel A, McBrearty FX, Han AC, Salazar H. Expression of E-cadherin and N-cadherin in
surface epithelial-stromal tumors of the ovary distinguishes mucinous from serous and endometrioid tumors. Hum Pathol 1997;
28(6):734
10. Markovic-Lipkovski J, Brasanac D, Muller GA, Muller CA. Cadherins and integrins in renal cell carcinoma: an immunohistochemical
study. Tumori. 2001;87(3):173
11. Han AC, Peralta Soler A, Knudsen KA, Salazar H. Distinct cadherin profiles in special variant carcinomas and other tumors of the
breast. Hum Pathol. 1999; 30(9):1035
12. IHC003 Report On File
(108355-002)
305844PL_001 str. 3/3