Polyclonal Rabbit Anti-Human c-erbB-2 Oncoprotein Nr kat

Polyclonal Rabbit
Anti-Human
c-erbB-2 Oncoprotein
Nr kat. A0485
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Polyclonal Rabbit Anti-Human c-erbB-2 Oncoprotein jest przeznaczone do uŜytku w immunohistochemii.
To przeciwciało znakuje prawidłowe komórki nabłonkowe, które jednakŜe generalnie wykazują ekspresję białka
c-erbB-2 na bardzo niskim poziomie. Jest uŜytecznym narzędziem do identyfikacji nadekspresji oncoproteiny
c-erbB-2 w rozmaitych nowotworach nabłonkowych, na przykład nowotwory piersi, gruczolakoraki płuc,
gruczolakoraki okręŜnicy i odbytnicy, łuskowate gruczolakoraki płuc i gruczolakoraki Ŝołądka (1), nowotwory
komórek przejściowych pęcherza moczowego (2) i gruczolakoraki śluzówki macicy (3). Interpretacja kliniczna
wystąpienia lub braku odczynu musi być uzupełniona przez badania morfologiczne, z wykorzystaniem
odpowiednich prób kontrolnych, i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa,
z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonim antygenu
HER2 (ludzki receptor czynnika wzrostu naskórka 2) (4), HER2/neu (5), ErbB2 (4, 5) i p185HER2 (6).
Streszczenie i
informacje ogólne
Onkoproteina c-erbB-2 jest przezbłonową kinazą tyrozynową o masie 185 kDa, naleŜącą do rodziny receptorów
czynnika wzrostu naskórka (EGFR). Ta rodzina obejmuje cztery homologiczne receptory ErbB-1 (EGFR,
HER1), ErbB-2 (HER2/neu), ErbB-3 (HER3), i ErbB-4 (HER4) (4). Proto-onkogen c-erbB-2 jest zlokalizowany
na 17 chromosomie przy prąŜku q21 (7). Uaktywnienie białka c-erbB-2, za pomocą homo- lub heterodimerizacji,
uruchamia wewnątrzkomórkowe sygnały, które są waŜne dla wzrostu, róŜnicowania i przeŜycia komórek.
Mechanizmy promujące dimeryzację receptora obejmują wiązanie ligandu i wysoką gęstość receptora
(wyraŜanie). To nadmierne wyraŜanie białka onko c-erbB-2 jest często wynikiem wzmocnienia genowego (4).
Onkoproteina c-erbB-2 wykazuje nadekspresję w ludzkich nowotworach, tak więc 25–30% ludzkich
nowotworów piersi wykazuje nadekspresję tego receptora (6, 8), podczas gdy nie znaleziono nadekspresji tego
receptora w łagodnej postaci tej choroby (4).
W ciągu ostatnich dwóch dziesięcioleci pojawiły się przeciwciała monoklonalne, które blokują aktywację onkoproteiny
c-erbB-2 oraz udokumentowano kliniczną aktywność ludzkiego przeciwciała monoklonalnego Herceptin™ (6).
Dostarczony odczynnik
Królicze przeciwciało wyizolowane na kolumnie metodą powinowactwa, oczyszczone przy uŜyciu
unieruchomionego peptydu onkoproteiny c-erbB-2 i dostarczone w postaci ciekłej w 0,05 mol/L Tris/HCl, 0,1 mol/L
NaCl, 15 mmol/L NaN3.
StęŜenie białka: Patrz etykieta na fiolce.
Immunogen
Ludzki syntetyczny peptyd onkoproteny c-erbB-2 uzyskany z wewnątrzcytoplazmatycznej części onkoproteiny
c-erbB-2. Ten peptyd został sprzęŜony z hemocyjaniną pijawki (KLH).
Swoistość
To przeciwciało znakuje wewnątrzkomórkową domenę onkoproteiny c-erbB2.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu
zastosowany w produkcie, w stęŜeniu które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Jak w przypadku kaŜdego materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury obchodzenia się z nim.
4. Produkt moŜe być stosowany w róŜnych technikach i w połączeniu z róŜnymi typami próbek i materiałów,
a zatem kaŜde laboratorium powinno ustalić własny system kontroli jakości.
5. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą, naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
6. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2–8 °C. Nie uŜywać po upływie daty waŜności podanej na fiolce. JeŜeli odczynniki
przechowywane były w innych warunkach niŜ wymagane, uŜytkownik musi sprawdzić ich stan. Nie ma
wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność tego produktu, dlatego dodatnie i ujemne kontrole powinny być
oznaczone równocześnie z próbkami pobranymi od pacjenta. JeŜeli zaobserwuje się nieoczekiwane barwienie,
którego nie moŜna wyjaśnić odchyleniami w procedurach laboratoryjnych i podejrzewa się problem
z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z serwisem technicznym Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało moŜe być uŜywane do znakowania wycinków tkanki utrwalonych w formalinie i
zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek przy pomocy metody odzyskiwania
epitopu przez ogrzewanie przez 20 minut. Optymalne wyniki uzyskuje się stosując roztwór EnVision™ FLEX
Target Retrieval Solution, Low pH, nr kat. K8005 lub Dako Target Retrieval Solution, Low pH, nr kat. S1699/S1700.
Alternatywnie, moŜe być stosowany przy innych rozcieńczeniach przeciwciała EnVision™ FLEX Target Retrieval
Solution, High pH, nr kat. K8000/K8010 (patrz Procedura barwienia). Wycinki tkanki nie mogą wyschnąć podczas
przygotowania ani podczas następującej po nim procedurze barwienia immunohistochemicznego.
Procedura barwienia
Rozcieńczenie: Polyclonal Rabbit Anti-Human c-erbB-2 Oncoprotein, nr kat. A 0485, moŜe być rozcieńczane do
uŜytku w zakresie 1:600–1:800 lub 1:1000–1:1200 (patrz Wizualizacja), kiedy jest stosowane na poddanych
(108413-005)
Dako Denmark A/S
A0485/PL/SSM/2013.01.10 str. 1/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
wstępnej obróbce, utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie wycinków ludzkiego raka piersi
z nadekspresją onkoproteiny c-erbB-2 i przy uŜyciu odzyskiwania epitopu w 20 minutowej inkubacji
w temperaturze pokojowej.
Wizualizacja: (HIER przy niskim pH):
K8000/K8010: EnVision™ FLEX, High pH, nr kat. K8000/K8010, w którym odczynnik High pH Target Retrieval
Solution z tego zestawu został zastąpiony przez EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH, nr kat.
K8005, przy uŜyciu przeciwciał w rozcieńczeniu 1:600–1:800,
K5007*: Dako Real™ EnVision™ Detection Kit, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse, nr kat. K5007, przy uŜyciu
przeciwciał w rozcieńczeniu 1:600–1:800.
Wizualizacja (HIER przy wysokim pH):
K8000/K8010: EnVision FLEX, High pH, nr kat. K8000/K8010, przy uŜyciu przeciwciał w rozcieńczeniu
1:1000–1:1200.
K5007*: Dako Real™ EnVision™ Detection Kit, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse, nr kat. K5007, przy uŜyciu
przeciwciał w rozcieńczeniu 1:1000–1:1200.
Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z wybranymi systemami do wizualizacji.
*K5007 jest niedostępny w Stanach Zjednoczonych.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania oraz
powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to Dako Rabbit
Immunoglobulin Fraction (Solid-Phase Absorbed), nr kat. X0936, rozcieńczona do takiego stęŜenia, jak
testowane przeciwciało. Do czasu określenia stabilności w aktualnym systemie zaleca się rozcieńczać produkt
bezpośrednio przed uŜyciem lub rozcieńczać w EnVision™ FLEX Antibody Diluent, nr kat. K8006 lub Dako
Antibody Diluent, nr kat. S0809.
Automatyzacja: Przeciwciała doskonale nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych
w systemach zautomatyzowanych, takich jak Autostainer Link 48 i Dako Autostainer Classic.
Ograniczenia produktu
Charakterystyka wyników
Od czasu do czasu moŜna zaobserwować barwienie cytoplazmatyczne. NaleŜy je pominąć, a tylko barwienie
błony komórkowej powinno być brane pod uwagę za swoiste dla onkoproteiny c-erbB-2.
Komórki oznakowane swoiście przez to przeciwciało wykazują barwienie ograniczone do błony.
Tkanki prawidłowe: Onkoproteina c-erbB-2 jest składnikiem zdrowej tkanki, a przeciwciało moŜe pokazywać słabe
znakowanie normalnych komórek nabłonkowych. W pewnych przypadkach nabłonek łuskowaty w przełyku i
migdałku moŜe wykazywać umiarkowane barwienie. Odkryto, Ŝe tkanka gruczołu prostaty jest takŜe umiarkowanie
dodatnia. Szeroki zakres innych zdrowych tkanek, takich jak gruczoł nadnerczy, szpik kostny, mózg, serce,
wątroba, płuca, mięśnie szkieletowe, skóra, śledziona, grasica i tarczyca daje wynik ujemny.
Tkanki nieprawidłowe: W jednych badaniach (1), podczas testowania tego przeciwciała 13/59 nowotworów
piersi, 8/29 gruczolakoraków płuc, 10/58 gruczolakoraków okręŜnicy i odbytnicy, 6/56 łuskowatych
gruczolakoraków płuc i 7/62 gruczolakoraków Ŝołądka wykazało nadekspresję onkoproteiny c-erbB-2 (całkowite
wybarwienie błony–od słabego do silnego-w więcej niŜ 10% komórek nowotworowych). W innych badaniach (2)
101/177 przypadków nowotworu komórek przejściowych pęcherza moczowego wykazało nadekspresję
onkoproteiny c-erbB-2. Z gruczolakoraków śluzówki macicy typu endometrialnego 15/112 przypadków wykazało
nadekspresję onkoproteiny c-erbB-2 (3). Nie znaleziono nadekspresji w 30 przypadkach gruczolakoraków
nerek, 12 nowotworów komórek wątroby i 17 czerniaka złośliwego (1).
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Koeppen HKW, Wright BD, Burt AD, Quirke P, McNicol AM, Dybdal NO, et al. Overexpression of
HER2/neu in solid tumours: an immunohistochemical survey. Histopathology 2001;38:96-104.
Moch H, Sauter G, Moore D, Mihatsch MJ, Gudat F, Waldman F. p53 and erbB-2 protein overexpression
areassociated with early invasion and metastasis in bladder cancer. Virchows Archiv A Pathol Anat 1993;
423:329-34.
Nielsen AL, Nyholm HCJ. p53 protein and c-erbB-2 protein (p185) expression in endometrial
adenocarcinomaof endometrioid type. Am J Clin Pathol 1994;102:76-9.
Klapper LN, Kirschbaum MH, Sela M, Yarden Y. Biochemical and clinical implications of the ErbB/HER
signaling network of growth factor receptors. [review]. Adv Cancer Res 2000;77:25-79.
Mendelsohn J, Baselga J. The EGF receptor family as targets for cancer therapy. Oncogene 2000;19:6550-65.
Baselga J, Norton L, Albanell J, Kim Y-M, Mendelsohn J. Recombinant humanized anti-HER2
antibody(Herceptin™) enhances the antitumor activity of paclitaxel and doxorubicin against HER2/neu
overexpressing human breast cancer xenografts. Cancer Res 1998;58:2825-31.
Fukushige S-I, Matsubara K-I, Yoshida M, Sasaki M, Suzuki T, Semba K, et al. Localization of a novel
v-erbB- related gene, c-erbB-2, on human chromosome 17 and its amplification in a gastric cancer cell line.
Mol Cell Biol1986;6:955-8.
Slamon DJ, Godolphin W, Jones LA, Holt JA, Wong SG, Keith DE, et al. Studies of the HER-2/neu protooncogene in human breast and ovarian cancer. Science 1989;244:707-12.
Objaśnieni a symboli
Nu mer katalo gow y
Tempe ratura prze chowyw ani a
Wyrób med yczn y d o
di agn ostyki in vitro
Nu mer serii
Spra wdź w in stru kcji
stosow ania
ZuŜyć przed
(108413-005)
Dako Denmark A/S
Produ cen t
A0485/PL/SSM/2013.01.10 str. 2/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17