Affirm VPIII

Affirm VPIII
Microbial Identification Test
8
670160JAA
2009/01
Polski
Zobacz objaœnienie symboli na koñcu ulotki.
PRZEZNACZENIE
Affirm VPIII Microbial Identification Test (Test do identyfikacji drobnoustrojów Affirm VPIII) jest testem DNA przeznaczonym do
wykrywania i identyfikacji kwasu nukleinowego gatunków Candida, Gardnerella vaginalis i Trichomonas vaginalis w próbkach p³ynu
pochwowego pochodz¹cych od pacjentek z objawami zapalenia pochwy/waginozy.
STRESZCZENIE I WYJAŒNIENIA
Zapalenie pochwy, jeden z najczêœciej spotykanych problemów medycyny klinicznej, jest co roku powodem ponad 10 milionów wizyt
lekarskich.1 Wyró¿nia siê trzy g³ówne kategorie zapalenia pochwy: waginozê bakteryjn¹ (WB), dro¿d¿akowe zapalenie pochwy
(kandydoza) i zapalenie pochwy wywo³ane przez T. vaginalis (rzêsistkowica). WB jest najczêœciej wystêpuj¹cym rodzajem zaka¿enia
pochwy i w zale¿noœci od populacji pacjentek stanowi od 15 do 50% wszystkich przypadków zapalenia pochwy/waginozy.2,3 Wprawdzie
bakteria G. vaginalis nie jest ju¿ traktowana jako jedyny czynnik etiologiczny waginozy bakteryjnej, jednak nadal jest uwa¿ana za jeden
z g³ównych gatunków powoduj¹cych zaka¿enia, z którymi wi¹¿e siê wzrost iloœci bakterii beztlenowych i ograniczenie fizjologicznej flory
Lactobacillus. Powik³ania waginozy bakteryjnej mog¹ byæ szczególnie istotne u kobiet ciê¿arnych, powoduj¹c podwy¿szone ryzyko
niepowodzenia ci¹¿y,4,5 w tym porodu6 przedwczesnego i urodzenia przedwczesnego.7,8 Ponadto ostatnie dane daj¹ podstawy do
przypuszczeñ, ¿e bakterie kojarzone z waginoz¹ bakteryjn¹ wystêpuj¹ce we florze œluzówki macicy mog¹ stanowiæ czynnik etiologiczny
zapalenia œluzówki macicy i zapalenia narz¹dów miednicy, niezale¿nie od zaka¿enia bakteriami Neisseria gonorrhoeae i Chlamydia
trachomatis.9 Waginoza bakteryjna jest równie¿ czynnikiem ryzyka rozwoju zapalenia przymacicza po histerektomii.10 Kandydoza
pochwy jest drug¹ pod wzglêdem czêstoœci wystêpowania postaci¹ zaka¿enia pochwy obserwowan¹ w ró¿nych warunkach klinicznych.3
Co najmniej jeden epizod kandydozy pochwy wyst¹pi statystycznie u trzech czwartych doros³ych kobiet, zaœ u 40-50% wyst¹pi tak¿e
drugi epizod. Oko³o 5% populacji doros³ych kobiet cierpi na nawracaj¹ce, czêsto oporne na leczenie zaka¿enie dro¿d¿akowe.3 Szacuje
siê, ¿e rzêsistkowica, niepodlegaj¹ca zg³oszeniu choroba przenoszona drog¹ p³ciow¹, dotyka corocznie 180 milionów osób na ca³ym
œwiecie.11 Oszacowano, ¿e co roku na rzêsistkowicê zapadaj¹ w Stanach Zjednoczonych 3 miliony kobiet.12 U kobiet ciê¿arnych, u
których wykryto obecnoœæ T. vaginalis, wystêpuje podwy¿szone ryzyko przedwczesnego przerwania b³on p³odowych7 oraz
przedwczesnego porodu i urodzenia.13 Obecnoœæ T. vaginalis stanowi czynnik ryzyka rozwoju pozabiegowych zaka¿eñ
ginekologicznych.14,15 Ponadto obecnoϾ T. vaginalis stanowi czynnik ryzyka rozwoju zapalenia przymacicza po histerektomii.16
Do badañ laboratoryjnych stosowanych w identyfikacji tych drobnoustrojów nale¿¹: badania mikroskopowe, test aminowy, barwienie
metod¹ Grama, badanie pH i hodowla.
ZASADY PROCEDURY
Dzia³anie testu Affirm VPIII Microbial Identification Test oparte jest na zasadzie hybrydyzacji kwasów nukleinowych. W testach
hybrydyzacji kwasów nukleinowych komplementarne nici kwasu ³¹cz¹ siê, tworz¹c specyficzne, dwuniciowe kompleksy nazywane
hybrydami.
W teœcie na obecnoœæ ka¿dego drobnoustroju u¿ywane s¹ dwa odrêbne wzorce kwasu jednoniciowego: wzorzec wi¹¿¹cy i wzorzec
barwi¹cy. Wzorce te s¹ komplementarne z niepowtarzalnymi sekwencjami genów przedmiotowego drobnoustroju. Wzorce wi¹¿¹ce
s¹ unieruchomione na kulce wewn¹trz karty analizy wzorców (PAC, Probe Analysis Card), która zawiera osobne kulki dla
poszczególnych przedmiotowych drobnoustrojów. Wzorce barwi¹ce znajduj¹ siê w szeregu cel kasety odczynnikowej (RC, Reagent
Cassette).
W trakcie przygotowywania próbka badanego materia³u jest poddawana dzia³aniu roztworu lizuj¹cego (L, Lysis Solution) i
ogrzewana. Proces ten powoduje przerwanie œcian komórkowych drobnoustrojów i uwolnienie kwasu nukleinowego (analitu).
Nastêpnie dodawany jest drugi roztwór, bufor (B, Buffer Solution). Stabilizuje on kwas nukleinowy i wytwarza stan niedoboru
warunkuj¹cy swoist¹ hybrydyzacjê. Na tym etapie próbka jest wprowadzana do pierwszej celi kasety odczynnikowej (RC) razem z
kart¹ PAC i rozpoczyna siê automatyczne przetwarzanie. Procesor BD MicroProbe przemieszcza kartê PAC miêdzy celami kasety
odczynnikowej (RC). Hybrydyzacja zachodzi na kulkach karty PAC w pierwszej i drugiej celi kasety odczynnikowej (RC). Hybrydyzacja
analitu we wzorcu wi¹¿¹cym na kulce zachodzi w celi 1, a hybrydyzacja wzorców barwi¹cych zachodzi w celi 2. Niezwi¹zane
sk³adniki próbek i wzorców s¹ wyp³ukiwane w celi 3. W celi 4 koniugat enzymu wi¹¿e siê ze zhybrydyzowanym analitem.
Niezwi¹zany koniugat jest wyp³ukiwany w celach 5 i 6. W celi 7 substrat wskaŸnika przechodzi w zabarwiony na niebiesko produkt,
pod warunkiem, ¿e na kulce obecny jest zwi¹zany koniugat enzymu. Ostatnim etapem jest odczyt zabarwienia kulek przypisanych
do poszczególnych drobnoustrojów oraz kontroli.
ODCZYNNIKI
Dostarczane materia³y
Karty Analizy Wzorców (PAC, Probe Analysis Cards) (24 lub 120 testów): Karty pakowane osobno, owiniête w poch³aniaj¹c¹
papierow¹ serwetkê zwil¿on¹ roztworem zawieraj¹cym azydek sodu (stê¿enie wagowo-objêtoœciowe 0,1%) pe³ni¹cy rolê
konserwantu. Ka¿da karta zawiera piêæ nastêpuj¹cych kulek: kontrola ujemna, Trichomonas, Gardnerella, Candida i kontrola
dodatnia.
Kasety Odczynnikowe (RC, Reagent Cassettes) (24 lub 120 testów): Odczynniki znajduj¹ siê w szczelnie zamkniêtych, pokrytych foli¹
kasetach z szeregiem cel. Ka¿da kaseta ma siedem cel. Zawieraj¹ one (numeracja od przodu ku ty³owi kasety):
Cela nr 1 Zbiornik na próbki pochodz¹ce od pacjentki, fabrycznie pusty
Cela nr 2 Roztwór hybrydyzacyjny, 350 µL: wzorzec barwi¹cy, formamid, buforowany roztwór chaotropowy
Cela nr 3 Roztwór p³ucz¹cy, 750 µL: detergent, roztwór buforowy, konserwant (Proclin)
Cela nr 4 Koniugat, 500 µL: koniugat enzymu, konserwant (Proclin)
Cela nr 5 Roztwór p³ucz¹cy, 750 µL: detergent, roztwór buforowy, konserwant (Proclin)
Cela nr 6 Roztwór p³ucz¹cy, 750 µL: detergent, roztwór buforowy, konserwant (Proclin)
Cela nr 7 Bufor substratu, 500 µL: buforowany roztwór nadtlenku
Roztwór substratu (S, Substrate Solution) (czerwona nakrywka, 3,4 mL na 24 testy; butelka, 12 mL na 120 testów): roztwór
pakowany osobno w torebce foliowej; substrat wskaŸnika, stabilizator, alkohol
Roztwór lizuj¹cy (L) (niebieska nakrywka, 10,8 mL na 24 testy; butelka, 48 mL na 120 testów): detergent, roztwór buforowy,
konserwant (Proclin)
Roztwór buforowy (B) (zielona nakrywka, 15 mL na 24 testy; butelka, 72 mL na 120 testów): buforowany roztwór chaotropowy,
formamid
Koñcówki filtruj¹ce (FT, Filter Tips) (24 lub 120 testów)
Nakrywki do probówek na próbki (SCC, Sample Collection Caps) (24 testów)*
Probówki na próbki (SCT, Sample Collection Tubes) (24 testów)*
Osobno pakowane, wstêpnie naciête, ja³owe wymazówki (24 testów)*
*Nie do³¹czone w zestawie 120 testów.
Materia³y wymagane, ale niedostarczane
Dostêpne w firmie BD:
• Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System (system transportu w temperaturze otoczenia Affirm VPIII)
• Affirm VPIII Sample Collection Sets (zestawy do pobierania próbek Affirm VPIII)
• BD MicroProbe Processor (procesor BD MicroProbe)
• BD MicroProbe Lysis Block (zespó³ lizuj¹cy BD MicroProbe)
• Termometr
• Pipeta odpowiednia do dozowania roztworu lizuj¹cego i roztworu buforowego na 120 testów
Ostrze¿enia i œrodki ostro¿noœci
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przed u¿yciem dok³adnie zapoznaæ siê ze wszystkimi instrukcjami.
Do pobierania próbek u¿ywaæ wy³¹cznie systemu Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System, Affirm VPIII Sample
Collection Set lub wymazówek wchodz¹cych w sk³ad zestawu Affirm VPIII Microbial Identification Test Kit. U¿ywaæ tylko próbek
p³ynu pochwowego pochodz¹cych od pacjentek z objawami zapalenia pochwy/waginozy. Podczas ka¿dego testu nale¿y
monitorowaæ temperaturê zespo³u lizuj¹cego, która powinna wynosiæ 85 ± 5 °C, i upewniæ siê, ¿e temperatura w œrodowisku, w
którym wykonywane s¹ testy, mieœci siê w zakresie od 22 do 28 °C.
Roztwór substratu (S): substancja zawiera alkohol i jest palna. Nie zbli¿aæ do Ÿróde³ ciep³a, iskier i p³omieni. Przechowywany
pojemnik powinien byæ szczelnie zamkniêty, aby zapobiec parowaniu.
Papierowa serwetka, w któr¹ zapakowana jest karta PAC: serwetka jest nas¹czona azydkiem sodu (stê¿enie wagowo-objêtoœciowe 0,1%).
Azydek sodu jest silnie toksyczny w wypadku przedostania siê do dróg oddechowych, kontaktu ze skór¹ lub po³kniêcia. W kontakcie z
kwasami uwalnia silnie toksyczny gaz. Jeœli dojdzie do kontaktu ze skór¹, natychmiast sp³ukaæ du¿¹ iloœci¹ wody.
W sk³ad odczynników wchodz¹ substancje, które mog¹ dzia³aæ dra¿ni¹co lub ¿r¹co w kontakcie ze skór¹, oczami lub b³onami
œluzowymi. Podczas pracy z odczynnikami nale¿y mieæ na sobie rêkawiczki, okulary ochronne i fartuch, a tak¿e stosowaæ
standardowe œrodki ostro¿noœci obowi¹zuj¹ce w laboratorium. W razie po³kniêcia wezwaæ lekarza. Jeœli dojdzie do kontaktu ze
skór¹ lub oczami, sp³ukiwaæ obficie wod¹.
W próbkach materia³ów pochodzenia klinicznego mog¹ byæ obecne drobnoustroje chorobotwórcze, w tym wirusy zapalenia
w¹troby i wirus ludzkiego niedoboru odpornoœci (HIV). Podczas pracy z materia³ami ska¿onymi krwi¹ i innymi p³ynami
ustrojowym nale¿y przestrzegaæ „Standardowych œrodków ostro¿noœci”17-20 oraz wytycznych obowi¹zuj¹cych w danej
placówce.
Nale¿y ustaliæ procedury prawid³owego postêpowania z materia³ami i ich likwidacji. Rozlane próbki pochodz¹ce od pacjentów
nale¿y natychmiast wycieraæ i dezynfekowaæ odpowiednim œrodkiem dezynfekcyjnym. Œrodki czyszcz¹ce traktowaæ nastêpnie jako
odpady stwarzaj¹ce zagro¿enie biologiczne.
Nie nale¿y u¿ywaæ ja³owej wymazówki, jeœli opakowanie jest otwarte lub uszkodzone. Unikaæ dotykania kulek. Unikaæ
zanieczyszczania koñcówek zakraplaczy. Nie u¿ywaæ odczynnika po terminie wa¿noœci.
Przygotowanie odczynników
Wszystkie dostarczane odczynniki s¹ gotowe do u¿ytku.
Przechowywanie odczynników
Zestaw testowy Affirm VPIII pozostaje stabilny do daty wa¿noœci zamieszczonej na pude³ku zestawu, pod warunkiem,
¿e przechowywany jest w temperaturze od 2 do 8°C. Dopuszczalne jest tak¿e przechowywanie w temperaturze pokojowej
(maksymalnie 30°C) przez okres nie d³u¿szy ni¿ 3 miesi¹ce. Wszystkie odczynniki i karty PAC przed u¿yciem musz¹ mieæ temperaturê
od 22 do 28 °C. Wszystkie napoczête odczynniki najwygodniej jest przechowywaæ w temperaturze pokojowej. Odczynniki
sch³odzone nale¿y przed u¿yciem doprowadziæ do temperatury pokojowej, pozostawiaj¹c na 30 minut.
UWAGA: Roztwór buforowy (B) str¹ca siê po sch³odzeniu. Nale¿y pozostawiæ do ogrzania w temperaturze pokojowej na co najmniej
30 minut, a nastêpnie wstrz¹saæ butelkê przez 10-15 sekund, a¿ do rozpuszczenia ca³ego osadu.
2
Objawy niestabilnoœci
Objawy pogorszenia jakoœci obserwowane po zakoñczeniu testu s¹ nastêpuj¹ce: kontrola dodatnia NIE jest niebieska; kontrola
ujemna NIE jest bezbarwna.
POBIERANIE I TRANSPORT PRÓBEK
Pobieranie próbek
Pobieranie próbek jest niezwykle istotnym etapem badania. Personel pobieraj¹cy próbki p³ynu pochwowego powinien byæ
odpowiednio przeszkolony, co zminimalizuje ryzyko pobrania nieprawid³owych próbek. Do pobierania próbek u¿ywaæ wy³¹cznie
systemu Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System, zestaw Affirm VPIII Sample Collection Set lub wymazówek
wchodz¹cych w sk³ad zestawu Affirm VPIII Microbial Identification Test Kit. Do innych testów, np. hodowli lub mikroskopowego
badania preparatów, nale¿y u¿ywaæ osobnych wymazówek.
Pobieranie próbek p³ynu pochwowego
1.
Opatrzyæ probówkê na próbkê (SCT) informacjami umo¿liwiaj¹cymi identyfikacjê pacjentki. Zaznaczyæ czas pobrania materia³u.
2.
U³o¿yæ pacjentkê w pozycji takiej jak do badania ginekologicznego. Wprowadziæ wziernik do pochwy, aby umo¿liwiæ
obserwacjê tylnego sklepienia pochwy.*
3.
Za pomoc¹ ja³owej wymazówki pobraæ wymaz z tylnego sklepienia pochwy. Dwu- lub trzykrotnie okrêciæ wacik wymazówki lub
przemieœciæ go ruchem okrê¿nym po œcianie pochwy, tak aby na ca³ym obwodzie zetkn¹³ siê ze œcian¹. Podczas wyjmowania
wymazówki pobraæ wymaz z bocznej œciany pochwy.
4.
Niezw³ocznie umieœciæ wymazówkê w probówce na próbkê (SCT).
5.
Dotykaj¹c wacikiem wymazówki DNA probówki, chwyciæ wstêpnie naciêty uchwyt wymazówki tu¿ nad górn¹ krawêdzi¹ probówki
i zgi¹æ go, a¿ pêknie. Gdy wymazówka jest do koñca wprowadzona do probówki, naciêcie na uchwycie wypada na wysokoœci ok.
1 cm nad krawêdzi¹ probówki. Wyrzuciæ od³amany uchwyt do pojemnika na odpady zakaŸne.
6.
Na³o¿yæ nakrywkê na ods³oniêty koniec wymazówki i mocno wcisn¹æ j¹ na probówkê. Prawid³owo za³o¿ona nakrywka
„wskoczy” na probówkê.
*Podczas badañ klinicznych instrukcje dla oœrodków przewidywa³y u¿ycie nieposmarowanego wziernika. Dodatkowe informacje
zamieszczono w czêœci „Substancje zak³ócaj¹ce”.
PRZECHOWYWANIE I TRANSPORT PRÓBEK
Przy u¿yciu systemu Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System (ATTS): £¹czny czas od pobrania próbki do rozpoczêcia
przygotowania próbki nie powinien przekraczaæ 72 h, jeœli próbka materia³u jest przechowywana w temperaturze otoczenia
(od 15 do 30°C). System nadaje siê tak¿e do transportu w ch³odziarce (temperatura od 2 do 8 °C).
Przy u¿yciu zestawu Affirm VPIII Sample Collection Set lub wymazówek wchodz¹cych w sk³ad zestawu Affirm VPIII Microbial
Identification Test Kit: £¹czny czas od umieszczenia wymazówki w probówce na próbkê do rozpoczêcia przygotowywania próbki nie
powinien przekraczaæ 1 h, jeœli próbka przechowywana jest w temperaturze pokojowej, lub 4 h, jeœli próbka przechowywana jest w
temperaturze od 2 do 8°C.
PROCEDURA
Przed podjêciem dalszych czynnoœci dok³adnie zapoznaæ siê ze wszystkimi instrukcjami.
Przygotowanie próbek
Nale¿y korzystaæ z ilustracji przebiegu procedury do³¹czonych do procesora BD MicroProbe Processor
1. Upewniæ siê, ¿e zespó³ lizuj¹cy BD MicroProbe Lysis Block ma temperaturê 85 ± 5 °C, a odczynniki maj¹ temperaturê 22–28 °C i
s¹ dobrze wymieszane.
2. Zdj¹æ nakrywkê z probówki na próbkê (SCT), zwracaj¹c uwagê, by trzonek wymazówki by³ pewnie osadzony w nakrywce.
Dodaæ 12 kropel lub odmierzyæ pipet¹ 0,4 mL roztworu lizuj¹cego (L) do probówki. Podczas zakraplania trzymaæ zakraplacz
pionowo.
3. Przez co najmniej 10 sekund energicznie mieszaæ zawartoœæ probówki, obracaj¹c wymazówkê i poruszaj¹c j¹ w górê i w dó³,
jednoczeœnie przyciskaj¹c do œcianki probówki.
4. W³o¿yæ wymazówkê z nakrywk¹ z powrotem do probówki i zamkn¹æ probówkê, aby zapobiec parowaniu.
5. Wprowadziæ probówkê do celi zespo³u lizuj¹cego w celu ogrzania.
6. Inkubowaæ probówkê w zespole lizuj¹cym przez 10 minut (co najmniej 10 minut, ale nie d³u¿ej ni¿ 20 minut). W tym kroku u¿yæ
minutnika.
7. Wyj¹æ probówkê z zespo³u lizuj¹cego.
8. Dodaæ 12 kropel lub odmierzyæ pipet¹ 0,6 mL dobrze wymieszanego roztworu buforowego (B) do probówki z wymazówk¹.
Unikaæ dotykania probówki koñcówk¹ zakraplacza.
9. Ponownie szczelnie zamkn¹æ probówkê nakrywk¹ i wymieszaæ, energicznie potrz¹saj¹c probówk¹ 10 razy.
10. Aby rozpocz¹æ automatyczne przetwarzanie przygotowanej próbki, wycisn¹æ z wacika wymazówki jak najwiêcej p³ynu, unosz¹c
wacik nad poziom p³ynu i dociskaj¹c go do œcianki probówki przez co najmniej 10 sekund. Wyrzuciæ wymazówki do pojemnika
na odpady stwarzaj¹ce zagro¿enie biologiczne. Nacisn¹æ koñcówki filtruj¹ce (FT) na wszystkie probówki na próbki (SCT).
UWAGA: Przygotowane próbki mo¿na przechowywaæ w temperaturze pokojowej przez czas maks. 24 h.
PRZETWARZANIE AUTOMATYCZNE
Uwaga: Przed przejœciem do dalszych czynnoœci nale¿y upewniæ siê, ¿e wszystkie odczynniki maj¹ temperaturê 22–28 °C. Przy ka¿dej
serii nale¿y sprawdzaæ, czy temperatura w œrodowisku, w którym wykonywane s¹ testy, mieœci siê w zakresie od 22 do 28 °C.
3
Nale¿y korzystaæ z ilustracji przebiegu procedury do³¹czonych do procesora BD MicroProbe Processor
1. Jeœli karta Program Card (karta programu) testu Affirm VPIII Microbial Identification Test nie znajduje siê jeszcze w procesorze
BD MicroProbe Processor, w³o¿yæ kartê Program Card do gniazda po prawej stronie z przodu urz¹dzenia, tak aby strona zadrukowana
karty by³a zwrócona do góry, a strza³ka skierowana w stronê urz¹dzenia. Podczas wk³adania karty procesor musi byæ wy³¹czony.
Gdy procesor jest wy³¹czony, nie œwieci ¿adna lampka na panelu sterowania.
2. W³¹czyæ procesor. W fazie pocz¹tkowej ramiê procesora przemieœci siê do pozycji wyjœciowej. W trakcie procedury nale¿y
postêpowaæ zgodnie z informacjami pojawiaj¹cymi siê na wyœwietlaczu procesora. Jeœli potrzebne s¹ dodatkowe wyjaœnienia,
nale¿y nacisn¹æ klawisz [HELP] (POMOC).
3. Wyj¹æ zasobnik na kasety z procesora. Dodawanie próbek przebiega ³atwiej, gdy zasobnik jest wyjêty.
4. Dla ka¿dej testowanej próbki wybraæ jedn¹ kasetê odczynnikow¹ (RC). Niezmywalnym pisakiem nanieœæ na przód kasety (RC)
dane identyfikacyjne pacjentki/próbki. Ostro¿nie œci¹gn¹æ foliê ochronn¹ z kasety, zaczynaj¹c od strony BEZ klapki odgiêtej w
górê. W³o¿yæ kasety odczynnikowe (RC) do zasobnika na kasety, zape³niaj¹c zasobnik od œrodka w stronê boków, i w miarê
mo¿liwoœci umieszczaj¹c tak¹ sam¹ liczbê kaset po obu stronach ramienia.
5. Otworzyæ torebkê zawieraj¹c¹ kartê PAC, nieznacznie wysun¹æ kartê PAC z torebki i w wyznaczonym miejscu nanieœæ na karcie
PAC dane identyfikacyjne pacjentki/próbki.
6. Nacisn¹æ klawisz [RUN]. Zostanie wyœwietlona instrukcja „Add Substrate” (Dodaj substrat). Dodaæ 4 krople (0,1 mL) roztworu
substratu (S) do celi nr 7 kasety odczynnikowej (RC). Zamkn¹æ zakraplacz nakrywk¹, aby unikn¹æ parowania.
7. Nacisn¹æ klawisz [RUN] (URUCHOM). Zostanie wyœwietlona instrukcja „Add Sample” (Dodaj próbkê). Dopasowaæ ka¿d¹ probówkê
z próbk¹ (SCT)/koñcówkê filtruj¹c¹ (FT) do odpowiednio oznaczonej kasety odczynnikowej (RC). Odwróciæ probówkê z próbk¹ (SCT)
i wycisn¹æ ca³¹ zawartoœæ probówki przez koñcówkê filtruj¹c¹ (FT) do zbiorniczka celi nr 1 odpowiedniej kasety odczynnikowej (RC).
Wyrzuciæ probówkê po próbce do pojemnika na odpady stwarzaj¹ce zagro¿enie biologiczne. Pojawienie siê piany na koñcówce
filtruj¹cej stanowi dobre potwierdzenie wprowadzenia ca³ej próbki.
8. Nacisn¹æ klawisz [RUN]. Zostanie wyœwietlona instrukcja „Place PAC” (Umieœæ kartê PAC). Umieœciæ oznaczone karty PAC
w celach nr 1 odpowiednio oznaczonych kaset odczynnikowych (RC). Unikaæ dotykania kulek.
9. Nacisn¹æ klawisz [RUN]. Zostanie wyœwietlona instrukcja „Place Caddy” (Umieœæ zasobnik). Ostro¿nie w³o¿yæ zasobnik z
kasetami do procesora, uwa¿aj¹c, by nie rozlaæ odczynników. Upewniæ siê, ¿e zasobnik jest pewnie osadzony na wszystkich
czterech ko³kach ustalaj¹cych.
10. Ponownie nacisn¹æ klawisz [RUN]. Ramiê procesora zacznie przemieszczaæ siê do przodu. W trakcie procedury testowania
procesor bêdzie automatycznie pobiera³ i przemieszcza³ karty PAC. Urz¹dzenie rozpocznie odmierzanie czasu przetwarzania
i wyœwietli komunikat „Please wait. Processing 32:50” (Proszê czekaæ. Czas przetwarzania 32:50), wskazuj¹c liczbê minut do
zakoñczenia pracy. Po zakoñczeniu przetwarzania wygenerowany zostanie sygna³ dŸwiêkowy i bêdzie mo¿na wyj¹æ kartê PAC.
11. Wyj¹æ kartê PAC i delikatnie osuszyæ rêcznikiem papierowym. Jak najszybciej po zakoñczeniu testu nale¿y odczytaæ wyniki dla
wszystkich próbek. Kartê PAC nale¿y ogl¹daæ na bia³ym tle, przy normalnym natê¿eniu oœwietlenia.
Uwaga: Nale¿y wyj¹æ karty PAC z procesora przed naciœniêciem przycisku [RUN] w celu rozpoczêcia nastêpnej serii.
KONTROLA JAKOŒCI
Affirm VPIII Microbial Identification Test zawiera po dwie kontrole wewnêtrzne na ka¿dej karcie PAC: kulkê kontroli dodatniej i
kulkê kontroli ujemnej. Kulki kontrolne s¹ testowane równolegle ze wszystkimi próbkami pochodz¹cymi od pacjentki w celu
potwierdzenia prawid³owego dzia³ania karty PAC, kasety odczynnikowej (RC) i procesora. Kontrola dodatnia pozwala dodatkowo
wykluczyæ interferencje z próbk¹. Kontrola ujemna dodatkowo pozwala wykluczyæ nieswoiste wi¹zanie próbki.
W prawid³owo przebiegaj¹cym teœcie po zakoñczeniu przetwarzania kulka kontroli dodatniej powinna byæ niebieska, a kulka
kontroli ujemnej powinna pozostaæ bezbarwna (tj. nie powinien byæ na niej widoczny kolor niebieski). Jeœli kontrola dodatnia nie
zabarwia siê na niebiesko i/lub kontrola ujemna nie pozostaje bezbarwna, wyniki testu s¹ niewiarygodne i nie nale¿y braæ pod
uwagê wyników uzyskanych z próbki pacjentki.
Ka¿d¹ partiê odczynników nale¿y przetestowaæ w celu potwierdzenia prawid³owej lizy próbki materia³u i uwalniania kwasu
nukleinowego drobnoustroju — nale¿y w tym celu u¿yæ wymazu ze œwie¿ej hodowli wskaŸnikowej (po 18-24 h wzrostu) lub
fabrycznie przygotowanego, dostêpnego w handlu wymazu Candida albicans (ATCC 18804, 14053, 10231 lub 60193). Poniewa¿
Trichomonas vaginalis i Gardnerella vaginalis ulegaj¹ lizie szybciej ni¿ gatunki Candida, kontrolê prawid³owej lizy bakterii wystarczy
wykonaæ na gatunkach Candida. Potwierdzeniem prawid³owego przebiegu procesu lizy próbki jest niebieskie zabarwienie kulki
Candida w teœcie Candida albicans, bezbarwna kulka Gardnerella, bezbarwna kulka Trichomonas oraz zadowalaj¹ce wyniki kontroli
wewnêtrznych (tj. niebieska kulka kontroli dodatniej i bezbarwna kulka kontroli ujemnej).
W celu dodatkowego zweryfikowania dzia³ania testu mo¿liwe jest przeprowadzenie dodatkowych testów jakoœci z u¿yciem
œwie¿ych hodowli (po 18-24 h wzrostu) wskaŸnikowych szczepów C. albicans (ATCC 10231), T. vaginalis (ATCC 30001) i G. vaginalis
(ATCC 14018) lub za pomoc¹ dostêpnych w handlu, specjalnie spreparowanych wymazów.
Przeprowadzaj¹c kontrolê jakoœci (QC) na wszystkich trzech gatunkach mikroorganizmów, nale¿y upewniæ siê, ¿e wyniki kontroli
wewnêtrznych s¹ zadowalaj¹ce (tj. niebieska kulka kontroli dodatniej i bezbarwna kulka kontroli ujemnej), i interpretowaæ wyniki w
nastêpuj¹cy sposób:
1. Jeœli kulki wszystkich trzech gatunków barwi¹ siê na niebiesko, wszystkie wyniki pacjentów mo¿na uznaæ za wa¿ne.
2. Jeœli kulka Candida nie barwi siê na niebiesko, ca³¹ seriê testów kontroli jakoœci nale¿y uznaæ za niewa¿n¹. Nale¿y zbadaæ
przyczyny niepowodzenia przy kontroli jakoœci, a wszystkie wyniki pacjentów nale¿y uznaæ za niewa¿ne. Aby uzyskaæ pomoc,
nale¿y skontaktowaæ siê z lokalnym przedstawicielstwem BD.
3. Jeœli kulki Candida i Gardnerella barwi¹ siê na niebiesko, ale kulka Trichomonas nie barwi siê, seriê testów kontroli jakoœci nale¿y
uznaæ za wa¿n¹ w zakresie testów Candida i Gardnerella. Wa¿ne s¹ wy³¹cznie wyniki pacjentów dotycz¹ce Candida i
Gardnerella. Nale¿y zbadaæ przyczyny niepowodzenia kontroli jakoœci. Aby uzyskaæ pomoc, nale¿y skontaktowaæ siê z lokalnym
przedstawicielstwem BD.
4. Jeœli kulki Candida i Trichomonas barwi¹ siê na niebiesko, ale kulka Gardnerella nie barwi siê, seriê testów kontroli jakoœci nale¿y
uznaæ za wa¿n¹ w zakresie testów Candida i Trichomonas. Wa¿ne s¹ wy³¹cznie wyniki pacjentów dotycz¹ce Candida i
4
Trichomonas. Nale¿y zbadaæ przyczyny niepowodzenia kontroli jakoœci. Aby uzyskaæ pomoc, nale¿y skontaktowaæ siê z lokalnym
przedstawicielstwem BD.
Nale¿y postêpowaæ zgodnie z obowi¹zuj¹cymi wymogami kontroli jakoœci, wynikaj¹cymi z przepisów miejscowych, krajowych i (lub)
federalnych, wymogami akredytacji i rutynowymi procedurami kontroli jakoœci w danym laboratorium. Zaleca siê, aby u¿ytkownik
stosowa³ siê do odpowiednich zaleceñ CLSI (dawniej NCCLS) i przepisów CLIA, dotycz¹cych sposobów kontroli jakoœci.
INTERPRETACJA WYNIKÓW
Wynik okreœla siê na podstawie zabarwienia lub braku zabarwienia kulki testowej. O wyniku dodatnim œwiadczy obecnoœæ
zabarwienia niebieskiego na kulce w³aœciwej dla przedmiotowego drobnoustroju, obserwowanej na bia³ym tle. Brak jakiegokolwiek
niebieskiego zabarwienia na kulce w³aœciwej dla przedmiotowego drobnoustroju oznacza wynik ujemny.
Wynik dodatni dla Candida, Gardnerella i/lub Trichomonas oznacza odpowiednio obecnoœæ w próbce kwasu nukleinowego
gatunków Candida (C. albicans, C. glabrata, C. kefyr, C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis), G. vaginalis i/lub T. vaginalis oraz — o
ile potwierdzaj¹ to kliniczne objawy przedmiotowe i subiektywne — wskazuje, ¿e pacjentka cierpi na kandydozê, waginozê
bakteryjn¹ i/lub rzêsistkowicê. Czêste s¹ zaka¿enia wiêcej ni¿ jednym drobnoustrojem.
Ujemne wyniki testu na obecnoœæ Candida, Gardnerella lub Trichomonas pozwalaj¹ przypuszczaæ, ¿e u pacjentki nie wystêpuje
kandydoza, waginoza bakteryjna i/lub rzêsistkowica, o ile przypuszczenie takie potwierdzaj¹ kliniczne objawy przedmiotowe i
subiektywne.
OGRANICZENIA PROCEDURY
Ten test jest przeznaczony do u¿ytku z systemem Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System, zestawem Affirm VPIII Sample
Collection Set lub wymazówkami wchodz¹cymi w sk³ad zestawu Affirm VPIII Microbial Identification Test Kit. Nie oceniono innych
metod pobierania próbek.
Warunkiem uzyskania optymalnych wyników testu jest prawid³owe pobranie próbek. Nieprawid³owe pobranie próbek, a tak¿e
nieprawid³owe postêpowanie z próbkami i/lub przechowywanie ich w niew³aœciwych warunkach mo¿e mieæ wp³yw na wyniki testu.
Ujemny wynik testu nie wyklucza obecnoœci zapalenia pochwy/waginozy.
Jeœli u¿ywany jest system Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System, próbki przechowywane przez czas d³u¿szy ni¿ 72 h w
temperaturze otoczenia (od 15 do 30°C) lub w ch³odziarce (od 2 do 8 °C) mog¹ dawaæ fa³szywe wyniki. Jeœli u¿ywany jest zestaw
Affirm VPIII Sample Collection Kit lub wymazówki wchodz¹ce w sk³ad zestawu Affirm VPIII Microbial Identification Kit, próbki
przechowywane przed przygotowaniem w temperaturze pokojowej przez czas d³u¿szy ni¿ 1 h lub w temperaturze od 2 do 8°C przez
czas d³u¿szy ni¿ 4 h mog¹ dawaæ fa³szywe wyniki. Przygotowane próbki przechowywane przed przetworzeniem w temperaturze
pokojowej d³u¿ej ni¿ 24 h mog¹ dawaæ niedok³adne wyniki.
W trakcie wykonywania tego testu temperatura w œrodowisku musi wynosiæ od 22 do 28 °C.
Ujemny wynik testu na obecnoœæ Candida, Gardnerella i/lub Trichomonas oznacza, ¿e próbka mo¿e zawieraæ kwas nukleinowy
pochodz¹cy z mniej ni¿ 1 x 104 komórek Candida, 2 x 105 CFU G. vaginalis lub 5 x 103 rzêsistków.
Test Affirm VPIII Microbial Identification Test wykrywa obecnoœæ G. vaginalis w stê¿eniach wiêkszych ni¿ 2 x 105 CFU na próbkê. Taki
poziom nie pozwala na ostateczne rozpoznanie.
Obecnoœæ G. vaginalis sugeruje wprawdzie waginozê bakteryjn¹, nie jest jednak podstaw¹ do jednoznacznego rozpoznania.
Podobnie jak w wielu innych sytuacjach klinicznych, rozpoznanie nie powinno opieraæ siê na wynikach jednego testu
laboratoryjnego. Wyniki nale¿y interpretowaæ w kontekœcie innych dostêpnych dla lekarza danych klinicznych i laboratoryjnych,
takich jak wyniki testów pH, test aminowy, obecnoœæ komórek charakterystycznych („clue cells”) i wystêpowanie up³awów.
Kobiety, u których wystêpuj¹ up³awy, powinny byæ przebadane w kierunku czynników ryzyka wyst¹pienia zapalenia szyjki macicy i
zapalenia narz¹dów miednicy oraz na obecnoœæ innych drobnoustrojów, w tym N. gonorrhoeae i C. trachomatis.
Zapalenie pochwy/waginozê wywo³uje najczêœciej G. vaginalis, gatunki Candida i T. vaginalis. Objawy zapalenia pochwy mog¹
wyst¹piæ tak¿e w zespole wstrz¹su toksycznego (wywo³anego przez Staphylococcus aureus), pod wp³ywem czynników nieswoistych
lub przez specyficzne drobnoustroje. Mo¿liwe jest wystêpowanie zaka¿eñ mieszanych. Dlatego wynik testu wskazuj¹cy na obecnoœæ
gatunków Candida, G. vaginalis i/lub T. vaginalis nie wyklucza obecnoœci innych drobnoustrojów, w tym Mobiluncus mulieris,
Mycoplasma hominis i/lub Prevotella bivia.
Cryptococcus neoformans w stê¿eniach przekraczaj¹cych 1 x 108 dro¿d¿y/mL reaguje z testem Affirm VPIII Microbial Identification
Test na obecnoœæ gatunków Candida. C. neoformans rzadko wystêpuje w pochwie.
M. mulieris w stê¿eniach przekraczaj¹cych 4 x 106 bakterii/mL oraz Bifidobacterium dentium w stê¿eniach przekraczaj¹cych
8 x 105 bakterii/mL mo¿e reagowaæ niespecyficznie z testem Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ G. vaginalis.
B. dentium rzadko wystêpuje w pochwie.
Metoda zastosowana w teœcie Affirm VPIII Microbial Identification Test jest przeznaczona do badania próbek p³ynu pochwowego
pochodz¹cych od pacjentek z objawami zapalenia pochwy/waginozy. Nie okreœlono dzia³ania testu w odniesieniu do innych próbek
ani innych populacji pacjentów.
Nie jest znane dzia³anie tego testu na próbkach pobranych od pacjentek w trakcie lub bezpoœrednio po leczeniu antybiotykowym.
Obecnoœæ lub brak bakterii z gatunków Candida, G. vaginalis lub T. vaginalis nie mo¿e s³u¿yæ jako podstawa do okreœlenia
powodzenia lub niepowodzenia leczenia.
U¿ycie nieoryginalnych odczynników lub nieprzestrzeganie instrukcji u¿ycia mo¿e negatywnie wp³yn¹æ na dzia³anie testu, tak jak
zaznaczono to na etykiecie.
WARTOŒCI OCZEKIWANE I CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW
Niezale¿ni badacze oceniali test Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ gatunków Candida, G. vaginalis i T. vaginalis w próbkach
p³ynu pochwowego. Próbki pochodzi³y od kobiet z objawami zapalenia pochwy/waginozy lub od kobiet zaliczanych do grupy wysokiego ryzyka
wyst¹pienia zaka¿enia.21
Badacze rejestrowali przypadki bakteryjnego zapalenia pochwy, kandydozy i rzêsistkowicy. Pobierano równie¿ próbki i analizowano
je przy u¿yciu testu Affirm VPIII Microbial Identification Test. Ponadto badacze pobierali próbki przekazywane do laboratorium w
celu wyizolowania hodowli i identyfikacji oraz w celu przygotowania rozmazu do barwienia metod¹ Grama.
5
Gatunki Candida
Czu³oœæ i swoistoœæ testu Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ gatunków Candida ustalono na podstawie porównania z
tradycyjnymi metodami mikroskopowymi i opartymi na izolacji hodowli. Wyniki testu Affirm VPIII na obecnoœæ gatunków Candida oraz
wyniki badañ mikroskopowych oceniano na grupie 479 kobiet, u których wystêpowa³y kliniczne objawy przedmiotowe i subiektywne
dro¿d¿akowego zapalenia pochwy, oraz na grupie 261 kobiet uznanych za silnie nara¿one na zaka¿enie z innych powodów, takich jak
ci¹¿a (n=186), stosowanie antykoncepcji lub kontakty z pacjentami, u których stwierdzono choroby przenoszone drog¹ p³ciow¹. £¹cznie
przebadano 740 pacjentek. Do porównania u¿yto klinicznie istotnego poziomu izolacji hodowli dro¿d¿y (>104 CFU na jeden mL p³ynu
pochwowego), poniewa¿ wykazano (por. literatura przedmiotu), ¿e poziom ten ma zwi¹zek z dro¿d¿akowym zapaleniem pochwy. W
przypadku oko³o 15% pochodz¹cych od pacjentek próbek przebadanych na obecnoœæ dro¿d¿y uzyskano istotny klinicznie wynik dodatni
testu Affirm VPIII i izolacji hodowli.
W przypadkach ewidentnie fa³szywych wyników dodatnich, gdy wynik testu Affirm VPIII by³ dodatni, a wynik testu porównawczego
ujemny, zastosowano alternatywne metody weryfikacji wyniku testu Affirm VPIII. Zweryfikowana czu³oœæ/swoistoœæ u pacjentek z
pierwotnymi dolegliwoœciami pochwy (n=479) i u wszystkich pacjentek (n=740) wynosi³a odpowiednio 82%/98,4% i 81%/98,2%.
Test Affirm VPIII jest bardziej czu³y ni¿ badanie œwie¿ego preparatu lub identyfikacja dro¿d¿y metod¹ Grama przez porównanie z
hodowl¹ istotn¹ klinicznie. Zobacz Tabela 1.
Niezweryfikowana czu³oœæ/swoistoœæ testu Affirm VPIII w porównaniu z hodowl¹ klinicznie istotn¹ u pacjentek z pierwotnymi
dolegliwoœciami pochwy (n=479) i u wszystkich pacjentek (n=740) wynosi³a odpowiednio 79%/95% i 78%/95,9%. Zobacz Tabela 1.
Gardnerella vaginalis
Czu³oœæ i swoistoœæ testu Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ G. vaginalis ustalono w grupie 299 pacjentek na
podstawie porównania z tradycyjnymi metodami mikroskopowymi i opartymi na izolacji hodowli. Wyniki testu Affirm VPIII
porównywano z istotnymi klinicznie stê¿eniami G. vaginalis, okreœlonymi jako >105 CFU na jeden mL p³ynu pochowego.13 Spoœród
299 pacjentek badanych w kierunku waginozy bakteryjnej, u 51% (152) uzyskano wynik dodatni w badaniu metod¹ Grama, a u
56% (168) uzyskano wynik dodatni w izolacji hodowli istotnych klinicznie.
W przypadkach ewidentnie fa³szywych wyników dodatnich, gdy wynik testu Affirm VPIII by³ dodatni, a wynik testu porównawczego
ujemny, zastosowano alternatywne metody weryfikacji wyniku testu Affirm VPIII. Zweryfikowana czu³oœæ/specyficznoœæ testu
Affirm VPIII w porównaniu z badaniami klinicznie istotnych hodowli i badaniem morfologicznym metod¹ Grama u pacjentek z
klinicznym obrazem WB potwierdzonym 3 z 4 kryteriów Amstel (n=129) wynosi³a odpowiednio 98%/100% i 95%/100%.
Zweryfikowana czu³oœæ/swoistoœæ testu Affirm VPIII w porównaniu z badaniem istotnych klinicznie hodowli i barwieniem metod¹
Grama u wszystkich pacjentek (n=299) wynosi³a odpowiednio 89%/99% i 84%/100%. W badaniach wszystkich kobiet test Affirm
VPIII wykazywa³ czu³oœæ i swoistoœæ w porównaniu z identyfikacj¹ G. vaginalis przez badanie morfologiczne metod¹ Gramma lub
badanie hodowli istotnych klinicznie. Zobacz Tabela 1.
Niezweryfikowana czu³oœæ/specyficznoœæ testu Affirm VPIII w porównaniu z badaniami klinicznie istotnych hodowli i badaniem metod¹
Grama u pacjentek z klinicznym obrazem WB potwierdzonym 3 z 4 kryteriów Amstel (n=129) wynosi³a odpowiednio 98%/41% i
95%/83%. Niezweryfikowana czu³oœæ/swoistoœæ testu Affirm VPIII w porównaniu z badaniem istotnych klinicznie hodowli i barwieniem
metod¹ Grama u wszystkich pacjentek (n=299) wynosi³a odpowiednio 88%/82% i 84%/96%. Zobacz Tabela 1.
Trichomonas vaginalis
Czu³oœæ/swoistoœæ testu Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ T. vaginalis ustalono w grupie 852 pacjentek na
podstawie porównania z tradycyjnymi metodami mikroskopowymi i opartymi na izolacji hodowli. Spoœród przebadanych 852
pacjentek u 11% (98) uzyskano wynik dodatni w badaniu œwie¿ego preparatu, a u 13% (111) uzyskano wynik dodatni w oparciu o
istotn¹ klinicznie hodowlê.
W przypadkach ewidentnie fa³szywych wyników dodatnich, gdy wynik testu Affirm VPIII by³ dodatni, a wynik testu porównawczego
ujemny, zastosowano alternatywne metody weryfikacji wyniku testu Affirm VPIII. Zweryfikowana czu³oœæ/swoistoœæ testu Affirm VPIII
Microbial Identification Test na obecnoœæ T. vaginalis w porównaniu z badaniem œwie¿ego preparatu i klinicznie istotnej hodowli wynosi³a
odpowiednio 93%/99,9% i 90%/99,9%. W tym badaniu klinicznym test Affirm VPIII Microbial Identification Test charakteryzowa³ siê
czu³oœci¹ porównywaln¹ z 5-7 dniow¹ wyizolowan¹ hodowl¹ T. vaginalis. Zobacz Tabela 1.
Niezweryfikowana czu³oœæ/swoistoœæ testu Affirm VPIII w porównaniu z badaniem œwie¿ego preparatu i istotnych klinicznie hodowli
(5-7 dni) u wszystkich pacjentek wynosi³a odpowiednio 92%/98% i 89%/99%. Zobacz Tabela 1.
Zaka¿enia mieszane i waginoza bakteryjna
Dane dla podzbioru 289 pacjentek w tym badaniu klinicznym zebrano na podstawie rozpoznañ waginozy bakteryjnej, kandydozy
i rzêsistkowicy dokonanych przez lekarzy prowadz¹cych na podstawie badania up³awów, pH, próby woni i badania œwie¿ych
preparatów. Zdolnoœæ lekarzy prowadz¹cych do rozpoznania WB na podstawie 3 z 4 objawów przedmiotowych i subiektywnych u
wszystkich badanych pacjentek wynios³a 75% (89/118). W przypadku kobiet, u których WB by³a jedyn¹ przyczyn¹ objawów
subiektywnych, zdolnoœæ rozpoznawania WB przez lekarzy wynosi³a 82% (79/96). Jednak u pacjentek z zaka¿eniami mieszanymi,
u których WB towarzyszy³a kandydoza lub rzêsistkowica, czu³oœæ rozpoznania przez lekarzy prowadz¹cych wynosi³a 45% (10/22).
Lekarze prowadz¹cy mieli wiêksze trudnoœci z rozpoznaniem WB w zaka¿eniach mieszanych, gdzie czu³oœæ pierwszego rozpoznania
wynosi³a 45% wobec 82% w przypadku zaka¿eñ pojedynczych. U pacjentek z zaka¿eniami mieszanymi w wielu przypadkach
b³êdnie nie rozpoznawano WB.
6
Wyniki badania próbek pochodzenia nieklinicznego
Zbadano swoistoœæ testu Affirm VPIII Microbial Identification Test na 88 izolatach reprezentuj¹cych 34 ró¿ne rodzaje
drobnoustrojów zidentyfikowane przez Isenberga i in.22 jako klinicznie istotne w schorzeniach dróg moczowo-p³ciowych.
Acinetobacter sp. (1)
Actinomyces sp. (1)
Bacteroides spp. (4)
Branhamella sp. (1)
Bifidobacterium sp. (1)
Campylobacter sp. (1)
Candida spp. (16)
Chlamydia trachomatis (2)
Clostridium spp. (2)
Corynebacterium spp.(1)
Cryptococcus neoformans (1)
Entamoeba sp. (1)
Enterobacteriaceae (5)
Enterococcus sp. (1)
Fusobacterium sp. (1)
Gardnerella vaginalis (10)
Haemophilus ducreyi (1)
Lactobacillus spp. (3)
Listeria monocytogenes (1)
Mobiluncus spp. (3)
Mycobacterium sp. (1)
Mycoplasma hominis (1)
Neisseria spp. (2)
Neisseria gonorrhoeae (1)
Peptococcus sp. (1)
Peptostreptococcus spp. (3)
Prevotella spp.(2)
Porphyromonas sp. (1)
Propionibacterium sp. (1)
Pseudomonas sp. (1)
Staphylococcus spp. (3)
Streptococcus spp. (3)
Trichomonas vaginalis (9)
Ureaplasma urealyticum (1)
Veillonella sp.(1)
Wszystkie drobnoustroje, z wyj¹tkiem Cryptococcus neoformans i gatunków Candida, dawa³y wynik ujemny w teœcie Affirm VPIII
Microbial Identification Test na obecnoœæ gatunków Candida przy stê¿eniu 108 drobnoustrojów/mL.
Wszystkie drobnoustroje, z wyj¹tkiem M. mulieris, B. dentium i G. vaginalis dawa³y wynik ujemny w teœcie Affirm VPIII Microbial
Identification Test na obecnoœæ G. vaginalis przy stê¿eniu 108 drobnoustrojów/mL. M. mulieris dawa³y wynik ujemny przy stê¿eniu
4 x 106 bakterii/mL, a B. dentium dawa³y wynik ujemny przy stê¿eniu 8 x 105 bakterii/mL. Bakterie B. dentium s¹ tylko sporadycznie
izolowane z pochwy.23 Wiêkszoœæ Bifidobacterium sp. i szczepów B. dentium izoluje siê z okolic anatomicznych innych ni¿ pochwa
i drogi moczowo-p³ciowe.
Wszystkie drobnoustroje z wyj¹tkiem T. vaginalis dawa³y wynik ujemny w teœcie Affirm VPIII Microbial Identification Test na
obecnoœæ T. vaginalis przy stê¿eniu 108 drobnoustrojów/mL.
Czu³oœæ analityczna
Test Affirm VPIII Microbial Identification Test na obecnoœæ gatunków Candida umo¿liwia wykrycie 1 x 104 CFU Candida w fazie
logarytmicznej w jednej analizie, 2 x 105 CFU G. vaginalis w fazie logarytmicznej w jednej analizie oraz 5 x 103 rzêsistków
w jednej analizie.
Substancje zak³ócaj¹ce
W badaniach klinicznych nie stwierdzono oznak interferencji z dopochwowymi œrodkami poœlizgowymi, œrodkami higieny, krwi¹
miesi¹czkow¹, ani œrodkami plemnikobójczymi.
W badaniach analitycznych nie stwierdzono oznak interferencji z dopochwowymi œrodkami poœlizgowymi.
PowtarzalnoϾ
System Affirm System by³ testowany pod k¹tem powtarzalnoœci w ramach jednej serii i miêdzy seriami w trzech typowych
placówkach klinicznych przez trzy ró¿ne osoby niemaj¹ce z nim wczeœniej stycznoœci (pielêgniarki pracuj¹ce w zawodzie). W ka¿dym
oœrodku badano 24 zakodowane próbki (12 dodatnich i 12 ujemnych). W ka¿dym oœrodku wykonano cztery serie testów
obejmuj¹ce po szeœæ próbek. We wszystkich trzech oœrodkach uzyskano pe³n¹ zgodnoœæ wyników poszczególnych próbek,
wykazuj¹c tym samym ³atwoœæ u¿ycia i powtarzalnoœæ wyników systemu Affirm w ramach serii, miêdzy seriami i w ró¿nych
oœrodkach.
DOSTÊPNOŒÆ
Nr kat.
446252
446257
446251
446250
446255
250100
211918
Opis
Affirm VPIII Microbial Identification Test, 24 testy
Affirm VPIII Microbial Identification Test, 120 testy
Affirm VPIII Bulk Sample Collection Swabs, 100 wymazówek
Affirm VPIII Sample Collection Sets, 24 zestawy
Affirm VPIII Ambient Temperature Transport System (system transportowy, do 72 h), 100 systemów
BD MicroProbe Processor (120 V)
BD MicroProbe Processor, (220/240 V)
PIŒMIENNICTWO
1. Kent, HL. Am J. Obstet Gynecol; 165 (4 Pt 2):p1168-76;Oct 1991.
2. Vulvovaginitis. 1989. ACOG Technical Bulletin. American College of Obstetricians and Gynecologists
3. Sobel, JD. Med Clin North Am; 74 (6) p1573-602; Nov 1990.
4. Gravett MG, HP Nelson, T DeRouen, et al. 1986. J Am Med Assoc 256:1899-1903.
5. Faro S. 1991. J Reprod Med 34:602-604.
6. Gravett MG, D Hummel, DA Eschenbach, et al. 1986. Obstet Gynecol 67:229-237.
7. McGregor JA, JI French, K Seo. 1991. Am J Obstet Gynecol 165:867-875.
8. McGregor JA, JI French, R Richter, et al. 1990. Am J Obst Gynecol 163:1465-1473
9. Hillier SL, NB Kiviat, C. Critchlow, et al. Abstract presented at IDSOG, Aug. 6-8, 1992. San Diego, pg. 12.
10. Spiegel, CA, R Amse, and KK Holmes. 1983. J Clin Micro 18:170-177.
11. Krieger JN. 1981. Invest Urog 18:411-417.
12. Rein MF. 1990. Trichomonas vaginalis. In: Principles and Practice of Infectious Diseases, 3rd ed. Mandell GL, RG Douglas, Jr, and
JE Bennett (eds). New York: Churchill Livingstone Inc., p.2115-2118.
13. Martius J, MA Krohn, SL Hillier, et al. 1988 Obstet Gynecol 71:89-95
14. Nugent, RP, MA Krohn and SL Hillier. 1991. J Clin Microbiol. 29:297-301.
15. Morton K, L Regan, S Sprige, and E Houang. 1990. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 37:231-236
16. Soper DE, RC Bump, and WG Hurt. 1990. Am J Obstet Gynecol 163:1016-23
7
17. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from
occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa.
18. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services,
Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol.
17:53-80.
19. U.S. Department of Health and Human Services. 2007. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication
(CDC), 5th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C.
20. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from
risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of
Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045.
21. Data is on file at Becton, Dickinson and Company.
22. Isenberg, Henry D, and Richard F D’Amato. 1991. Manual of Clinical Microbiology, 5th ed, Ballows, Hausler, Herrman, Isenberg,
Shadomy (ed), ASM, Washington, DC, p.8.
23. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology, Vol. 2. PHA Sneath, NS Mair, ME Sharpe, JG Holt (eds), Baltimore, Williams and
Wilkens. 1989. p. 1427.
8
9
Czu³oœæ
82,3%
79/96
95,2%
118/124
98,3%
118/120
Hodowla
Barwienie m. Grama
Hodowla
Candida sp.
G. vaginalis
Czu³oœæ
80,6%
100/124
83,8%
171/204
89,0%
170/191
92,8%
103/111
89,6%
103/115
Hodowla
Barwienie m. Grama
Hodowla
Œwie¿y preparat
Hodowla 5-7
7 dni
Candida sp.
G. vaginalis
79,3%
95,1%
117/123
98,1%
105/107
Hodowla
Barwienie m. Grama
Hodowla
Candida sp.
G. vaginalis
83,5%
167/200
87,5%
147/168
91,8%
90/98
89,2%
99/111
Barwienie m. Grama
Hodowla
Œwie¿y preparat
Hodowla 5-7
7 dni
99,3%
736/741
98,1%
740/754
81,7%
107/131
96,0%
95/99
SwoistoϾ
95,9%
605/631
Affirm VPIII
40,9%
9/22
83,3%
5/6
95,0%
377/397
SwoistoϾ
Affirm VPIII
99,9%
736/737
99,9%
740/741
99,1%
107/108
100%
95/95
98,2%
605/616
SwoistoϾ
Affirm VPIII
100%
9/9
100%
5/5
98,4%
377/383
SwoistoϾ
Affirm VPIII
98,0%
835/852
97,4%
830/852
84,9%
254/299
87,6%
262/299
Dok³adnoœæ
93,2%
690/740
88,4%
114/129
94,6%
122/129
92,3%
442/479
Dok³adnoœæ
98,5%
839/852
98,9%
843/852
92.6%
277/299
89,0%
266/299
95,3%
705/740
Dok³adnoœæ
98,4%
127/129
95,3%
123/129
95,2%
456/479
Dok³adnoœæ
*Czu³oœæ = TP/(TP+FN); Swoistoœæ = TN/(TN+FP); Dok³adnoœæ (TP+TN)/(TP+FP+FN+TN)
T. vaginalis
G. vaginalis
Czu³oœæ
78,0%
85/109
Metoda ref.
Hodowla
Wszystkie pacjentki
DROBNOUSTROJE
Candida sp.
65/82
Czu³oœæ
DROBNOUSTROJE
Metoda ref.
NIEZWERYFIKOWANE
Pacjentki z objawami
T. vaginalis
DROBNOUSTROJE
Metoda ref.
Wszystkie pacjentki
DROBNOUSTROJE
Metoda ref.
TABELA 1
ZWERYFIKOWANE
Pacjentki z objawami
82,0%
91/111
—
—
—
—
—
—
Czu³oœæ
54,1%
59/109
—
—
—
—
67,1%
55/82
Czu³oœæ
99,1%
734/741
—
—
—
—
—
—
SwoistoϾ
91,8%
579/631
Œwie¿y preparat
—
—
—
—
88,9%
353/397
SwoistoϾ
99,6%
734/737
—
—
—
—
—
—
94,0%
579/616
SwoistoϾ
Œwie¿y preparat
—
—
—
—
92,2%
353/383
SwoistoϾ
Œwie¿y preparat
Œwie¿y preparat
82,6%
95/115
—
—
—
—
—
—
60%
74/124
Czu³oœæ
—
—
—
—
71,9%
69/96
Czu³oœæ
96,8%
825/852
—
—
—
—
—
—
Dok³adnoœæ
86,2%
638/740
—
—
—
—
85,2%
408/479
Dok³adnoœæ
97,3%
829/852
—
—
—
—
—
—
88,2%
653/740
Dok³adnoœæ
—
—
—
—
88,1%
422/479
Dok³adnoœæ
—
—
—
—
—
—
—
—
Czu³oœæ
41,7%
25/60
—
—
—
—
42,6%
23/54
Czu³oœæ
—
—
—
—
—
—
—
—
SwoistoϾ
98,6%
418/424
Barwienie m. Grama
—
—
—
—
98,5%
271/275
SwoistoϾ
—
—
—
—
—
—
—
—
99,3%
418/421
SwoistoϾ
Barwienie m. Grama
—
—
—
—
99,6%
271/272
SwoistoϾ
Barwienie m. Grama
Barwienie m. Grama
—
—
—
—
—
—
—
—
44,4%
28/63
Czu³oœæ
—
—
—
—
45,6%
26/57
Czu³oœæ
—
—
—
—
—
—
—
—
Dok³adnoœæ
91,5%
443/484
—
—
—
—
89,4%
294/329
Dok³adnoœæ
—
—
—
—
—
—
—
—
92,1%
446/484
Dok³adnoœæ
—
—
—
—
90,3%
297/329
Dok³adnoœæ
10
%
O Becton, Dickinson and Company
7 Loveton Circle
Sparks, Maryland 21152 USA
800-638-8663
www.bd.com/ds
$ BENEX Limited
Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate
Shannon, County Clare, Ireland
Tel: 353-61-47-29-20
Fax: 353-61-47-25-46
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection.
Proclin is a trademark of Rohm and Haas Co.
BD, BD Logo, MicroProbe and Affirm are trademarks of Becton, Dickinson and Company © 2009 BD.