Specsheet Template CE
Transkrypt
Specsheet Template CE
Monoclonal Mouse Anti-Human uPAR Klon R4 Nr kat. M7294 Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeznaczenie Przeciwciała Monoclonal Mouse-Anti Human uPAR, klon R4, są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii. Przeciwciała znakują białko uPAR (receptor urokinazowego aktywatora plazminogenu) i są użytecznym narzędziem oceny guzów inwazyjnych, w których ekspresja białka występuje w części komórek przewodowych w nowotworach gruczołów w przebiegu raka okrężnicy (1) oraz w podpopulacji makrofagów podścieliska naciekających guzy w przebiegu raka gruczołowego okrężnicy i sutka (1, 2). Wyniki panelu przeciwciał są pomocne w diagnostyce różnicowej. Interpretacja wyniku musi być przeprowadzona przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych. Synonimy antygenu CD87 (3). Streszczenie i informacje ogólne Białko uPAR, oznaczone także symbolem CD87 (3), to receptor powierzchniowy urokinazowego aktywatora plazminogenu (uPA). uPAR jest silnie glikozylowanym białkiem składającym się z 283 reszt aminokwasowych połączonym końcem C z błoną komórkową kotwicą glikozylofosfatydyloinozytolową (GPI) (4). Białka uPAR i uPA należą do systemu uPA, który obejmuje również 2 inhibitory endogenne: inhibitor aktywatora plazminogenu nr 1 (PAI-1) oraz inhibitor aktywatora plazminogenu nr 2 (PAI-2). uPA aktywuje plazminogen do plazminy, która z kolei katalizuje rozkład składników błon podstawnych i substancji międzykomórkowej (ECM). Wiązanie uPA do uPAR nasila aktywność uPA i powoduje powstanie wysoce efektywnego i wyspecjalizowanego systemu proteolitycznego na błonie komórkowej. Ekspresję uPAR wykazuje podpopulacja makrofagów i wewnątrznaczyniowych neutrofili, zaś ekspresja ta nasila się po aktywacji leukocytów (3). W przebiegu raków gruczołowych okrężnicy, ekspresję uPAR wykazują przede wszystkim makrofagi na styku guz-podścielisko oraz niektóre pączkujące komórki rakowe w gruczołach objętych nowotworem, zlokalizowane na czole nacieku (1). W rakach sutka ekspresję uPAR wykazują przede wszystkim makrofagi naciekające guz w bezpośrednim sąsiedztwie komórek rakowych ognisk nowotworu (2). Wysnuto wniosek, że system uPA uczestniczy w procesie inwazyjnym i przerzutowym raka (4, 5). W wielu ludzkich guzach złośliwych obserwuje się podwyższone poziomy uPA i uPAR, zaś wysokie poziomy tych białek mają związek z inwazyjnością nowotworu. Jednak poziomy białek uPA i uPAR w nowotworach tego samego typu różnią się znacznie u poszczególnych pacjentów (4, 5). Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Monoklonalne przeciwciała mysie dostarczane w postaci płynnej jako nadsącz hodowli komórkowej (zawierający płodową surowicę bydlęcą), dializowany wobec roztworu Tris/HCl o stężeniu 0,05 mol/L, pH 7,2 i azydku sodu o stężeniu 0,015 mol/L. Dostarczany odczynnik Klon: R4. Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie mysich IgG mg/L: patrz etykieta na fiolce. Immunogen Oczyszczone ludzkie białko uPAR uzyskane z linii komórkowej U937 stymulowanej PMA (6, 7). Swoistość W testach Western blot lizatu komórek U937 stymulowanych PMA przeciwciała znakują prążek 50–65 kDa odpowiadający masie białka uPAR oraz rozpoznają epitop nieuczestniczący w wiązaniu ligandów (7). Analiza SDS-PAGE immunoprecypitatów wytwarzanych w reakcji między uPAR znakowanym 125I i fragmentami (po trawieniu chymotrypsyną) uPAR znakowanymi 125I a przeciwciałem wykazuje, że przeciwciało strąca białko o masie ~60 kDa będące odpowiednikiem uPAR (7). W badaniach immunohistochemicznych na skrawkach tkankowych utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie przeciwciało nie wykazywało reaktywności krzyżowej z białkiem będącym odpowiednikiem uPAR u krów, psów, koni, myszy, szczurów i świń. Środki ostrożności 1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi. (114126-003) Dako Denmark A/S M7294/PL/JOG/16.05.06 str. 1/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu. Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Skrawki parafinowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Wymagane jest poddanie odparafinowanych skrawków tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek polegającej na odmaskowaniu HIER przy użyciu roztworu Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S1700 lub S1699. Przed zanurzeniem preparatów należy ogrzać roztwór do odmaskowania antygenu. HIER w łaźni wodnej: 40 minut w temp. 95–99 °C. Po obróbce cieplnej należy pozostawić naczynie z buforem i preparatami na 20 minut, aż ostygnie do temperatury pokojowej. Po zakończeniu procedury HIER delikatnie przepłukać skrawki roztworem buforu lub wodą dejonizowaną. W trakcie przygotowywania i procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003). Skrawki mrożakowe i rozmazy komórkowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków mrożakowych utrwalanych acetonem (2). Wykonanie odczynu oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Rozcieńczenie: Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-human uPAR, nr kat. M7294, mogą być używane w zakresie rozcieńczeń 1:25–1:50 na utrwalanych w formalinie, zatopionych w parafinie skrawkach tkankowych, przy 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej, w połączeniu z systemem wizualizacji Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse, nr kat. K4061. Zaleca się rozcieńczenie przeciwciał odczynnikiem Dako Antibody Diluent, nr kat. S0809. Możliwe jest również stosowanie przeciwciał w zakresie rozcieńczeń 1:900–1:1800 przy 15-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej, jeśli używany jest system wizualizacji Dako CSA II System/HRP Mouse, nr kat. K1497. W takim wypadku zaleca się rozcieńczenie przeciwciał w odczynniku Dako Antibody Diluent with Background-Reducing Components, nr kat. S3022. Podane informacje mają charakter wyłącznie orientacyjny. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Negative Control, Mouse IgG1, nr kat. X0931, rozcieńczony do tego samego stężenia mysich IgG, co przeciwciało pierwotne. O ile nie potwierdzono stabilności rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej w rzeczywistej procedurze wykonania odczynu, zaleca się rozcieńczenie tych odczynników bezpośrednio przed użyciem. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. Wizualizacja: Zaleca się stosowanie systemów Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse, nr kat. K4061, lub Dako CSA II System/HRP Mouse, nr kat. K1497. Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z systemem do wizualizacji. Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych w systemach zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer. Interpretacja odczynu Komórki znakowane przeciwciałami wykazują odczyn błonowy. W niektórych komórkach obserwuje się odczyn błonowy i cytoplazmatyczny (1, 2). Charakterystyka wydajnościowa Tkanki prawidłowe: Przeciwciała znakują podpopulację makrofagów, eozynofili i neutrofili w tkance sutka oraz blaszce właściwej jelita (1, 2). Przeciwciała znakują także podpopulację makrofagów i neutrofili w tkance migdałków, nie znakują natomiast komórek mózgu, nabłonka sutka, wątroby ani trzustki. Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciała znakowały podpopulację skojarzonych z guzami makrofagów podścieliska na inwazyjnym czole złośliwego nabłonka w przebiegu raka okrężnicy (1) i sutka (2), jak również część komórek przewodowych w nowotworach gruczołów w przebiegu raka okrężnicy (1) i komórki rakowe w niektórych rakach sutka (2). Przeciwciała znakowały makrofagi podścieliska w 16/21 przypadków raka okrężnicy i 8/19 przypadków raka sutka. (114126-003) Dako Denmark A/S M7294/PL/JOG/16.05.06 str. 2/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Piśmiennictwo 1. Pyke C, Ralfkiær E, Rønne E, Høyer-Hansen G, Kirkeby L, Danø K. Immunohistochemical detection of the receptor for urokinase plasminogen activator in human colon cancer. Histopathology 1994;24:131-8. 2. Pyke C, Græm N, Ralfkiær E, Rønne E, Høyer-Hanse-n G, Brünner N, et al. Receptor for urokinase is present in tumor-associated macrophages in ductal breast carcinoma. Cancer Res 1993;53:1911-5. 3. Todd R, Magdolen V, Cines D, Kramer M, Mizukami I, Mazar A, et al. CD87 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc. 1997. p. 1016-20. 4. Andreasen PA, Egelund R, Petersen HH. The plasminogen activation system in tumor growth, invasion, and metastasis. Cell Mol Life Sci 2000;57:25-40. 5. Duffy MJ. The urokinase plasminogen activator system: Role in malignancy. Cur Pharm Des 2004;10:39-49. 6. Behrendt N, Rønne E, Ploug M, Petri T, Løber D, Nielsen LS, et al. The human receptor for urokinase plasminogen activator. J Biol Chem 1990;265:6453-60. 7. Rønne E, Behrendt N, Ellis V, Ploug M, Danø K, Høyer-Hansen G. Cell-induce potentiation of the plasminogen activation system is abolished by a monoclonal antibody that recognizes the NH 2-terminal domaine of the urokinase receptor. FEBS 1991;288:233-6. Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Numer serii Sprawdzić w instrukcji stosowania Zużyć przed (114126-003) Dako Denmark A/S Producent M7294/PL/JOG/16.05.06 str. 3/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17