Monoclonal Mouse Anti-Human Placental Alkaline

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Placental Alkaline Phosphatase
Klon 8A9
Nr kat. M7191
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human Placental Alkaline Phosphatase, Klon 8A9, jest przeznaczone do stosowania w
immunohistochemii. Przeciwciało znakuje komórki wykazujące ekspresję łożyskowej fosfatazy zasadowej
(PLAP) i PLAP-podobnej fosfatazy zasadowej, nazywanej również zarodkową AP (GCAP) (1). Przeciwciało jest
przydatne w identyfikacji nasieniaków (2) i drobnokomórkowych guzów wywołujących zwłóknienie podłoża (3).
Przeciwciała skierowane do PLAP/GCAP są przydatne szczególnie do identyfikacji guzów zarodkowych (4-6).
Identyfikacja różnicowa dokonywana jest w oparciu o wyniki uzyskane dla panelu przeciwciał. Interpretacja
kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem
odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z
uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Ludzkie fosfatazy zasadowe (APs, EC. 3.1.3.1) są kodowane przez grupę genów obejmujących cztery loci: trzy
geny tkankowo-specyficznej AP (TSAP) (to jest łożyskowa AP (PLAP), zarodkowa AP (GCAP) i jelitowa AP (IAP)),
które są zgrupowane w końcu długiego ramienia chromosomu 2, pasma q34-q37, podczas gdy pojedynczy gen
tkankowo niespecyficznej AP (TNAP) zlokalizowany jest w krótkim ramieniu chromosomu 1, pasma p36.1-p34.
Trzy izoenzymy TSAP są wysoce homologiczne wykazując 90-98% identyczności swoich sekwencji
aminokwasowych, podczas gdy TNAP jest tylko w 50-60% homologiczna z TSAP (1).
Streszczenie
i informacje ogólne
W prawidlowych tkankach PLAP wykazuje ekspresję w scyncytiotrofoblaście łożyska od około ósmego tygodnia
ciąży i jej stężenie rośnie wraz z rozwojem ciąży (1). Ponadto, PLAP wykazuje ekspresję w śluzówce kanału szyjki
macicy i w jajowodzie (6). GCAP wykazuje ekspresję w zawiązkowych komórkach zarodka podczas ich migracji
przez grzebienie płciowe, podobnie jak w śladowych ilościach podczas pierwszego etapu dojrzewania gamet w
prawidłowym jądrze, a także w grasicy. IAP fizjologicznie wykazuje ekspresję w błonie śluzowej jelit płodu I osób
dorosłych, najbardziej specyficzną w rąbku mikrokosmków komórek nabłonka. TNAP wykazuje ekspresję w
większości tkanek z uwzględnieniem wątroby, kości, nerek, płuc i łożyska od około dwunastego tygodnia ciąży (1).
W tkankach nowotworowych PLAP zaobserwowano w raku płuc, jajnika, macicy i bliższych tkankach żołądkowojelitowych, podczas gdy w guzach zarodkowych PLAP występuje rzadko (1, 6). W przeciwieństwie GCAP
występuje w większości guzów zarodkowych, szczególnie w raku in situ jądra (CIS) i w nasieniaku (1, 5, 6). IAP
wykryto w raku wątroby i raku nerki. Zwykle guzy wykazują ekspresję więcej niż jednego izoenzymu AP (1).
Odczynnik dostarczony
Monoklonalne mysie przeciwciało dostarczone w formie płynnej jako nadsącz hodowli komórkowej dializowanej
wobec 0.05 mol/L Tris/HCl, pH 7.2, zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: 8A9. Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiej IgG : Patrz etykietka na fiolce.
Immunogen
Oczyszczona fosfataza zasadowa ludzkiego łożyska.
Swoistość
Jak wykazano immunohistochemicznie przeciwciało znakuje nasieniaki i łożysko rozpoznając zarówno PLAP ,
jak i GCAP.
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Brak jest
widocznych oznak wskazujących na niestabilność niniejszego odczynnika. Dlatego kontrola pozytywna i
negatywna powinna być wykonywana równocześnie z próbkami pacjentów. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane
wyniki bez zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy
skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być zastosowane do znakowania tkanki utrwalonej w formalinie i
zatopionej w parafinie. Wymagane jest wstępne opracowanie tkanki z epitopami indukowanymi termicznie.
Optymalne rezultaty są uzyskiwane przy użyciu Dako Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S3308, lub 10
mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA, pH 9.0. Mniej optymalne rezultaty są uzyskiwane przy użyciu 10 mmol/L
buforu cytrynianowego, pH 6.0. Następujący roztwór Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S1700 lub wstępne
(112021-003)
Dako Denmark A/S
M7191/PL/JFC/21.09.06 s. 1/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
traktowanie tkanek proteinazą K okazało się nieefektywne. Skrawki tkankowe nie powinny wyschnąć podczas
wstępnego traktowania lub podczas następującej procedury barwienia. Jeżeli stabilność rozcieńczonego
przeciwciała i kontroli negatywnej nie została określona w aktualnej procedurze barwienia, zaleca się
rozcieńczanie tych odczynników bezpośrednio przed użyciem, lub rozcieńczanie w Dako Antibody Diluent, nr
kat. S0809. Kontrola pozytywna i negatywna powinny być wykonywane równocześnie z próbkami pacjentów.
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Monoclonal Mouse Anti-Human Placental Alkaline Phosphatase, nr kat. M7191, może być
rozcieńczane w zakresie od 1:25 do 1:50 jeżeli jest stosowane wobec skrawków ludzkiego łożyska utrwalonych
w formalinie i zatopionych w parafinie, po 20 minutach termicznej indukcji epitopów w Dako Target Retrieval
solution, High pH, nr kat. S3308 i 30 minutach inkubacji w temperaturze pokojowej z pierwotnym
przeciwciałem. Optymalne warunki reakcji, zmienne w zależności od rodzaju preparatu i sposobu jego
przygotowania, powinny być ustalone niezależnie dla każdego laboratorium. Zalecaną kontrolą negatywną jest
Dakon Mouse IgG1, nr kat. X0931, rozcieńczone do uzyskania takiego samego stężenia mysiej IgG jakie
wykazuje stosowane pierwotne przeciwciało.
Wizualizacja: Dako LSAB™+/HRP kit, nr kat. K0679 oraz Dako EnVision™+/HRP kits, nr kat. K4004 i K4006
są zalecane. Postępowanie zgodne z opisem procedury załączonym do wybranego zestawu wizualizacyjnergo.
Automatyzacja: Przeciwciało jest przystosowane do barwienia immunocytochemicznego przy użyciu
automatów, takich jak Dako Autostainer.
Szczególne ograniczenia
Należy uwzględnić fakt, iż zaobserwowano wybarwianie się komórek mięśni prążkowanych i mięśni gładkich w reakcji z
niniejszym przeciwciałem
Charakterystyka wyników
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują wzór odczynu cytoplazmatycznego i błonowego.
Prawidłowe tkanki: Przeciwciało znakuje komórki syncytiotrofoblastu łożyska w trzecim trymestrze ciąży oraz
gamety w jądrach.
Patologiczne tkanki: Przeciwciało znakuje 19/22 nasieniaków, 2/14 guzów woreczka żółtkowego oraz 7/24
nowotworów zarodkowych (2), jak i 17/21 drobnokomórkowych guzów wywołujących zwłóknienie podłoża (3).
Literatura
1. Millán JL, Fishman WH. Biology of human alkaline phosphatases with special reference to cancer. Crit Rev
Clin Lab Sci 1995;32:1-39.
2. Eyzaguirre E, Gatalica Z. Loss of fhit expression in testicular germ cell tumors and intratubular germ cell
neoplasia. Mod Pathol 2002;15:1068-72.
3. Zhang PJ, Golfblum JR, Pawel BR, Fischer C, Pasha TL, Barr FG. Immunophenotype of desmoplastic
small round cell tumors as detected in cases with EWS-WT1 gene fusion product. Mod Pathol
2003;16:229-35.
4. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London:
Oxford University Press; 1999. p. 277-8.
5. Dieckmann K-P, Skakkebaek NE. Carcinoma in situ of the testis: review of biological and clinical features.
Int J Cancer 1999;83:815-22.
6. Hamilton-Dutoit SJ, Lou H, Pallesen G. The expression of placental alkaline phosphatase (PLAP) and
PLAP-like enzymes in normal and neoplastic human tissues. APMIS 1990;98:797-811.
Objaśnienia symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
(112021-003)
Dako Denmark A/S
Producent
M7191/PL/JFC/21.09.06 s. 2/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17