Monoclonal Mouse

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Neurofilament Protein
Klon 2F11
Nr kat. M 0762
Wydanie 20.12.02
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human Neurofilament Protein, klon 2F11, jest przeznaczone do użycia w metodach
immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje neurony (aksony) centralnego i obwodowego systemu
nerwowego (1, 2), oraz jest użytecznym narzędziem w identyfikacji guzów różnicujących się z tkanki nerwowej
(1, 3). Przeciwciało może być także używane w diagnostyce różnicowej pomiędzy chorobą Hirschsprung´s a
wrodzonymi zmianami zanikowymi podobnymi do choroby Hinschprunga (2). Diagnostyka różnicowa powinna
być oparta o panel badań immunocytochemicznych – zwłaszcza z użyciem przeciwciał przeciwko innym
rodzajom filamentów pośrednich. Interpretacja musi być wykonana w odniesieniu do historii choroby i innych
testów diagnostycznych przez wykwalifikowanego patologa.
Wstęp
Neurofilamenty (NFs)należą do rodziny filamentów pośrednich (IFs) i są strukturalnymi elementami
cytoszkieletu komórek nerwowych łączącymi się z mikrofilamentami aktynowymi, mikrotubulami oraz innymi
IFs. NFs są zbudowane z trzech różnych podjednostek które są różnymi ale odpowiadającymi sobie białkami
NF-L (70 kDa), NF-M (150-160 kDa) i NF-H (200 kDa). Determinanta antygenowa każdej z podjednostek może
być silnie charakterystyczna i każda z podjednostek NF jest produktem oddzielnego genu. W czasie
neurogenezy embrionalnej występuje koekspresja podjednostek NF-L i NF-M podczas gdy aktywacja
podjednostki NF-H jest zahamowana do okresu postnatalnego. Podjednostki NF-M i NF-H nie tworzą wiązań
pomiędzy sobą i zazwyczaj tworzą kopolimery z podjednostką NF-L (4, 5).
Odczynnik dostarczony
Monoklonalne mysie przeciwciało dostarczane jest w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
oczyszczony przez dializę z 0.05 mol/L buforem Tris/HCL, pH 7.2, i zawiera 15 mmol/L NaN 3.
Klon: 2F11 (6). Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiego IgG : patrz etykieta na fiolce.
Immunogen
Neurofilament wyizolowany z normalnych, dojrzałych komórek ludzkiego mózgu (6).
Swoistość
W immunoblottingu, przeciwciało reaguje z podjednostką o masie cząsteczkowej 70 kDa (6).
W immunocytochemii, przeciwciało specyficznie znakuje komórki nerwowe (6).
Jak wykazano metodami immunocytochemicznymi przeciwciało wykazuje reakcje krzyżowe z białkami
odpowiadającymi neurofilamentom w tkankach oposa (7) kota, bydła domowego, psa, konia, myszy, królika,
szczura oraz świni.
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu obecnym
w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z elementami
kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silne wybuchowe pochodne lub azydki tych metali. Przy
usuwaniu odpadów przepłukać dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8 C. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Nie ma
wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi
powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez zmiany procedur
laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała należy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe : może być użyte do znakowania tkanki utrwalonej w formalinie, zatopionej w parafinie.
Przed procedurą znakowania niezbędne jest wysokotemperaturowe odzyskiwanie determinanty antygenowej w
tkance. Najlepsze rezultaty otrzymuje się po zastosowaniu Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, Dako
Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308, 10 mmol/L buforu cytrynowego, pH 6.0, lub 10 mmol/L buforu
Tris , 1 mmol/L EDTA, pH 9.0. Okazało się, że zastosowanie metody trawienia tkanek proteinazą K jest
nieefektywne. Nie należy dopuszczać do wysuszenia tkanki w czasie całej procedury barwienia
immunocytochemicznego.
Skrawki mrożone i rozmazy komórkowe : Przeciwciało może być używane do znakowania skrawków mrożonych
(3,7).
(108488-002)
M 0762/PL/HEW/20.12.02 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
-2Procedura barwienia
Rozcieńczenie: Monoclonal Mouse Anti-Human Neurofilament Protein, nr kat. M 0762, może być używane w
rozcieńczeniu 1:50-1:100 na skrawkach ludzkiej okrężnicy utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie,
po zastosowaniu wysokotemperaturowego odzyskiwania determinanty antygenowej z użyciem Dako Target
Retrieval solution, nr kat. S 1700, w czasie 20 minutowego ogrzewania oraz 30 minutowej inkubacji w
temperaturze pokojowej z pierwszym przeciwciałem. Optymalne warunki są zależne od rodzaju tkanki oraz
zastosowanych metod preparatyki i dlatego też niezbędne jest ich indywidualne określenie dla każdego
laboratorium. Zaleca się stosowanie jako kontroli negatywnej Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931,
rozcieńczonego do takiego samego stężenia jak pierwsze przeciwciało. Jeżeli nie udowodniono trwałości
przeciwciała i kontroli negatywnej w danej metodzie zaleca się ich rozcieńczenie tuż przed użyciem, lub
zastosowanie do rozcieńczenia Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Kontrole pozytywną i negatywną należy
wykonywać równolegle z barwieniem materiału tkankowego pobranego od pacjenta.
System detekcji: Zaleca się stosowanie zestawów DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679, lub DAKO
EnVision™+/HRP, nr-y kat. K 4004 i K 4006. Dla skrawków przygotowanych z tkanek mrożonych zaleca się
zestaw Dako APAAP kit, nr kat. K 0670, będący dobrą alternatywą jeżeli występuje endogenna peroksydaza.
Procedurę barwienia należy przeprowadzić zgodnie z przepisem dołączonym do zestawu wizualizacji.
Automatyzacja barwienia: Przeciwciało jest dobrze dostosowane do używania w automatach do barwienia
takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka wyników
W komórkach znakowanych przez to przeciwciało obserwuje się zabarwienie w cytoplazmie.
Tkanka zdrowa:: W zdrowej okrężnicy przeciwciało znakuje niektóre aksony w pęczkach aksonów splotów
Auerbach i Meissner (2, 6), podczas gdy ciałka komórkowe zwojów nerwowych nie ulegają immunobarwieniu.
Tkanka patologiczna: W przypadkach choroby Hirschsprung´s przeciwciało silnie znakuje aksony w splotach
Auerbach i Meissner we fragmentach jelita bez zwojów nerwowych (2, 6). W glejakach zwojokomórkowych,
przeciwciało znakuje wypustki neuronów w 10 z 13 guzów, podczas gdy jedynie w 5 z tych przypadków
obserwowano znaczące zabarwienie ciałka komórkowego neuronów (1). W badaniach immunocytochemicznych
filamentów pośrednich w komórkach guzów Merkela, 2 z 2 skrawków mrożonych były pozytywne w potencjalnych
komórkach guza i wykazywały rozmyte siateczkowe i ogniskowo ziarniste zabarwienie. W skrawkach utrwalanych
w formalinie i zatapianych w parafinie 2 z 8 były pozytywne (3). W skrawkach mrożonych z 94 guzów płuca w 22%
przypadków obserwowano koekspresję cytokeratyn i NF znakowanie było głównie ogniskowe lub niejednolite (8).).
Literatura
1. Diepholder HM, Schwechheimer K, Mohadjer M, Knoth R, Volk B. A clinicopathologic and immunomorphologic
study of 13 cases of ganglioglioma. Cancer 1991;68:2192-2201.
2. Luider TM, van Dommelen MW, Tibboel D, Meijers JH, Ten Kate FJ, Trojanowski JQ, et al. Differences in
phosphorylation state of neurofilament proteins in ganglionic and aganglionic bowel segments of children with
Hirschsprung’s disease. J Pediatr Surg 1992; 27: 815-9.
3. Van Muijen GNP, Ruiter DJ, Warnaar SO. Intermediate filaments in Merkel cell tumors. Hum Pathol
1985;16:590-5.
4. Schlaepfer WW. Neurofilaments: structure, metabolism and implications in disease. J Neuropathol Exp
Neurol 1987;46:117-29.
5. Herrmann H, Aebi U. Intermediate filaments and their associates: multi-talented structural elements
specifying cytoarchitecture and cytodynamics. Curr Opin Cell Biol 2000;12:79-90.
6. Klück P, van Muijen GNP, van der Kamp AWM, Tibboel D, van Hoorn WA, Warnaar SO, et al. Hirschsprung's
disease studied with monoclonal antineurofilament antibodies on tissue sections. Lancet 1984;i:652-4.
7. Breckenridge LJ, Sommer IU, Blackshaw SE. Developmentally regulated markers in the postnatal cervical
spinal cord of the opossum Monodelphis domestica. Dev Brain Res 1997;103:47-57.
8. Gatter KC, Dunnill MS, van Muijen GNP, Mason DY. Human lung tumours may coexpress different classes of
intermediate filaments. J Clin Pathol 1986;39:950-4.
Objaśnienia symboli
(108488-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 0762/PL/HEW/20.12.02 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17