Monoclonal Mouse Anti-Vimentin Klon V9 Nr kat. M 0725

Monoclonal Mouse
Anti-Vimentin
Klon V9
Nr kat. M 0725
Wydanie 18.12.02
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Vimentin, klon V9, jest przeznaczone do użytku w immunocytochemii. To przeciwciało
znakuje głównie komórki pochodzenia mezenchymalnego w prawidłowych i nowotworowo zmienionych
tkankach, i jest wartościowe w diagnostyce nowotworów. Identyfikacja różnicowa jest wspomagana wynikami z
panelu przeciwciał-szczególnie przeciwko innym rodzajom pośrednich włókien (1). Interpretacja wyników musi
być dokonana przez wykwalifikowanego patologa w kontekście wywiadu chorobowego pacjenta i innych badań
diagnostycznych.
Wprowadzenie
Wimentyna jest białkiem włókna pośredniego (IF) o masie 57 kDa, która jest częścią struktur podporowych
komórek kręgowców. Wśród pięciu klas IF, obejmujących dziewięć grup, wimentyna należy do klasy III,
wykazującej wysoki stopień swoistości do komórek pochodzenia mezenchymalnego. Jak początkowo myślano ten
typ swoistości komórkowej wykazywanej przez każdy z podtypów IF, był w komórkach nowotworowych jak również
w ich prawidłowych odpowiednikach co czyniło IF ważnym markerem diagnostycznym w histogenezie. Jak obecnie
dowiedziono, koekspresja pośrednich włókien, szczególnie wimentyny i cytokeratyny, w
różnorodnych
prawidłowych komórkach/tkankach i w zmianach nowotworowych, wymaga użycia panelu przeciwciał do różnicowej
diagnostyki nowotworów (2).
* Ostatnio została utworzona dodatkowa klasa (klasa VI) dla nestyny (2).
Dostarczony odczynnik
Monoklonalne mysie przeciwciało dostarczane w postaci ciekłej jako supernatant hodowli komórkowej
zdializowanej 0.05 mol/L Tris/HCl, pH 7.2, i zawierającej 15 mmol/L NaN3.
Klon: V9 (3). Isotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiego IgG: patrz etykieta na fiolce.
Immunogen
Oczyszczona wimentyna z soczewki świńskiego oka (3).
Swoistość
W metodzie Western blotting z użyciem oczyszczonej świńskiej wimentyny, przeciwciało znakuje pojedynczy
prążek o masie 57 kDa odpowiadający wimentynie. Kiedy stosuje się pełne wyciągi komórkowe z linii
komórkowych wyrażających wimentynę oraz kwaśne włókniste białko glejowe (GFAP) a także odpowiednio
wimentynę oraz desminę, to przeciwciało znakuje swoiście prążek wimentyny o masie 57 kD. Jak bezpośrednio
wykazano w tych doświadczeniach, przeciwciało nie reaguje z dwoma białkami IF najściślej powiązanymi z
wimentyną, tj. desminą oraz GFAP (3).
W immunocytochemii przeciwciało znakuje wimentyno-pozytywne ludzkie linie komórkowe IMR90, RD, glejaka i
HeLa (3).
Jak wykazano w immunocytochemii, przeciwciało reaguje krzyżowo z białkiem-równoważnikiem wimentyny
człowieka, krowy, psa, chomika, konia, rezusa i afrykańskiej zielonej małpy, królika, szczura i szczurzego
kangura. Wykazano brak reakcji krzyżowej z mysią wimentyną, a wyniki na próbkach kurczaka są sprzeczne (3,
4).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), odczynnik wysoce toksyczny w czystej postaci. W stężeniu obecnym
w produkcie, chociaż niesklasyfikowanym jako niebezpieczny, azydek sodu może reagować z elementami
kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe nagromadzenie azydków metali. Przy
usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydków metali w
kanalizacji.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury obchodzenia się
z nim.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8 C. Nie używać po upływie daty ważności podanej na fiolce. Jeżeli
odczynniki przechowywane były w innych warunkach niż wymagane, użytkownik musi sprawdzić ich stan. Nie
ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność tego produktu, dlatego pozytywne i negatywne kontrole
powinny być oznaczone równocześnie z próbkami pobranymi od pacjenta. Jeżeli zaobserwuje się
nieoczekiwane barwienie, którego nie można wyjaśnić odchyleniami w procedurach laboratoryjnych i
podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy skontaktować się z serwisem technicznym producenta.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być używane do znakowania wycinków tkanki utrwalonych w formalinie
i zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek przy pomocy metody odzyskiwania
epitopu wywołanego przez ogrzewanie. Optymalne wyniki są uzyskiwane przy pomocy Dako Target Retrieval
Solution, High pH, nr kat. S 3308 lub 10mmol/L buforu cytrynianoweg pH 6.0. Mniej optymalne wyniki uzyskuje
się przy pomocy 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA pH 9.0. Natomiast Dako Target Retrieval Solution, nr
kat. S 1700 i wstępne przygotowanie tkanek przy pomocy proteinazy K działają destrukcyjnie na epitop.
Wycinki tkanki nie mogą wyschnąć podczas przygotowania ani podczas następującej po nim procedurze
barwienia immunocytochemicznego.
(108418-002)
M 0725/PL/CE/18.12.02 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Zamrożone wycinki i preparaty komórkowe: Przeciwciało może być użyte do znakowania zamrożonych wycinków
lub utrwalonych rozmazów komórkowych (3).
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Monoclonal Mouse Anti-Vimentin, nr kat. M 0725, może być użyte w rozcieńczeniu 1:50-1:100
w przypadku badania utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie wycinków ludzkiego migdałka i przy
użyciu odzyskiwania determinanty antygenowej wywołanego ogrzewaniem przez 20 minut w Dako Target
Retrieval solution, High pH, nr kat. S 3308, i 30 minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej z pierwszym
przeciwciałem. Optymalne warunki mogą różnić się w zależności od badanego materiału, metody
przygotowania i powinny być ustalone przez każde laboratorium. Zaleca się jako kontrolę ujemną Dako Mouse
IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczone do takiego samego stężenia mysiego IgG jak pierwsze przeciwciało. Jeżeli
nie ustalono stabilności rozcieńczonego przeciwciała i kontroli negatywnej w aktualnej procedurze barwienia,
zaleca się rozcieńczyć te odczynniki tuż przed użyciem lub rozcieńczyć w Dako Antibody Diluent, nr kat. S
0809. Pozytywne i negatywne kontrole powinny być użyte równocześnie z próbkami badanymi.
Wizualizacja: Zalecane są zestawy DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679, i DAKO EnVision™+/HRP, nr kat. K
4004 i K 4006. Zestaw Dako APAAP nr kat. K 0670 jest dobrym zamiennikiem jeśli chodzi o barwienie
endogennej peroksydazy w zamrożonych wycinkach i preparatach komórkowych. Należy postępować zgodnie z
procedurą załączoną do wybranego zestawu uwidaczniania.
Automatyzacja: Przeciwciało nadaje się bardzo dobrze do barwienia immunocytochemicznego przy użyciu
automatycznych urządzeń barwiących takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka wyników
Komórki oznakowane przez przeciwciało wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia.
Tkanki prawidłowe: Ogólnie, większość komórek mezenchymalnych jest znakowana przez to przeciwciało,
wliczając w to fibroblasty, adypocyty, komórki mięśni gładkich, komórki nabłonka naczyń, astrocyty, komórki
nerwów obwodowych (Schwanna), makrofagi (włącznie z komórkami Kupfera), jak również mięśniowonabłonkowe komórki gruczołów potowych ślinowych oraz piersi, które są silnie znakowane. Również
pozytywne, ze zmienną intensywnością i rozmieszczeniem, są komórki pęcherzykowe tarczycy, kory
nadnerczy, kanalików nerkowych dalszych, mezangialne i śródbłonkowe komórki kłębków nerkowych, jak
również groniaste komórki trzustki (1, 3). W ludzkim oku, przeciwciało barwi tylne i przednie pigmentowane
nabłonki ludzkiej tęczówki, włączając w to przednie nabłonki części mięśniówki (rozwieracz źrenicy), jak
również pigmentowane i niepigmentowane nabłonki rzęskowe (5). W nabłonkach rzęskowych, wimentyna
wykazywała koekspresję z cytokeratyną (5). Komórki mięśni szkieletowych i sercowych, naskórkowe,
łuskowate, nabłonki dróg moczowych, śluzówka okrężnicy i żołądka, komórki glejowe, jak również neurony są
stale ujemne w reakcji z tym przeciwciałem (1, 3).
Tkanki nieprawidłowe Przeciwciało znakowało 17/20 przypadków mięsaka, 16/18 przypadków czerniaka, 4/4
przypadki oponiaka, 3/3 przypadki nerwiaka i barwienie było wyłącznym jednym włóknem pośrednim w tych
nowotworach. Dodatkowo, zmienny procent (10-57%) raków, raków neurowewnątrzwydzielniczych,
niedojrzałych nerwiaków, grasiczaków i międzybłoniaków był pozytywny z tym przeciwciałem. W tych
nowotworach, z wyjątkiem niedojrzałych nerwiaków, występowała koekspresja cytokeratyny i wimentyny. Wśród
gruczolakoraków, ponad 50% raków brodawkowych tarczycy jak również raków nerek, śluzówki macicy,
jajników i płuc było znakowane przez to przeciwciało i wykazywanło koekspresję keratyn i wimentyny (1).
Piśmiennictwo
1.
Azumi N, Battifora H. The distribution of vimentin and keratin in epithelial and nonepithelial neoplasms.
Am J Clin Pathol 1987;88:286-96.
2.
Herrmann H, Aebi U. Intermediate filaments and their associates: multi-talented structural elements
specifying cytoarchitecture and cytodynamics. Curr Opin Cell Biol 2000;12:79-90.
3.
Osborn M, Debus E, Weber K. Monoclonal antibodies specific for vimentin. Eur J Cell Biol 1984;34:13743.
4.
Bohn W, Wiegers W, Beuttenmüller M, Traub P. Species-specific recognition patterns of monoclonal
antibodies directed against vimentin. Exp Cell Res 1992;201:1-7.
5.
Kivelä T, Fuchs U, Tarkkanen A. Cytoskeleton in neuroectodermally derived epithelial and muscle cells of
the human iris and ciliary body. J Histochem Cytochem 1992;40:1517-26.
Objaśnienia symboli
(108418-002)
Numer katalogowy
Zakres temperatur
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Przed użyciem zapoznać się z
instrukcjami
Termin ważności
Producent
M 0725/PL/CE/18.12.02 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17