fosfataza alkaliczna - "Aqua

FOSFATAZA ALKALICZNA
ODCZYNNIKI
BIOLABO
(DEA)
Odczynnik do ilościowego oznaczania aktywności fosfatazy alkalicznej
[EC 3.1.3.1] w ludzkiej surowicy i osoczu
BIOLABO
PRUDUCENT:
WYŁĄCZNY DYSTRYBUTOR:
BIOLABO SA,
AQUA-MED ZPAM – KOLASA sp. j.
02160, Maizy, France
Wólczańska 212, 90-531 Łódź
NR KAT. 92214
R1 8 x 30 mL
AQUA-MED
Tel. : 0-42 636 38 02, 636 37 51
R2 8 x 30 mL
IVD DO DIAGNOSTYKI IN VITRO
Fax : 0-42 637 02 96
ZNACZENIE KLINICZNE (1)
TRWAŁOŚĆ I PRZECHOWYWANIE
Fosfataza alkaliczna (ALP) jest obecna w wielu tkankach – tkance
kostnej wątrobie, jelicie, nerce i łożysku. Pomiary surowiczej ALP są
szczególnym przedmiotem zainteresowania w dwóch grupach stanów
klinicznych: chorób wątroby / dróg żółciowych (zapalenie wątroby,
marskość, rak czy niedrożność dróg żółciowych zewnątrzwatrobowych)
oraz chorób kości związanych ze zwiększoną aktywnością osteoblastów
(krzywice dziecięce z niedoboru witaminy D, choroba Pageta,
nadczynność przytarczyc, rak z przerzutami do kości).
ALP oznaczana zwykłymi biochemicznymi metodami jest odbiciem
całkowitego surowiczego poziomu. Klinicysta musi dlatego polegać albo
na innych testach wątrobowych czy testach diagnostyki innych tkanek
albo na bardziej swoistym oznaczaniu poszczególnych izoenzymów
ALP.
Przechowywać w 2-8°C i chronić przed dostępem światła.
• Nie otwarte :
Odczynniki są trwałe do daty ważności na etykiecie.
• Po rozpuszczeniu :
Odczynnik roboczy jest trwały minimum przez 30 dni, jeśli jest wolny
od kontaminacji.
Odrzucić odczynnik, jeśli jest mętny lub jeśli absorbancja w 405 nm jest
> 0.800.
Nie używać odczynnika roboczego po upływie daty ważności na
opakowaniu zestawu.
Niezhemolizowana surowica lub heparynizowane osocze natychmiast
wstawione do lodówki.
ZASADA (1) (4) (5)
Optymalizowana metoda oparta na zaleceniach DGKC (Niemieckiego
Towarzystwa Chemii Klinicznej, 1972) i SCE (Skandynawskiego
Towarzystwa Chemii Klinicznej).
W środowisku alkalicznym fosfataza alkaliczna katalizuje hydrolizę 4nitrofenylofosforanu do 4-nitrofenolu i fosforanów.
Szybkość tworzenia 4-nitrofenolu proporcjonalna do aktywności ALP jest
mierzona w 405 nm.
SKŁAD ODCZYNNIKÓW
R1
BUFOR
Bufor : DEA (Dietanoloamina) pH 10 (25°C)
Chlorek magnezowy
Konserwant
R2
1 mol/L
0.5 mmol/L
Aktywność ALP jest trwała w próbce przez :
• 2-3 dni w 2-8°C.
• 1 miesiąc w –25°C.
INTERFERENCJE (3)
Unikać zhemolizowanej surowicy.
Nie interferują istotnie do 1000 mg/dl
Triglicerydy :
Nie interferuje istotnie do 1.6 g/dl
Hemoglobina :
Bilirubina całk. : Nie interferuje istotnie do 15 mg/dl
Obszerniejszy przegląd czynników mających wpływ na to oznaczenie
znajduje się w publikacji Young D.S.
NIEZBĘDNIE NIEDOSTARCZONE MATERIAŁY
1. Podstawowe wyposażenie medycznego laboratorium analitycznego.
2. Prawidłowe i patologiczne surowice kontrolne.
SUBSTRAT
4-nitrofenylofosforan
POBIERANIE I PRZYGOTOWANIE PRÓBKI (2)
10 mmol/L
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
Odczynniki BIOLABO są przeznaczone do profesjonalnego użytku w
diagnostyce in vitro.
• Używać odpowiedniej ochrony (fartuch, rękawiczki, okulary).
• Nie pipetować ustami.
• Zanieczyszczoną skórę czy zanieczyszczone oczy przemyć starannie dużą
ilością wody i zasięgnąć porady lekarza.
• Odczynniki zawierają azydek sodowy (stężenie < 0.1%), który może reagować z
miedzią lub ołowiem kanalizacji. Wylewając spłukać dużą ilością wody.
• Pozostałe informacje są zawarte w Karcie Charakterystyki Substancji
Niebezpiecznej.
• Odpady : Przestrzegać przepisów obowiązujących w kraju.
Wszystkie próbki powinny być traktowane jako potencjalnie zakaźne – w zgodzie z
zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej stosować odpowiednie środki ostrożności.
Przestrzegać przepisów obowiązujących w kraju.
PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKÓW
Dodać szybko zawartość butelki R2 (substrat) do butelki R1 (bufor).
Wymieszać starannie i przed użyciem odczynnika poczekać do
całkowitego rozpuszczenia (ok. 2 minut).
Butelka R2 : Używać nieostrego narzędzia do usunięcia aluminiowego
kapsla.
KALIBRACJA
Wyniki będą zależały od dokładności kalibracji aparatu, czasu pomiaru
przyrostu absorbancji, przestrzegania stosunku odczynnik/próbka i
kontroli temperatury.
Zaleca się używanie
teoretycznego współczynnika kalibracji
(§ OBLICZENIA) lub użycie wieloparametrowego kalibratora spójnego
pomiarowo z materiałem referencyjnym.
Wersja : AT 92214 11 07 2008
KONTROLA JAKOŚCI
PROCEDURA MANULANA
• BIOLABO EXATROL-N (wartości prawidłowe) NR KAT. R95010.
Pozwolić aby odczynnik i próbki osiągnęły temperaturę pokojową.
• BIOLABO EXATROL-P (wartości patologiczne) NR KAT. R95011.
• Inne surowice kontrolne odwołujące się do tej samej metody.
• Zewnętrzny program kontroli jakości.
Zaleca się kontrolowanie w następujących przypadkach :
• Minimum raz na serię.
• Minimum raz w ciągu 24 godzin.
• Przy zmianie butelki odczynnika.
• Po serwisowaniu aparatu.
Jeśli kontrola jest poza zakresem, podjąć następujące działania :
1. Powtórzyć test z tą samą kontrolą.
2. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, przygotować świeżą surowicę
kontrolną i powtórzyć test.
3. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, zweryfikować parametry
oznaczenia : długość fali, temperaturę, stosunek próbka/odczynnik,
czas pomiaru przyrostu absorbancji, współczynnik kalibracji.
4. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, użyć nową butelkę
odczynnika i powtórzyć oznaczenie.
5. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, skontaktować się z działem
technicznym BIOLABO lub lokalnym dystrybutorem.
WARTOŚCI OCZEKIWANE(2)
IU/L w 37°C
Odpipetować do termostatowanej kuwety o d=1 cm :
1 mL
Odczynnik
Doprowadzić do 37°C, następnie dodać :
10 µL
Próbkę
Wymieszać. Włączyć minutnik. Odczytać absorbancję początkową po1 minucie
w 405 nm.
Odczytywać absrbancje ponownie co minutę przez 3 minuty.
Obliczyć wzrost absorbancji na minutę (∆Abs/min).
Uwaga :
Procedury na automatyczne analizatory są dostępne na życzenie.
Skontaktować z działem technicznym BIOLABO.
OBLICZENIA
Obliczyć wynik następująco :
Z teoretycznym współczynnikiem :
IU/L = (∆Abs/min) x 5450
Mężczyźni
Kobiety
20 - 29 lat
30 - 39 lat
40 - 49 lat
50 - 59 lat
60 - 69 lat
100 - 320
90 - 320
100 - 360
110 - 390
120 - 450
70 - 260
70 - 260
80 - 290
110 - 380
90 - 430
> 69 lat
120 - 460
70 - 260
µkat/L =
IU/L
60
Z surowiczym multikalibratorem
Każde laboratorium powinno wyznaczyć swoje własne zakresy wartości
prawidłowych dla populacji, dla której świadczy usługi laboratoryjne.
Aktywność ALP =
(∆Abs/min) badanej
x Stężenie kalibratora
(∆Abs/min)
kalibratora
CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA
Wartości zostały wyznaczone przy stosunku próbka/odczynnik 15/1000 w 37°C.
Wewnątrz
serii
N = 33
Poziom
prawidłowy
Poziom
wysoki
Między
seriami
N = 33
Poziom Poziom
prawidłowy wysoki
Średnia IU/L
133
306
Średnia IU/L
147
762
SD IU/L
2.26
3.95
SD IU/L
2.52
11.42
CV %
1.7
1.29
CV %
1.71
1.5
Zakres wykrywalności :
ok. 30 IU/L
Czułość dla 10 IU/L : ∆Abs/min ok. 0.002 w 405 nm.
Porównanie z komercyjnie dostępnym odczynnikiem :
y = 0.9793 x – 3,1261
r = 0.9962
LINIOWOŚC
Oznaczenie jest liniowe do 1200 IU/L (20 µKat/L).
Jeśli ∆Abs/min > 0.225, rozcieńczyć próbkę roztworem soli i powtórzyć
oznaczenie biorąc pod uwagę przy obliczaniu wyniku współczynnik
rozcieńczenia.
Liniowość
będzie
zależała
od
stosunku
surowica/odczynnik.
PIŚMIENNICTWO
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R.
Ashwood, W.B. Saunders (1999) p. 676-678 and p.1429-1430.
Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 30-33.
YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995)
p.3-26 to 3-35
Scandinavian Journal of clinical and laboratory investigation (1974), vol.33,
p.291-306
Recommendations of the German Society for Clin. Chemistry Z .Klin. Chem.
Klin. Biochem. (1972), 10, p.290-291
Wyprodukowano we Francji
Wersja: AT 92214 11 07 2008