Monoclonal Mouse Anti-Human Synaptophysin Clone DAK

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Synaptophysin
Clone DAK-SYNAP
Nr kat. M7315
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Preparat przeciwciał Monoclonal Mouse Anti-Human Synaptophysin, Clone DAK-SYNAP jest przeznaczony do
stosowania w immunohistochemii. Przeciwciała przeciwko synaptofizynie mogą być przydatne podczas identyfikacji
nowotworów neuroendokrynnych układu nerwowego typu nabłonkowego (1-3), nowotworów układu nerwowego o
cechach komórek nerwowych (1, 4, 5), a takŜe podczas wykrywania nowotworów kory nadnerczy (6, 7). Interpretacja
kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem
odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem
historii klinicznej pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Główne białko pęcherzyków synaptycznych p38, białko p38.
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Synaptofizyna jest kwaśną, homooligomeryczną glikoproteiną wewnątrzbłonową (monomer = 38 kDa), otrzymaną
pierwotnie z mózgu szczura (8) i naleŜy do rodziny białek z czterema domenami przezbłonowymi, obejmującej
synaptogirynę i synaptoporynę (9). ChociaŜ jest to występujące najliczniej białko błonowe w pęcherzykach
synaptycznych, jego funkcja jest niejasna. W badaniach wykazano, Ŝe synaptofizyna odgrywa wiele róŜnych ról,
takich jak promowanie tworzenia silnie zakrzywionych błon komórkowych w pęcherzykach synaptycznych,
egzocytoza, tworzenie synapsy, biogeneza i endocytoza pęcherzyków synaptycznych, a takŜe udział w uczeniu się i
zapamiętywaniu poprzez regulację transportu synaptycznego w ścieŜkach neuronalnych (9).
Synaptofizyna występuje w pęcherzykach presynaptycznych wszystkich neuronów oraz odpowiednich pęcherzykach
w komórkach neuroendokrynnych (4). Poza komórkami neuroendokrynnymi obecność synaptofizyny jest równieŜ
stwierdzana w komórkach nabłonka kory nadnerczy, nieposiadających właściwości neuroendokrynnych (8).
Patrz dokument General Instructions for Immunohistochemical Staining (Ogólne instrukcje wykonywania odczynów
immunohistochemicznych) firmy Dako lub instrukcje z procedur do systemu detekcji IHC.
Odczynnik
dostarczony
Monoklonalne przeciwciała mysie dostarczane w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej (zawierający
płodową surowicę cielęcą), dializowany wobec roztworu Tris/HCl o stęŜeniu 0,05 mol/l i pH 7,2, zawierający azydek
sodu w stęŜeniu 0,015 mol/l.
Klon: DAK-SYNAP. Izotyp: IgG1, kappa.
StęŜenie mysiej immunoglobuliny IgG w mg/l: patrz informacja podana na etykiecie fiolki.
StęŜenie białek w róŜnych partiach moŜe się róŜnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. W celu zapewnienia
jednolitości odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy uŜyciu róŜnych partii produktu miano kaŜdej
partii jest porównywane i dostosowywane do partii referencyjnej.
Immunogen
Rekombinowany fragment białka odpowiadający C-końcowej domenie cytoplazmatycznej ludzkiej synaptofizyny.
Swoistość
W rozdziale techniką Western blot lizatu komórek ludzkiego nerwiaka przeciwciała znakują główny prąŜek o masie
40 kDa, odpowiadający oczekiwanej masie cząsteczkowej synaptofizyny.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Podczas usuwania resztek odczynnika naleŜy uŜywać duŜych ilości wody do spłukiwania, aby uniknąć
gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi.
Przechowywanie
(123132-001)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie u Ŝywać po upływie daty waŜności podanej na fiolce. Jeśli odczynniki są
przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek
pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku
odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z
przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
P02755PL_001_M7315/2013.03 str. 1/4
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Skrócona instrukcja
uŜytkownika*
Krok
Komentarze
Utrwalanie
Obróbka wstępna
Formalina
EnVision FLEX™, High pH (nr kat. K8004)
Rozcieńczenie
1:50
Inkubacja 20 min
Bufor do
rozcieńczania
Dako Antibody Diluent (nr kat. S0809)
Rozcieńczyć bezpośrednio przed
uŜyciem
Kontrola ujemna
Negative Control, Mouse IgG1 (nr kat. X0931)
Inkubacja 20 min
Wizualizacja
EnVision™ FLEX, High pH (nr kat. K8000/K8010)
Inkubacja 20 min, inkubacja w
odczynniku DAB+ 2 x 5 min
Barwnik
kontrastowy
Tkanka kontrolna
EnVision™ FLEX Hematoxylin (nr kat.
K8008/K8018)
OkręŜnica
Inkubacja 5 min
Szkiełka
FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020)
Zalecane w celu uzyskania lepszego
przylegania skrawków tkankowych do
szkiełek
Zatapianie
preparatu
Wymagane bezwodne, trwałe zatapianie
preparatów
Po przeprowadzeniu barwienia
skrawki muszą zostać odwodnione,
oczyszczone i zatopione w środku do
trwałego zatapiania.
Oprzyrządowanie
Autostainer Link 48 i Autostainer Plus
NaleŜy stosować fiolki dostosowane
do aparatu (nr kat. SK200-SK203 i
S3425)
20 min HIER, 3 w 1 z uŜyciem PT Link
i PT Link Rinse Station
Odczyn cytoplazmatyczny
*UŜytkownik jest zobowiązany przeczytać ulotki dostarczane do opakowań, które zawierają dokładne instrukcje przeprowadzania
procedury barwienia i postępowania z produktem.
Przygotowanie
próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie i
zatopionych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości około 4 µm.
Obróbka wstępna: Wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych obróbce wstępnej obejmującej cieplne odmaskowanie epitopu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się
po przeprowadzeniu w odniesieniu do tkanek reakcji HIER przy uŜyciu rozcieńczonego roztworu EnVision™ FLEX
Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8004). Odparafinowanie, ponowne nawodnienie i cieplne
odmaskowanie epitopu moŜna przeprowadzić z uŜyciem aparatu PT Link firmy Dako (nr kat. PT100/PT101).
Szczegółowe informacje zawiera instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link (PT Link User Guide). W przypadku
aparatów PT Link naleŜy stosować następujące parametry: temperatura ogrzewania wstępnego: 65°C; temperatura i
czas odmaskowania epitopu: 97°C przez 20 (±1) minut ; następnie schłodzić do temp. 65°C. Usun ąć statywy na
szkiełka ze zbiornika aparatu PT Link i natychmiast zanurzyć szkiełka w słoju/zbiorniku (np. PT Link Rinse Station
(nr kat. PT109)) wypełnionym rozcieńczonym buforem EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (nr kat. K8007) o
temperaturze pokojowej. Zostawić szkiełka w buforze Wash Buffer na 1–5 minut.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą zostać
odwodnione, oczyszczone i zatopione w środku do trwałego zatapiania.
Procedura barwienia
Rozcieńczenie: Zaleca się rozcieńczenie preparatu przeciwciał Monoclonal Mouse Anti-Human Synaptophysin,
Clone DAK-SYNAP (nr kat. M7315) w stosunku 1:50. Przeciwciało naleŜy rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako
Antibody Diluent (nr kat. S0809). Preparaty tkanek poddane obróbce wstępnej naleŜy inkubować przez 20 minut w
temperaturze pokojowej. Są to jednak wyłącznie wytyczne. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od
rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania i powinny być określane indywidualnie w kaŜdym laboratorium.
Kontrola ujemna: Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Negative Control, Mouse IgG1 (nr kat. X0931),
rozcieńczony do tego samego stęŜenia immunoglobuliny IgG co przeciwciało pierwotne. O ile nie potwierdzono
stabilności rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej w rzeczywistej procedurze wykonania odczynu, zaleca się
rozcieńczenie tych odczynników bezpośrednio przed uŜyciem. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym
od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne.
Wizualizacja: Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (nr kat. K8000/K8010) przy
stosowaniu trwającego 20 minut okresu inkubacji w temperaturze pokojowej. NaleŜy postępować zgodnie z
procedurą dostarczoną z wybranymi systemami do wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania barwienia immunohistochemicznego w systemach
zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer, Autostainer Plus oraz Autostainer Link, a takŜe PT Link do obróbki
wstępnej.
Barwienie kontrastowe: Zalecanym barwnikiem kontrastowym jest EnVision FLEX Hematoxylin (nr kat.
K8008/K8018). W celu uzyskania optymalnych wyników zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do
zatapiania.
Kontrole: Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne
próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować tkankę
pochodzącą z okręŜnicy, a komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w
części „Charakterystyka wydajnościowa”.
Interpretacja
wybarwienia
(123132-001)
Dako Denmark A/S
Przeciwciała dają odczyn cytoplazmatyczny.
P02755PL_001_M7315/2013.03 str. 2/4
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe: Aksony nerwów obwodowych błony mięśniowej oraz blaszki podstawnej w okręŜnicy wykazują
odczyn od umiarkowanego do silnego, natomiast komórki neuroendokrynne nabłonka powierzchniowego wykazują
odczyn od słabego do umiarkowanego. Od czasu do czasu moŜna zaobserwować znakowanie cytoplazmy komórek
kubkowych jelita grubego i cienkiego.
Podsumowanie reaktywności w tkankach prawidłowych (10).
Rodzaj tkanki
(liczba
badanych
przypadków)
Składniki
tkankowe
dodatni odczyn
Nadnercza (3)
Rodzaj tkanki
(liczba
badanych
przypadków)
Składniki
tkankowe
dodatni odczyn
3/3 Komórki nadnerczy (10–25%),
cytoplazmatyczny
Jajniki (3)
Szpik kostny (3)
0/3
Trzustka (3)
Gruczoły sutkowe
(3)
MóŜdŜek (2)
0/3
Przysadka
mózgowa (3)
ŁoŜysko (3)
1/3 Komórki zwojów nerwowych i
komórki podścieliska (10%),
cytoplazmatyczny
3/3 Komórki wysp trzustkowych i
komórki zwojów nerwowych (100%),
cytoplazmatyczny
2/3 Komórki przysadki mózgowej
(100%), cytoplazmatyczny
0/3
Gruczoł
(3)
1/3 Komórki podścieliska (50%),
cytoplazmatyczny
Mózgowie (3)
Szyjka macicy (3)
Jelito grube (3)
Endometrium (3)
Przełyk (3)
Jajowód (3)
Nerki (3)
Wątroba (3)
Płuca (3)
Węzły chłonne (3)
Mięsień
sercowy
(3)
Mięśnie
szkieletowe (3)
Nerwy obwodowe
(3)
dające
2/2 Komórki zwojów nerwowych i
komórki nerwowe (100%),
cytoplazmatyczny
3/3 Komórki zwojów nerwowych i
komórki nerwowe (100%),
cytoplazmatyczny
2/3 Komórki zwojów nerwowych (50%),
cytoplazmatyczny
3/3 Komórki zwojów nerwowych i
komórki neuroendokrynne (100%),
cytoplazmatyczny
0/3
3/3 Komórki zwojów nerwowych
(100%), cytoplazmatyczny
3/3 Fibroblasty (50%),
cytoplazmatyczny
0/3
0/3
krokowy
Ślinianki (3)
Skóra (3)
Jelito cienkie (3)
Rdzeń kręgowy (3)
Śledziona (3)
śołądek (3)
0/3
0/3
0/3
3/3 Fibroblasty (20%),
cytoplazmatyczny
0/3
Jądra (3)
Tarczyca (3)
Migdałki (3)
Macica (3)
3/3 Komórki zwojów nerwowych (10–
100%), cytoplazmatyczny
Pęcherz moczowy
(3)
Moczowód (3)
dające
3/3 Komórki nerwowe (100%),
cytoplazmatyczny
2/3 Komórki błony podstawnej (50%),
rozlany
3/3 Komórki neuroendokrynne (100%),
cytoplazmatyczny
3/3 Komórki zwojów nerwowych
(100%), cytoplazmatyczny
0/3
3/3 Komórki neuroendokrynne (100%),
cytoplazmatyczny
0/3
0/3
0/3
0/3
3/3 Komórki podścieliska (5–10%),
cytoplazmatyczny
0/3
Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakowało komórki raka drobnokomórkowego płuca (4/4), raka
wielkokomórkowego płuca (2/6), atypowego rakowiaka płuca (2/2), rakowiaka okręŜnicy (3/3), rakowiaka jelita
cienkiego (5/5), neoplazji neuroendokrynnej trzustki (1/1), nerwiaka zwojowego (1/1), raka rdzeniastego tarczycy
(3/3), raka gruczołowego płuca (2/3), niezróŜnicowanego raka gruczołowego płuca (1/2), raka gruczołowego
okręŜnicy (2/4), raka gruczołowego jelita cienkiego (1/4), raka gruczołowego trzustki (1/2) oraz raka brodawkowatego
tarczycy (0/3) (11).
Piśmiennictwo
1.
Gould VE, Wiedenmann B, Inchul L, Schwechheimer K, Dockhorn-Dvorniczak B, Radosevich B, et al.
Synaptophysin expression in neuroendocrine neoplasms as determined by immunocytochemistry. Am J Pathol
1987;126:243-57
2.
Takei H, Asamura H, Maeshima A, Suzuki K, Kondo H, Niki T, et al. Large cell neuroendocrine carcinoma of the
lung: a clinicopathologic study of eighty-seven cases. J Thorac Cardiovasc Surg 2002;124:285-92.
3.
Sorhaug S, Steinshamn S, Haaverstad R, Nordrum IS, Martinsen TC, Waldum HL. Expression of
neuroendocrine markers in non-small cell lung cancer. APMIS 2007;115:152-63.
4.
Wiedenmann, B, Franke WW, Kuhn C, Moll R, Gould VE. Synaptophysin: a marker protein for neuroendocrine
cells and neoplasms. Proc Natl Acad Sci U S A, 1986;83:3500-4.
5.
Park SJ, Park CJ, Kim S, Jang S, Chi HS, Kim MJ, et al. Detection of bone marrow metastases of
neuroblastoma with immunohistochemical staining of CD56, chromogranin A, and synaptophysin. Appl
Immunohistochem Mol Morphol 2010;18:348-52.
6.
Li Q, Johansson H, Kjellmann M, Grimelius L. Neuroendocrine differentiation and nerves in human adrenal
cortex and cortical lesions. APMIS 1998;106:807-17.
7.
Komminoth P, Roth J, Schroder S, Saremaslani P, Heitz P. Overlapping expression of immunohistochemical
markers and synaptophysin mRNA in pheochromocytomas and adrenocortical carcinomas. Implications for the
differential diagnosis of adrenal gland tumors. Lab Invest 1995;72:424-31.
8.
Wiedenmann B, Franke WW. Identification and localization of synaptophysin, an integral membrane
glycoprotein of Mr 38,000 characteristic of presynaptic vesicles. Cell 1985;40:1017-28.
9.
Kwon SE, ,Chapman ER. Synaptophysin regulates the kinetics of synaptic vesicle endocytosis in central
neurons. Neuron 2011; 70:847-85.
10. Dako in-house documentation D13338
11. Dako in-house documentation D14505
(123132-001)
Dako Denmark A/S
P02755PL_001_M7315/2013.03 str. 3/4
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
ZuŜyć przed
(123132-001)
Dako Denmark A/S
Producent
P02755PL_001_M7315/2013.03 str. 4/4
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17