Karta pracy dla uczniów - BioCentrum Edukacji Naukowej

Barwniki fotosyntetyczne
Barwniki fotosyntetyczne
Cel doświadczenia: Identyfikacja barwników fotosyntetycznych liści
Sprzęt i odczynniki
•
•
•
•
•
•
•
•
1 mały, zakręcany słoiczek do odbarwiania liści
ok. 5 ml mieszaniny etanol-aceton do odbarwiania liści
3 zielone liście bazylii lub liście etiolowane
dostęp do łaźni wodnej o temperaturze 90-95oC
1 płytka do chromatografii cienkowarstwowej TLC
2 końcówki kapilarne do nakładania próbek
zakręcona komora chromatograficzna z mieszaniną benzyna-aceton 10:1
ekstrakt z barwników fotosyntetycznych jako wzorzec
Przed przystąpieniem do zadania postaw hipotezę badawczą:
Narysuj schematycznie wyniki eksperymentu i opisz swoje spostrzeżenia:
Określ czy wykonywany przez Ciebie wariant doświadczalny był kontrolą czy właściwą
próbą:
Porównaj kolor chlorofilu a i chlorofilu b oraz karotenoidów, jak myślisz z czym związane
są różnice w barwie poszczególnych związków?
Sprawdź w encyklopedii lub innych źródłach wzór strukturalny chlorofilu a, b oraz ß-karotenu. Wyjaśnij na podstawie budowy chemicznej tych związków różnice w rozdziale
chromatograficznym na złożu celulozowym.
Copyright © :
BioCentrum Edukacji Naukowej
Opis doświadczenia
1.
Rozdrobnij trzy liście bazylii i umieść na dnie słoiczka.
2.
Zalej minimalną objętością mieszaniny etanol-aceton tak, aby liście były lekko zakryte
(około 3-5 ml, objętość zależy od powierzchni dna słoika).
3.
Umieść słoik w gorącej łaźni wodnej. Słoik możesz lekko zakryć pokrywką. Mieszaj
zawartość słoika delikatnie nim kołysząc. Uważaj, aby woda nie dostała się do środka
słoika. UWAGA: Staraj się nie wdychać oparów ze słoika! Praca powinna być prowadzona
pod wyciągiem lub w dobrze wentylowanym pomieszczeniu.
4.
W ciągu około 5-10 minut liście powinny się odbarwić, a barwniki fotosyntetyczne
przejść do roztworu etanolu. Zlej zielony ekstrakt barwników do kubeczka i ostudź.
Rys. 1.
Rys. 2.
Rys. 3.
Rys. 4.
5.
Ekstrakt barwników nakładaj przy pomocy końcówki kapilarnej na
chropowatą stronę płytki chromatograficznej. Pierwszą kroplę nałóż
w odległości 1 cm od jej dolnej krawędzi.
Rys. 5.
6.
Po nałożeniu kropli odczekaj 5 sekund, dopóki kropla nie wyschnie,
po czym dokładnie w to samo miejsce nakładaj kolejną kroplę.
7.
Nakładaj kolejne objętości kapilary tak, aby tworzący się na płytce
ślad miał średnicę nie większą niż 5 mm. Nałóż przynajmniej 7
objętości kapilary. Naniesiony na płytkę materiał powinien mieć
intensywnie zielony kolor. Uważaj, aby nie pobrudzić i nie uszkodzić
chropowatego złoża, którym pokryta jest płytka, dotykaj palcami
tylko krawędzi płytki. Na płytkę możesz nałożyć dołączony do
zestawu wzorzec barwników jako kontrolę pozytywną.
8.
Pozostaw płytkę do dokładnego wyschnięcia na około 5 minut.
9.
Do stojącej na stole komory chromatograficznej wstaw pionowo
wysuszoną płytkę, zieloną kropką do dołu. Mieszanina chromatograficzna powinna sięgać poniżej poziomu naniesionych ekstraktów
barwników. Ostrożnie zamknij komorę i pozostaw na stole.
10. Prowadź chromatografię do momentu, gdy czoło rozpuszczalnika
znajdzie się 0,5 cm przed górną krawędzią płytki. Wyjmij płytkę i
wysusz. Pytki można przechowywać w ciemności przez kilka dni.
11. Rozdzielone barwniki możesz obejrzeć w świetle UV (np. z testera
do banknotów).
www.biocen.edu.pl