PAS Staining Kit

Materiały i odczynniki potrzebne, ale niedostarczane
PAS Staining Kit
1.
2.
3.
4.
860-014
05279291001
75
PRZEZNACZENIE
Zestaw PAS Staining Kit jest przeznaczony do wykonywania barwień histologicznych
o charakterze jakościowym w celu wykazania obecności glikogenu w tkankach
utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Zestaw PAS Staining Kit daje dodatni
wynik barwienia włókien retikulinowych, błony podstawnej, grzybów i obojętnych
mukopolisacharydów.1 Zestaw PAS Staining Kit można pomocniczo stosować do
odróżnienia gruczolakoraka wykazującego dodatni odczyn PAS od niezróżnicowanego
raka płaskonabłonkowego o ujemnym odczynie PAS.2
Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego histopatologa
w połączeniu z badaniem histopatologicznym, odnośnymi danymi klinicznymi i właściwymi
badaniami kontrolnymi.
Ten produkt jest przeznaczony do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
STRESZCZENIE I WYJAŚNIENIA
W zestawie PAS Staining Kit do utleniania glikoli do aldehydów stosowany jest odczynnik
Periodic Acid.3 Odczynnik Schiff’s Reagent tworzy bezbarwny związek dialdehydowy
ulegający przekształceniu do barwnika elementów komórek zawierających glikol.
Barwienie PAS w skrawkach tkanki i trawienie przy użyciu odczynnika Diastase
(860-004/05279208001) są pomocne w diagnozowaniu glikogenozy.1
ZASADA POSTĘPOWANIA
Ten zestaw jest zoptymalizowany pod kątem użycia w automatach do barwienia
preparatów BenchMark Special Stains oraz NexES Special Stains firmy VENTANA.
Odczynniki nanoszone są na tkankę umieszczoną na szkiełku mikroskopowym i mieszane
na całej powierzchni próbki. Reakcja barwna polega na utlenianiu glikolu do aldehydu, po
czym następuje selektywne barwienie grup aldehydowych przy użyciu odczynnika Schiff’s
Reagent.
MATERIAŁY I METODY
Dostarczane odczynniki
Fiolki z odczynnikami są dostarczane w uchwytach opatrzonych etykietami z kodem
kreskowym, przeznaczonych do umieszczenia w koszykach na odczynniki w aparacie do
barwienia. Każdy zestaw zawiera odczynniki wystarczające do wykonania 75 testów:
Jedna fiolka (22 ml) odczynnika Periodic Acid zawiera kwas nadjodowy o stężeniu
poniżej 1%.
Trzy fiolki (22 ml) odczynnika Schiff’s Reagent zawierają 4% wodorosiarczynu sodu,
2% rozcieńczonego kwasu solnego i 1% chlorku pararozaniliny.
Jedna fiolka (22 ml) odczynnika Neutralizer zawiera wodorosiarczyn sodu o stężeniu
poniżej 1%.
Jedna fiolka (22 ml) odczynnika Hematoxylin Counterstain zawiera modyfikowaną
hematoksylinę Mayera.
6 wkładek do fiolek ze słomkami do zasysania.
Odtwarzanie, mieszanie, rozcieńczanie, miareczkowanie
Nie jest wymagane odtwarzanie, mieszanie, rozcieńczanie ani miareczkowanie
odczynników z zestawu. Dalsze rozcieńczanie odczynników może skutkować
niedostateczną jakością barwienia. W razie zmian któregokolwiek z parametrów
konieczna jest walidacja przez użytkownika.
Odczynniki zawarte w tym zestawie rozcieńczono optymalnie do użytku z automatami do
barwienia preparatów BenchMark Special Stains i NexES Special Stains. Odczynniki te
mogą okazać się nieodpowiednie do barwienia ręcznego lub barwienia w innych
urządzeniach.
2017-01-18
FT0700-440j
1/3
Tkanka kontrolna
Szkiełka mikroskopowe (naładowane dodatnio)
Suszarka umożliwiająca utrzymanie temperatury 70°C ± 5°C
Automat do barwienia preparatów BenchMark Special Stains lub NexES Special
Stains
5.
Odczynniki w opakowaniach zbiorczych przeznaczone do użytku z automatem do
barwienia preparatów BenchMark Special Stains:
•
BenchMark Special Stains Deparaffinization Solution (10X),
•
BenchMark Special Stains Liquid Coverslip,
•
BenchMark Special Stains Wash Solution (10X).
6.
Odczynniki w opakowaniach zbiorczych przeznaczone do użytku z automatem do
barwienia preparatów NexES Special Stains:
•
Liquid Coverslip (Low Temperature),
•
Special Stains Wash (10X).
7.
Ksylen lub inny odczynnik do prześwietlania (klasy histologicznej)
8.
Alkohol do odczynników lub etanol (klasy histologicznej)
9.
Woda dejonizowana lub destylowana
10. Syntetyczny środek do zatapiania
11. Szkiełko nakrywkowe
Przechowywanie i sposób postępowania
Zestaw PAS Staining Kit należy przechowywać w temperaturze 2–8°C. Informacje
o prawidłowych warunkach przechowywania podano na etykiecie fiolki. Schłodzone
składniki zestawu należy przed użyciem doprowadzić do temperatury pokojowej. Za
każdym razem używać tylko jednej fiolki odczynnika Schiff’s Reagent.
Uwaga: Odczynnik Schiff’s Reagent pozostaje stabilny przez miesiąc po otwarciu. Firma
Ventana zaleca, aby na fiolce umieścić etykietę z datą pierwszego otwarcia. Szczelnie
zamknięty, nieotwarty odczynnik Schiff’s Reagent pozostaje stabilny do daty ważności
wydrukowanej na etykiecie fiolki. Zestaw zawiera dwie dodatkowe buteleczki
z odczynnikiem Schiff’s Reagent pozwalające na wykorzystanie zestawu w pełni.
Odczynnik Schiff’s Reagent może zawierać osad w postaci igiełek. Osad ten, obecny
w spodziewanych ilościach, nie powinien wpływać na działanie testu.
Prawidłowo przechowywane odczynniki pozostają stabilne do daty ważności
wydrukowanej na etykiecie fiolki. Nie istnieją widoczne objawy wskazujące na utratę
stabilności odczynników; dlatego równocześnie z badaniem właściwych próbek należy
wykonywać barwienia kontrolne. Słabe wybarwienie materiału kontroli dodatniej może
świadczyć o niestabilności odczynnika. W takim wypadku należy niezwłocznie
skontaktować się z lokalnym przedstawicielem pomocy technicznej.
Pobieranie próbek i przygotowanie ich do analizy
Firma Ventana zaleca, aby pobieranie i przechowywanie próbek odbywało się zgodnie
z dokumentem CLSI o symbolu M29-T2.4 Zalecanym utrwalaczem do tkanek jest 10%
roztwór obojętnej zbuforowanej formaliny.3
1.
Pociąć na skrawki, zwykle o grubości od 3 do 5 µm, i umieścić je na szkiełkach.
2.
Wysuszyć preparaty w automacie do barwienia preparatów BenchMark Special
Stains lub poza nim za pomocą innej metody.
•
W przypadku suszenia preparatów w automacie do barwienia preparatów
BenchMark Special Stains przejść do etapu 3.
•
Poza automatem szkiełka suszyć co najmniej 30 minut w temperaturze około
70ºC. Odczekać, aż ostygną.
3.
Wydrukować odpowiednie etykiety z kodami kreskowymi.
4.
Przed odparafinowaniem umieścić na matowym końcu każdego szkiełka
odpowiednie etykiety z kodem kreskowym (informacje nt. prawidłowego
umieszczania etykiet zawiera Instrukcja obsługi automatu do barwienia preparatów).
5.
Zalecany protokół barwienia za pomocą automatów do barwienia preparatów
BenchMark Special Stains oraz NexES Special Stains znajduje się w części
„Instrukcja stosowania”.
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
Wyłącznie do zastosowania profesjonalnego.
15114PL Rev G
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Informacje na temat zalecanej metody utylizacji należy uzyskać od odpowiednich
instytucji lokalnych lub krajowych.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały
niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych środków
ostrożności. Podczas pracy z próbkami i ich usuwania należy stosować
standardowe środki ostrożności w postępowaniu z materiałami potencjalnie
zakaźnymi.
Należy unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników. Skażenie takie może być
przyczyną błędnych wyników.
Odczynniki te mogą powodować podrażnienia. Unikać kontaktu z oczami i błonami
śluzowymi. Jeśli dojdzie do kontaktu odczynnika z tymi obszarami, należy obficie
przepłukać je wodą. Nie należy połykać ani wdychać żadnego z odczynników.
Odczynnik Schiff’s Reagent jest toksyczny, może powodować oparzenia i może
mieć działanie rakotwórcze.
Odczynnik Hematoxylin Counterstain jest szkodliwy dla zdrowia w przypadku
połknięcia oraz działa drażniąco na oczy.
Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie
charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zagrożeniach na
stronie www.ventana.com.
INSTRUKCJA STOSOWANIA
Przygotowanie fiolki z odczynnikiem
Przed pierwszym użyciem w fiolce z odczynnikiem należy umieścić wkładkę i słomkę do
zasysania.
1.
Zdjąć korek transportowy z fiolki i włożyć do fiolki wkładkę i słomkę. Wkładkę
i słomkę należy pozostawić w otwartej fiolce.
2.
Gdy dany odczynnik jest używany, należy włożyć miękką nakrywkę do
odpowiedniego otworu w uchwycie na odczynniki.
3.
Gdy odczynnik nie jest używany, należy przykryć fiolkę miękką nakrywką.
Procedura barwienia
Tabela 2. Zalecany protokół barwienia za pomocą zestawu PAS (procedura PAS Flex)
z użyciem automatu do barwienia preparatów NexES Special Stains.
Opcje
Temperatura
37°C lub 60°C
Odczynnik
Alcian Blue
Diastaza
Hematoksylina
Jasnozielony
Czas Schiff's dla 60°C
4 do 8 minut
Czas diastazy
4 do 32 minut
Intensywność barwienia
hematoksyliną
Jasne lub ciemne
Protokół wstępnego programowania
Protokoły dla temp. 37°C
Numer protokołu rozpoczyna się sekwencją 3XX
Protokoły dla temp. 60°C
Numer protokołu rozpoczyna się sekwencją
6XX i 7XX
Zalecana obróbka po wyjęciu z automatu
1.
2.
Dwukrotnie przepłukać szkiełka 95% alkoholem, aby usunąć roztwór szkiełka
nakrywkowego.
Odwodnić, oczyścić i zakryć środkiem do trwałego zatapiania.
PROCEDURY KONTROLI JAKOŚCI
W charakterze materiału kontroli dodatniej można użyć na przykład utrwalonej
w formalinie i zatopionej w parafinie tkanki ludzkiej znanej z wysokiej zawartości
glikogenu, na przykład tkanki nerki, jelita cienkiego, wątroby, skóry lub aorty.3 Tkanki
kontrolne powinny być próbkami świeżo pobranymi w ramach autopsji, biopsji lub zabiegu
chirurgicznego i przygotowanymi lub utrwalonymi jak najszybciej w sposób identyczny jak
3.
skrawki badane. Tkanki takie powinny być równolegle poddawane wszystkim etapom
Zalecany protokół barwienia
analizy, od przygotowania do barwienia.
Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane W przypadku użycia dołączonego zestawu PAS Staining Kit, glikogen ma odczyn
zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi aparatu.
jaskrawo różowy (magenta), a jądra komórek – jasnopurpurowy.
Opisane poniżej procedury mogą być stosowane do skrawków o różnej grubości
Na szkiełkach barwionych przy użyciu zestawu PAS Staining Kit zaobserwowano
i rozmiarze oraz mogą być dostosowane do preferencji użytkownika. Wskazane jest
różowoczerwony osad w postaci kryształów sześciennych. Przy oczekiwanych stężeniach
próbne wykonanie barwienia przy użyciu poszczególnych protokołów w celu dostosowania obecność tego osadu nie powinna zakłócać przydatności diagnostycznej testu.
barwienia do preferencji użytkownika.
Zastosowanie skrawków tkankowych utrwalonych lub obrabianych w inny sposób niż
Wybranie opcji wyszczególnionych w Tabeli 1 protokołu umożliwia włączenie funkcji
preparaty badane, zapewnia kontrolę działania wszystkich odczynników i kroków
odparafinowania i suszenia w automacie BenchMark Special Stains.
procedury z wyjątkiem utrwalania i obróbki tkanek. Składniki komórkowe innych
Tabela 1. Zalecany protokół barwienia za pomocą zestawu PAS Staining Kit z użyciem
elementów tkanek mogą pełnić rolę kontroli ujemnej.
automatu do barwienia preparatów BenchMark Special Stains.
Tkanka kontrolna musi być testowana w każdym cyklu barwienia.
Krok protokołu
Metoda
Zestaw PAS Staining Kit jest fabrycznie testowany w celu wykazania, że obojętne
polisacharydy, glikogen, grzyby i błona podstawna mają odczyn jaskrawo różowy
Odparafinowanie
Wybór opcji odparafinowania pozwala
(magenta) na purpurowym lub zielonym tle.
automatyczne usunąć parafinę.
Znane dodatnie kontrole tkankowe powinny być stosowane wyłącznie w celu
monitorowania jakości badanych tkanek i odczynników testowych, a nie pomocniczo do
Suszenie
Aby włączyć suszenie, należy wybrać
formułowania swoistych rozpoznań próbek pochodzących od pacjentów.
temperaturę i czas inkubacji.
Jeżeli nie udaje się potwierdzić dodatniego wybarwienia w preparatach dodatnich kontroli
tkankowych, należy uznać, że wyniki uzyskane dla preparatów testowych są nieważne.
Optymalizacja odczynnika
Wybrać temperaturę od 37°C do 60°C,
Jeżeli w kontrolach ujemnych uzyskuje się wynik dodatni, należy uznać, że wyniki
Schiffa dla PAS (PAS
wartość domyślna to 37°C przez 20 minut.
uzyskane dla preparatów tkanek pacjentów są nieważne.
Schiff’s)
Wybrać czas inkubacji od 12 do 20 minut.
Niewyjaśnione rozbieżności w wynikach kontroli należy niezwłocznie zgłaszać do
Intensywność barwienia będzie różna
lokalnego przedstawiciela pomocy technicznej. Jeśli wyniki kontroli jakości nie są zgodne
w zależności od czasu i temperatury.
ze specyfikacją, wyniki uzyskane dla próbek pochodzących od pacjentów są nieważne.
Należy zidentyfikować i wyeliminować przyczynę, a następnie ponownie zbadać preparaty
Czas inkubacji
Wybrać czas inkubacji z barwnikiem
z próbek pochodzących od pacjentów.
z hematoksyliną (PAS
Hematoxylin counterstain od 4 do 12 minut;
Hematoxylin)
wartość domyślna to 8 minut.
1.
2.
Załadować odczynniki i szkiełka do aparatu.
Przeprowadzić cykl barwienia zgodnie z zalecanym protokołem barwienia (zobacz
Tabela 1 lub Tabela 2) i niniejszą instrukcją obsługi.
Po zakończeniu cyklu należy wyjąć szkiełka z aparatu.
2017-01-18
FT0700-440j
2/3
15114PL Rev G
OGRANICZENIA
PIŚMIENNICTWO
Ograniczenia ogólne
1.
1.
2.
3.
Wykonywanie odczynów histologicznych jest wieloetapowym procesem
diagnostycznym wymagającym specjalistycznego przeszkolenia w doborze
odpowiednich odczynników, wyborze tkanek, ich utrwalaniu i obróbce,
przygotowaniu preparatów i interpretacji wyników barwienia.
Wybarwienie tkanek zależy od traktowania i przygotowania tkanek przed
barwieniem. Różnice w sposobie obróbki preparatów tkankowych i procedurach
technicznych mogą być przyczyną znacznego zróżnicowania wyników, dlatego
wymagane jest regularne wykonywanie barwień kontrolnych (zobacz część
„Procedury kontroli jakości”). Nieprawidłowe utrwalanie, zamrażanie, rozmrażanie,
przemywanie, suszenie, ogrzewanie, wykonywanie skrawków lub ich
zanieczyszczenie domieszką innych tkanek lub płynów może powodować artefakty
lub wyniki fałszywie ujemne.
Interpretację kliniczną dodatniego lub ujemnego wyniku trzeba prowadzić
w kontekście historii klinicznej, morfologii i innych kryteriów histopatologicznych.
Odpowiedzialność za zapoznanie się ze specjalnym barwnikiem oraz metodami
przygotowania preparatu spoczywa na wykwalifikowanym patologu. Barwienie
należy wykonać w akredytowanej pracowni histopatologicznej, pod nadzorem
histopatologa odpowiedzialnego za przeglądanie i ocenę wybarwionych preparatów
oraz właściwe wykonanie dodatnich i ujemnych prób kontrolnych.
CHARAKTERYSTYKA ROBOCZA
Automat do barwienia preparatów BenchMark Special Stains
1.
2.
3.
Powtarzalność między automatami: 100 preparatów tkanki wątroby wybarwiono za
pomocą 5 różnych automatów do barwienia preparatów BenchMark Special Stains
i zestawu PAS Staining Kit. Wybarwienie preparatów oceniano wg kryteriów
zaliczenia/niezaliczenia. Wyniki nie wykazały istotnej różnicy w wybarwieniu
poszczególnych preparatów.
Powtarzalność między cyklami barwienia: 100 preparatów tkanki wątroby
wybarwiano za pomocą 5 automatów do barwienia preparatów BenchMark Special
Stains i zestawu PAS Staining Kit przez 5 nienastępujących po sobie dni.
Wybarwienie preparatów oceniano wg kryteriów zaliczenia/niezaliczenia. Wyniki nie
wykazały istotnej różnicy w wybarwieniu poszczególnych preparatów.
Przetestowano zgodność zestawu PAS Staining Kit z innymi wybranymi
odczynnikami do barwienia. Nie odnotowano żadnych szkodliwych interakcji
chemicznych.
2.
3.
4.
Thompson SW. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield;
CC Thomas; 1966.
Sheehan DC, Hrapchak BB. Theory and Practice of Histotechnology. 2nd edition.
St. Louis, MO: C.V. Mosby Company; 1980.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong
Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). CLSI Web site.
http://www.clsi.org/. Accessed November 3, 2011.
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
BENCHMARK, NexES, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami towarowymi grupy
Roche.
Pozostałe znaki towarowe stanowią własność odnośnych właścicieli.
© 2017 Ventana Medical Systems, Inc.
DANE KONTAKTOWE
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
Automat do barwienia preparatów NexES Special Stains
1.
2.
Powtarzalność w obrębie partii określono na szkiełkach wybarwionych przy użyciu
PAS Staining Kit do 3 różnych bloczków tkanki nerek i 5 bloczków tkanki wątroby
(z dodatnią zawartością glikogenu) przygotowanych w postaci 100 preparatów.
Oceniono wydajność wybarwienia preparatów (ogólne pokrycie i jakość
wybarwienia), przydatność diagnostyczną (możliwość stwierdzenia stanu choroby
na podstawie wybarwienia), tło i wybarwienie kontrastowe wg kryteriów
zaliczenia/niezaliczenia. Wyniki pokazały, że w przypadku 100/100 preparatów
uzyskano wydajność zgodną z kryteriami.
Powtarzalność między seriami wyników uzyskanych przy użyciu zestawu PAS
Staining Kit określono na podstawie barwień 20 preparatów w serii w 5 automatach
(po 1 serii w każdym z automatów). Oceniono wydajność wybarwienia preparatów,
przydatność diagnostyczną, tło i wybarwienie kontrastowe wg kryteriów
zaliczenia/niezaliczenia. Wyniki nie wykazały istotnej różnicy w wybarwieniu
poszczególnych preparatów.
ROZWIĄZYWANIE PROBLEMÓW
1.
2.
3.
Grubość wycinka może wpływać na jakość i intensywność barwienia. W przypadku
nieprawidłowego wybarwienia preparatów należy skontaktować się z lokalnym
przedstawicielem pomocy technicznej.
W tkankach martwiczych lub autolizowanych może występować nieswoisty odczyn
barwny.
Jeśli kontrola dodatnia nie daje prawidłowego wybarwienia, należy sprawdzić, czy
preparat jest opatrzony właściwym kodem kreskowym i prawidłowo wprowadzony
do aparatu. Jeśli kod kreskowy jest poprawny, ale brak jest wybarwienia lub
wybarwienie jest nieprawidłowe, należy skontaktować się z lokalnym
przedstawicielem pomocy technicznej.
2017-01-18
FT0700-440j
3/3
15114PL Rev G