Dako Autostainer/Autostainer Plus

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human lgD
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Nr kat. IS517
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Odczynnik FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human IgD, Ready-to-Use (Dako Autostainer/Autostainer Plus) jest
przeznaczony do stosowania w immunohistochemii w aparatach Dako Autostainer/Autostainer Plus. Przeciwciało to
znakuje łańcuchy delta ludzkich IgD w śledzionowym chłoniaku strefy brzeŜnej (1, 2), chłoniaku z komórek płaszcza
(2), chłoniaku limfocytowym z komórek B (2) i rzadkich podgrupach szpiczaka mnogiego. Interpretacja kliniczna
wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich
prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby
pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Podsumowanie
i wyjaśnienie
Przeciwciało reaguje z łańcuchami delta ludzkiej immunoglobuliny IgD. Śladowe ilości innych przeciwciał usunięto
metodą absorpcji w fazie stałej.
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia poliklonalne przeciwciało królicze dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Immunogen
IgD wyizolowane z puli prawidłowych surowic ludzkich.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z łańcuchami delta ludzkiej immunoglobuliny IgD.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł‚ biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem
z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się po wstępnej obróbce tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX, Target Retrieval Solution, Low pH (50x)
(nr kat. K8005).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX, Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr kat.
K8005). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone i zakryte za pomocą
środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat.
K8010), zastępując odczynnik High pH Target Retrieval Solution z tego zestawu odczynnikiem EnVision FLEX
Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr kat. K8005). Kolejne kroki barwienia oraz czasy inkubacji
zaprogramowano wstępnie w oprogramowaniu aparatów Dako Autostainer/Autostainer Plus, przy uŜyciu
(118710-002)
Dako Denmark A/S
IS517/PL/MNI/2009.12.04 str. 1/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
następujących protokołów:
Protokół wzorcowy: FLEXRTU2 (200 µL dozowanych odczynników) lub FLEXRTU3 (300 µL dozowanych
odczynników)
Autoprogram: IgD (bez barwienia kontrastowego) lub IgDH (z barwieniem kontrastowym).
Dla etapu „Auxiliary” naleŜy ustawić opcję „rinse buffer ” w programach barwienia ≤10 szkiełek. W przypadku
programów barwienia >10 szkiełek etap Auxiliary naleŜy ustawić na „none”. Zapewnia to porównywalne czasy
płukania.
Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Szczegółowe informacje
zawiera instrukcja obsługi odpowiedniego aparatu. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Dako
Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z róŜnym
nasileniem odczynu preparatów, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako w celu
uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8018). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Rabbit,
(Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. IS600).
Interpretacja
wybarwienia
Przeciwciała dają odczyn głównie błonowy.
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne: Większość limfocytów B strefy płaszcza wykazuje silny odczyn głównie błonowy. W ośrodkach
rozmnaŜania migdałków immunoblasty i komórki plazmatyczne wykazują umiarkowany do silnego odczyn
cytoplazmatyczny.
Tkanki patologiczne: W śledzionowym chłoniaku strefy brzeŜnej (1, 2), chłoniaku z komórek płaszcza (2) i chłoniaku
limfocytowym z komórek B (2) większość komórek nowotworowych wykazała reakcję umiarkowaną do wyraźnej
silnej, głównie charakteru błonowego. W rzadkich podgrupach szpiczaka mnogiego większość komórek wykazała
odczyn umiarkowany do silnego, wyraźnie cytoplazmatyczny.
Piśmiennictwo
1.
Campo E, Miguel R, Krenacs l, Sorbara L, Raffeld M, Jaffe ES. Primary nodal marginal zone lymphomas of
splenic and MALT type. Am J Surg Pathol 1999;23: 59-68.
2.
Piris MA, Mollejo M, Campo E, Menarguez J, Flores T, Isaacson PG. A marginal zone pattern may be found in
different varieties of non-Hodgkin’s lymphoma: the morphology and immunohistology of splenic involvement by
B-cell lymphomas simulating splenic marginal zone lymphoma. Histopath 1998;33: 230-9.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(118710-002)
Dako Denmark A/S
IS517/PL/MNI/2009.12.04 str. 2/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17