cobas 4800 HPV Test

Transkrypt

cobas 4800 HPV Test

cobas® 4800 HPV Test
DO STOSOWANIA W DIAGNOSTYCE IN VITRO.
cobas® 4800 System Sample Preparation Kit
c4800 SMPL PREP
cobas® 4800 HPV Amplification/Detection Kit
cobas® 4800 HPV Controls Kit
cobas® 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit
c4800 HPV AMP/DET
c4800 HPV CTLS
c4800 LIQ CYT
cobas® 4800 System Wash Buffer Kit
c4800 WB
960 Tests
240 Tests
960 Tests
240 Tests
10 Sets
P/N: 05235804190
P/N: 05235782190
P/N: 05235910190
P/N: 05235901190
P/N: 05235855190
960 Tests
240 Tests
960 Tests
240 Tests
P/N: 05235839190
P/N: 05235812190
P/N: 05235871190
P/N: 05235863190
UWAGA: Zakup niniejszego produktu umożliwi nabywcy zastosowanie go do amplifikacji i detekcji sekwencji kwasu
nukleinowego z zastosowaniem reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) oraz związanych z nią procesów w ramach
diagnostyki in vitro z użyciem materiału ludzkiego. Wraz z nabyciem niniejszego produktu nabywca nie otrzymuje żadnego
patentu ogólnego ani innej licencji, oprócz prawa do określonego, szczególnego zastosowania produktu.
PRZEZNACZENIE
Test cobas® 4800 Human Papillomavirus (HPV) jest jakościowym testem in vitro służącym do wykrywania wirusa brodawczaka ludzkiego
w próbkach pacjentów. Do detekcji 14 typów wirusa HPV o wysokim stopniu ryzyka (ang. high-risk – HR) w teście tym, w ramach pojedynczej
analizy, wykorzystuje się amplifikację docelowego DNA przez reakcję łańcuchowej polimerazy (PCR) oraz hybrydyzację kwasów nukleinowych.
Test pozwala na oznaczenie szczególnie typów wirusa HPV16 i HPV18, wykrywając równocześnie pozostałe typy o wysokim stopniu ryzyka
(31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 and 68) i o klinicznie istotnych poziomach zakaźności. Próbki są ograniczone do komórek szyjki
macicy pobieranych do pożywki do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR (Roche Molecular Systems, Inc.), płynnego podłoża
PreservCyt® (Cytyc Corp.) oraz płynu konserwującego SurePath® (BD Diagnostics-TriPath).
Wskazania do stosowania testu cobas® 4800 HPV są następujące:
(a) Test cobas® 4800 HPV jest wskazany do użycia u pacjentek, których badanie Pap szyjki macicy wykazało ASC-US (atypowe komórki
nabłonka płaskiego szyjki macicy o nieokreślonym znaczeniu, ang. atypical squamous cells of undetermined significance), w celu
określenia potrzeby skierowania ich na kolposkopię. Wyniki tego testu nie powinny być powodem rezygnacji z kolposkopii u kobiet.
(b) W przypadku kobiet w wieku od 30 lat wzwyż test cobas® 4800 HPV może być stosowany w połączeniu z badaniem Pap jako
dodatkowa podstawa oceny obecności lub braku typów wirusa HPV o wysokim stopniu ryzyka. Informacja ta, łącznie z oceną lekarza
wcześniejszych badań cytologicznych, innych czynników ryzyka i znanych lekarzowi wytycznych, może służyć jako wskazówka do
wyboru sposobu leczenia pacjenta.
(c) W przypadku kobiet w wieku 30 lat lub starszych test cobas® 4800 HPV może być stosowany w połączeniu z badaniem Pap jako
dodatkowa podstawa oceny obecności lub braku genotypów 16 i 18 wirusa HPV. Informacja ta, łącznie z oceną lekarza wcześniejszych
badań cytologicznych, innych czynników ryzyka i znanych lekarzowi wytycznych, może służyć jako wskazówka do wyboru sposobu
leczenia pacjenta.
(d) Test cobas® 4800 HPV jest wskazany do stosowania u pacjentek z wynikiem ASC-US z cytologii jako podstawa oceny obecności lub
braku genotypów wysokiego ryzyka 16 i 18 wirusa HPV. Informacja ta, łącznie z oceną lekarską wcześniejszych badań cytologicznych,
innych czynników ryzyka i znanych lekarzowi wytycznych, może służyć jako wskazówka do wyboru sposobu leczenia pacjentek. Wyniki
tego testu nie powinny być powodem rezygnacji z kolposkopii u kobiet.
PODSUMOWANIE ORAZ OPIS TESTU
Długotrwałe zakażenie wirusem brodawczaka ludzkiego (HPV) jest główną przyczyną raka szyjki macicy oraz jego prekursora – neoplazji
śródnabłonkowej szyjki macicy (ang. cervical intraepithelial neoplasia – CIN)1-3. Obecność zakażenia wirusem HPV można domniemywać
w ponad 99% przypadków raka szyjki macicy na całym świecie3. HPV jest małym wirusem pozbawionym otoczki, zawierającym dwie nici DNA,
którego genom składa się z około 8000 nukleotydów. Istnieje przeszło 118 różnych typów HPV4,5 i około 40 różnych gatunków wirusa HPV,
które mogą zakażać błonę śluzową w okolicy odbytowo-płciowej człowieka6,7. Jednak tylko część spośród typów od 13 do 18 jest uważana za
wirusy wysokiego ryzyka dla rozwinięcia się raka szyjki macicy i jego zmian prekursorowych3,8-13. W analizie danych wieloośrodkowego
badania porównawczego przypadków Międzynarodowej Agencji Badań nad Rakiem (International Agency of Research on Cancer, IARC) iloraz
szans (ang. Odds Ratio – OR) dla raka płaskonabłonkowego z powodu zakażenia wirusem HPV wynosił 158,2, przy czym analiza była
ograniczona do badań z zastosowaniem zatwierdzonych technik detekcji wirusa HPV12. W badaniu tym iloraz szans dla raka szyjki macicy
wynosił od 109 do 276 w badaniach z różnych części świata12.
Chociaż długotrwałe zakażenie wirusem HPV o wysokim stopniu ryzyka (HR) stanowi niezbędny czynnik powstania raka szyjki macicy i jego
zmian prekursorowych, bardzo niewielki procent tych zakażeń prowadzi do rozwinięcia się opisanych stanów chorobowych. Zakażenie
wirusem HPV przenoszone drogą płciową jest niezwykle częste, przy szacunkowej częstości dochodzącej do 75% wszystkich kobiet
narażonych na ekspozycję na wirusa14. Jednak > 90% zakażonych kobiet rozwinie skuteczną odpowiedź immunologiczną i zwalczy zakażenie
w okresie od 6 do 24 miesięcy, bez wystąpienia jakichkolwiek następstw zdrowotnych15-20. Zakażenie dowolnym typem wirusa HPV może
wywołać neoplazję śródnabłonkową szyjki macicy (CIN), choć po zwalczeniu zakażenia wirusem HPV takie niebezpieczeństwo zwykle
także zanika21.
W krajach rozwiniętych, prowadzących przesiewowe programy wykrywania raka szyjki macicy, od połowy lat 50. stosuje się rozmaz Pap jako
podstawowe narzędzie wykrywania wczesnych prekursorów raka szyjki macicy. Chociaż badanie to spektakularnie zmniejszyło w tych krajach
wskaźniki umieralności z powodu raka szyjki macicy, jednak rozmaz Pap wymaga interpretacji przez bardzo doświadczonego cytopatologa
Część Informacje na temat wersji dokumentu znajduje się na końcu tego dokumentu.
05990335001-03PL
1
Doc Rev. 3.0
i jest to test o relatywnie niskiej dokładności, z wysokim odsetkiem wyników fałszywie ujemnych. Nieprawidłowe cechy cytologiczne,
obserwowane w rozmazie Pap, są wywoływane przede wszystkim przez infekcję wirusem HPV, jednak różnorodne zmiany o podłożu
zapalnym bądź związane ze sposobem pobierania próbek mogą skutkować fałszywie dodatnimi wynikami rozmazu Pap. W przypadku
nieprawidłowego wyniku rozmazu Pap postępowanie z wyboru obejmuje: powtórzenie badania, kolposkopię oraz biopsję. Histologicznie
potwierdzone zmiany wysokiego stopnia wymagają usunięcia chirurgicznego w celu zapobieżenia rozwojowi inwazyjnego raka szyjki macicy.
Wirus brodawczaka ludzkiego jest niezwykle trudny do hodowania in vitro, a nie wszyscy pacjenci zakażeni HPV wykazują możliwą do
zaobserwowania reakcję z wytworzeniem przeciwciał. Z tego względu badanie kwasu nukleinowego (DNA) za pomocą reakcji PCR jest czułą
i nieinwazyjną metodą stwierdzenia obecności czynnego zakażenia szyjki macicy wirusem HPV. Wprowadzenie badania kwasu nukleinowego
w kierunku obecności HPV jest obiecujące z punktu widzenia zwiększenia czułości i opłacalności przesiewowych programów wykrywania raka
szyjki macicy z powodu wcześniejszego wykrywania zmian wysokiego ryzyka i zmniejszenia zapotrzebowania na zbędną kolposkopię
i leczenie.
ZASADY PROCEDURY
Test cobas® 4800 HPV oparty jest na dwóch głównych procesach: (1) zautomatyzowanym przygotowaniu próbek w celu jednoczesnej
ekstrakcji DNA wirusa HPV i DNA komórkowego; (2) amplifikacji22 PCR docelowych sekwencji DNA z wykorzystaniem zarówno par primerów
komplementarnych swoistych dla HPV i β-globiny, jak i detekcji w czasie rzeczywistym oznaczonych fluorescencyjnie, rozszczepionych
detekcyjnych sond oligonukleotydowych swoistych dla HPV i β-globiny. Ta jednoczesna ekstrakcja, amplifikacja i detekcja β-globiny w teście
cobas® 4800 HPV pozwala na kontrolowanie całego procesu oznaczania.
Odczynnik Master Mix do testu cobas® 4800 HPV zawiera pary primerów i próby swoiste dla DNA 14 typów wirusów HPV wysokiego ryzyka
oraz dla DNA β-globiny. Detekcja DNA (amplikonu) poddanego amplifikacji jest przeprowadzana podczas cyklu termicznego z zastosowaniem
sond oligonukleotydowych oznaczanych przy użyciu czterech różnych barwników fluorescencyjnych. Poddany amplifikacji sygnał pochodzący
od dwunastu typów wirusa HPV wysokiego ryzyka (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68) jest wykrywany przy użyciu tego samego
barwnika fluorescencyjnego, natomiast każdy z sygnałów pochodzących od wirusa HPV16, HPV18 i β-globiny jest wykrywany przy użyciu
przypisanego mu barwnika fluorescencyjnego.
Przygotowanie próbki
Przygotowanie próbek do testu cobas® 4800 HPV jest zautomatyzowane za pomocą aparatu cobas x 480. Próbki z szyjki macicy, pobrane
do pożywki do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR, płynnego podłoża PreservCyt lub płynu konserwującego SurePath, są
poddawane trawieniu w warunkach denaturujących w podwyższonych temperaturach, a następnie poddawane lizie w obecności odczynnika
chaotropowego. Uwolnione kwasy nukleinowe wirusa HPV, razem z DNA β-globiny służącym jako kontrola procesu, są oczyszczane przez ich
absorpcję do cząstek szkła magnetycznego, czyszczone i oddzielane od tych cząstek, po czym są gotowe do procesu amplifikacji
i detekcji PCR.
Amplifikacja PCR
Wybór sekwencji docelowej
W teście cobas® 4800 HPV wykorzystano primery do określenia sekwencji o długości około 200 nukleotydów w obrębie polimorficznego
regionu L1 genomu HPV. Pula primerów HPV zawarta w odczynniku Master Mix została zaprojektowana w celu amplifikacji DNA wirusów HPV
z grupy 14 typów wysokiego ryzyka (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68)3,8-13,23. Fluorescencyjne sondy oligonukleotydowe
wiążą się z polimorficznymi regionami w obrębie sekwencji określonej przez te primery.
Dodatkowa para primerów i sonda ukierunkowana na ludzki gen β-globiny (amplikon o długości 330 par zasad) umożliwiają kontrolę procesu.
Amplifikacja sekwencji docelowej
Polimerazę DNA24 EagleZ05®, chemicznie zmodyfikowaną wersję polimerazy DNA Thermus species Z0525, wykorzystuje się do wyzwalanej
wysoką temperaturą amplifikacji docelowych fragmentów wirusa HPV oraz kontrolnej β-globiny. Mieszanina zawierająca substraty do reakcji
PCR jest najpierw podgrzewana w celu uaktywnienia polimerazy DNA EagleZ05®, denaturacji DNA wirusa i DNA genomu oraz odsłonięcia
docelowych sekwencji dla primerów. W miarę ochładzania się mieszaniny primery sensowne oraz antysensowne hybrydyzują z docelowymi
sekwencjami DNA. Polimeraza DNA EagleZ05® w obecności jonu dwuwartościowego metalu oraz nadmiaru dezoksyrybonukleotydów (dNTP)
wydłuża primer(y) i następuje synteza drugiej nici DNA. Proces ten kończy pierwszy cykl PCR, dostarczając dwuniciowej kopii DNA
docelowego regionu genomu HPV oraz genu β-globiny. Polimeraza DNA wydłuża przyłączone primery wzdłuż docelowych matryc,
wytwarzając docelowy fragment dwuniciowej cząsteczki DNA wirusa HPV o długości około 200 par zasad lub fragment cząsteczki DNA
o długości 330 par zasad, kodujący β-globinę, określany jako amplikon. Proces ten jest powtarzany wielokrotnie, przy czym w każdym z cykli
ilość zwielokrotnionego DNA (amplikonu) ulega podwojeniu. Amplifikacja odbywa się wyłącznie w tych obszarach genomu HPV i/lub genu
β-globiny, które zawarte są pomiędzy parą odpowiednich primerów. Całość genomu nie ulega amplifikacji.
Zautomatyzowana detekcja w czasie rzeczywistym
Test cobas® 4800 HPV wykorzystuje technologię reakcji PCR w czasie rzeczywistym27,28. Każda sonda oligonukleotydowa w tej reakcji jest
oznaczana barwnikiem fluorescencyjnym, służącym jako reporter, i wygaszaczem wygaszającym emisje fluorescencyjne pochodzące od
barwnika w sondzie jako całości. W miarę postępowania procesu sondy komplementarne do amplikonu wiążą się ze swoistymi jednoniciowymi
sekwencjami DNA i ulegają rozszczepieniu przez aktywność nukleazy od 5' do 3' polimerazy DNA EagleZ05®. Po oddzieleniu się barwnika
reporterowego od wygaszacza za sprawą aktywności nukleazy, po wzbudzeniu odpowiednim widmem światła, emituje on promieniowanie
fluorescencyjne o charakterystycznej długości fali. Ta długość fali charakterystyczna dla każdego z barwników umożliwia niezależne
oznaczanie amplikonu HPV16, amplikonu HPV18, innych amplikonów HR (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68) oraz kontroli β-globiny,
ponieważ swoiste dla tych poszczególnych sekwencji sondy są oznaczane różnymi barwnikami.
05990335001-03PL
2
Doc Rev. 3.0
Amplifikacja wybiórcza
Amplifikację wybiórczą badanego kwasu nukleinowego z próbki klinicznej przy użyciu testu cobas® 4800 HPV uzyskuje się dzięki
zastosowaniu enzymu AmpErase (uracylo-N-glikozylaza) i trójfosforanu dezoksyurydyny (dUTP). Enzym AmpErase rozpoznaje i katalizuje
niszczenie nici DNA zawierających dezoksyurydynę26, lecz nie łańcuchów DNA zawierających dezoksytymidynę. Dezoksyurydyny nie
stwierdza się w występującym naturalnie DNA, natomiast jest ona zawsze obecna w amplikonie z uwagi na stosowanie trójfosforanu
dezoksyurydyny zamiast trójfosforanu tymidyny jako jednego spośród dNTP w odczynniku Master Mix; dlatego jedynie amplikon zawiera
dezoksyurydynę. Dezoksyurydyna powoduje wrażliwość zanieczyszczającego amplikonu na rozkład przez enzym AmpErase przed
amplifikacją docelowego DNA. Enzym AmpErase, zawarty w odczynniku Master Mix, katalizuje rozszczepienie DNA zawierającego
dezoksyurydynę w miejscu reszt dezoksyurydynowych przez otwarcie pierścienia dezoksyrybozy w pozycji C1. Podczas ogrzewania
w pierwszym cyklu termicznym łańcuch amplikonu DNA pęka w miejscu, gdzie znajduje się dezoksyurydyna, w ten sposób wykluczając dalszą
amplifikację DNA. Enzym AmpErase jest nieczynny w temperaturach powyżej 55°C, tj. w czasie trwania całego cyklu termicznego, dlatego nie
niszczy on amplikonu docelowego. Wykazano, że enzym AmpErase w teście cobas® 4800 HPV inaktywuje co najmniej 103 kopii amplikonu HPV
zawierającego dezoksyurydynę na jedną reakcję PCR.
ODCZYNNIKI
Zestaw do przygotowania próbek systemu cobas® 4800
(P/N: 05235782190)
MGP
(Cząsteczki szkła magnetycznego systemu cobas® 4800)
Cząsteczki szkła magnetycznego
93% izopropanolu
Xi
93% (udział wagowy) izopropanolu
F
c4800 SMPL PREP
240 testów
10 x 4,5 ml
Produkt drażniący
Produkt wysoce
łatwopalny
R: 11-36-67, S: 7-16-24/25-26
EB
(Bufor do elucji systemu cobas® 4800)
Bufor Tris-HCl
0,09% azydku sodu
(P/N: 05235804190)
MGP
Cząsteczki szkła magnetycznego
93% izopropanolu
Xi
10 x 18 ml
c4800 SMPL PREP
960 testów
10 x 13,5 ml
Produkt drażniący
F
Produkt wysoce
łatwopalny
R: 11-36-67, S: 7-16-24/25-26
EB
Bufor Tris-HCl
0,09% azydku sodu
Zestaw buforów płuczących systemu cobas® 4800
(P/N: 05235863190)
WB
(Bufor płuczący systemu cobas® 4800)
Dwuwodny cytrynian sodu
0,05% N-metyloizotiazolonu HCl
05990335001-03PL
10 x 18 ml
c4800 WB
240 testów
10 x 55 ml
3
Doc Rev. 3.0
(P/N: 05235871190)
WB
Dwuwodny cytrynian sodu
0,05% N-metyloizotiazolonu HCl
Zestaw do przygotowania płynu do badań
cytologicznych systemu cobas® 4800
(P/N: 05235812190)
PK
(Proteinaza K cobas® 4800)
Bufor Tris-HCl
< 0,05% EDTA
Glicerol
Chlorek sodu
Octan wapnia
< 2% proteinazy K
Xn
< 2% (udział wagowy) proteinazy K
c4800 WB
960 testów
10 x 200 ml
c4800 LIQ CYT
240 testów
10 x 0,9 ml
Produkt szkodliwy
SDS
(Odczynnik SDS systemu cobas® 4800)
Bufor Tris-HCl
0,2% odczynnika SDS
0,09% azydku sodu
LYS
(Bufor do lizy systemu cobas® 4800)
Bufor Tris-HCl
37% chlorowodorku guanidyny
< 5% polidokanolu
Xn
37% (udział wagowy) chlorowodorku guanidyny
10 x 3 ml
10 x 10 ml
Produkt szkodliwy
R: 22-36/38, S: 13-26-36-46
N
< 5% (udział wagowy) polidokanolu
Produkt niebezpieczny
dla środowiska
R: 22-41-50, S: 26-39-61
(P/N: 05235839190)
PK
Bufor Tris-HCl
< 0,05% EDTA
Glicerol
Chlorek sodu
Octan wapnia
< 2% proteinazy K
Xn
< 2% (udział wagowy) proteinazy K
c4800 LIQ CYT
20 x 1,2 ml
Produkt szkodliwy
SDS
Bufor Tris-HCl
0,2% odczynnika SDS
0,09% azydku sodu
05990335001-03PL
960 testów
10 x 9 ml
4
Doc Rev. 3.0
LYS
Bufor Tris-HCl
37% chlorowodorku guanidyny
< 5% polidokanolu
Xn
37% (udział wagowy) chlorowodorku guanidyny
10 x 36 ml
Produkt szkodliwy
R: 22-36/38, S: 13-26-36-46
N
< 5% (udział wagowy) polidokanolu
Produkt niebezpieczny
dla środowiska
R: 22-41-50, S: 26-39-61
Zestaw do amplifikacji/detekcji cobas® 4800
(P/N: 05235901190)
HPV MMX
(Odczynnik Master Mix cobas® 4800 HPV)
Bufor Tricine
Octan potasu
Wodorotlenek potasu
Glicerol
< 0,13% dATP, dCTP, dGTP, dUTP
< 0,01% sensownych i antysensownych primerów HPV
< 0,01% sensownych i antysensownych primerów β-globiny
< 0,01% oznaczanych fluorescencyjnie sond HPV
< 0,01% oznaczanych fluorescencyjnie sond β-globiny
< 0,10% polimerazy DNA EagleZ05® (bakteryjnej)
< 0,10% enzymu AmpErase (uracylo-N-glikozylaza) (bakteryjna)
0,09% azydku sodu
HPV Mg/Mn
(Roztwór Mg/Mn cobas® 4800 HPV)
Octan magnezu
Octan manganu
< 0,02% lodowatego kwasu octowego
0,09% azydku sodu
Zestaw do amplifikacji/detekcji cobas® 4800
(P/N: 05235910190)
HPV MMX
Bufor Tricine
Octan potasu
Wodorotlenek potasu
Glicerol
< 0,13% dATP, dCTP, dGTP, dUTP
< 0,01% sensownych i antysensownych primerów HPV
< 0,01% sensownych i antysensownych primerów β-globiny
< 0,01% oznaczanych fluorescencyjnie sond HPV
< 0,01% oznaczanych fluorescencyjnie sond β-globiny
< 0,10% polimerazy DNA EagleZ05® (bakteryjnej)
< 0,10% enzymu AmpErase (uracylo-N-glikozylaza) (bakteryjna)
0,09% azydku sodu
HPV Mg/Mn
Octan magnezu
Octan manganu
< 0,02% lodowatego kwasu octowego
0,09% azydku sodu
05990335001-03PL
c4800 HPV AMP/DET
240 testów
10 x 0,5 ml
10 x 1,0 ml
c4800 HPV AMP/DET
960 testów
20 x 1,0 ml
10 x 1,0 ml
5
Doc Rev. 3.0
cobas® 4800 HPV Controls Kit
c4800 HPV CTLS
Zestaw kontroli cobas® 4800 HPV
(P/N: 05235855190)
HPV (+) C
(Kontrola dodatnia cobas® 4800 HPV
Bufor Tris-HCl
EDTA
0,05% azydku sodu
< 0,002% poly rA RNA (syntetycznego)
< 0,001% niezakaźnego plazmidu DNA (bakteryjnego) zawierającego sekwencje 16, 18, 39 HPV
< 0,001% niezakaźnego plazmidu DNA (bakteryjnego) zawierającego sekwencje ludzkiej β-globiny
(–) C
(Kontrola ujemna systemu cobas® 4800)
Bufor Tris-HCl
EDTA
0,05% azydku sodu
< 0,002% poly rA RNA (syntetycznego)
10 zestawów
10 x 0,5 ml
10 x 0,5 ml
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
A. DO STOSOWANIA W DIAGNOSTYCE IN VITRO.
B. Test służy do stosowania z próbkami z szyjki macicy pobranymi przy użyciu pożywki do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR,
płynnego podłoża PreservCyt oraz płynu konserwującego SurePath.
C. Nie należy pipetować za pomocą ust.
D. Nie wolno jeść, pić ani palić w obszarach roboczych laboratorium. Posługując się próbkami i odczynnikami z zestawów, należy stosować
jednorazowe rękawice, fartuchy laboratoryjne oraz odpowiednią ochronę oczu. Należy dokładnie umyć ręce po pracy z próbkami
i odczynnikami testowymi.
E. Należy unikać zakażenia odczynników: bakteryjnego i przez DNA.
F. Należy wyrzucić wszystkie nieużyte odczynniki, postępując zgodnie z przepisami krajowymi, federalnymi, stanowymi i lokalnymi.
G. Nie wolno używać odczynników po upływie ich dat przydatności.
H. Nie należy poddawać odczynników pulowaniu.
I. Karty charakterystyki substancji niebezpiecznych (Material Safety Data Sheets – MSDS) są dostępne na żądanie w miejscowym
przedstawicielstwie firmy Roche.
J. W celu zapobieżenia zanieczyszczeniu konieczne jest noszenie rękawic i ich zmiana przed przystąpieniem do ponownej pracy z próbkami
i odczynnikami cobas® 4800.
K. Z próbkami należy obchodzić się tak jak z materiałem zakaźnym, stosując laboratoryjne procedury bezpieczeństwa, takie jak określone
w dokumentach Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories29 oraz CLSI Document M29-A330.
L. Odczynnik LYS zawiera chlorowodorek guanidyny. Nie dopuścić do bezpośredniego kontaktu między chlorowodorkiem guanidyny
i podchlorynem sodu (wybielacz) lub innymi wysoko reaktywnymi odczynnikami, takimi jak kwasy lub zasady. Takie mieszaniny
mogą wydzielać trujące gazy. Jeśli płyn zawierający chlorowodorek guanidyny ulegnie rozlaniu, do czyszczenia należy używać
odpowiedniego detergentu laboratoryjnego i wody. W przypadku rozlania płynu zawierającego potencjalne czynniki zakaźne do
czyszczenia należy używać NAJPIERW detergentu laboratoryjnego i wody, a następnie 0,5-procentowego roztworu podchlorynu sodu.
M. Odczynnik MGP zawiera izopropanol i jest wysoce łatwopalny. Należy przechowywać go z dala od otwartego ognia i potencjalnych źródeł
iskier.
N. Odczynniki EB, SDS, HPV MMX, HPV Mg/Mn, (–) C i HPV (+) C zawierają azydek sodu. Azydek sodu może reagować z instalacjami
wodno-kanalizacyjnymi wykonanymi z ołowiu lub miedzi, tworząc silnie wybuchowe azydki metali. Usuwając roztwory zawierające azydek
sodu do zlewów laboratoryjnych, należy spłukać rury dużą ilością zimnej wody, aby zapobiec nagromadzeniu azydków.
O. Podczas pracy z jakimikolwiek odczynnikami należy używać osłon na oczy oraz fartuchów laboratoryjnych i rękawic jednorazowych. Należy
unikać kontaktu wymienionych materiałów ze skórą, oczami i błonami śluzowymi. Jeżeli dojdzie do kontaktu, należy natychmiast spłukać
dużą ilością wody. Jeżeli nie zostaną podjęte odpowiednie środki, może dojść do oparzeń. W razie rozlania należy przed wytarciem
rozcieńczyć wodą.
P. Wszystkie przedmioty jednorazowego użytku są przeznaczone do jednokrotnego użycia. Nie należy ich używać powtórnie.
Q. Do czyszczenia aparatu cobas x 480 lub analizatora cobas z 480 nie wolno używać roztworu podchlorynu sodu (utleniacza).
Czyszczenia aparatu cobas x 480 lub analizatora cobas z 480 należy dokonywać zgodnie z procedurami opisanymi w Podręczniku
użytkownika systemu cobas® 4800.
R. Dodatkowe ostrzeżenia, środki ostrożności oraz procedury mające na celu zredukowanie ryzyka zakażenia, dotyczące aparatu cobas x
480 lub analizatora cobas z 480, można znaleźć w Podręczniku użytkownika systemu cobas® 4800.
WYMAGANIA DOTYCZĄCE PRZECHOWYWANIA I UŻYTKOWANIA
A. Nie należy zamrażać odczynników.
B. Odczynniki MGP, EB, PK, SDS, LYS, HPV MMX, HPV Mg/Mn, HPV (+) C i (–) C należy przechowywać w temperaturze 2–8°C. Odczynniki
te zachowują stabilność do podanej daty przydatności.
C. Odczynnik WB należy przechowywać w temperaturze 15–25°C. Odczynnik zachowuje stabilność do podanej daty przydatności.
05990335001-03PL
6
Doc Rev. 3.0
DOSTARCZONE MATERIAŁY
A. cobas® 4800 System Sample Preparation Kit
(P/N: 05235782190)
MGP
EB
B. cobas® 4800 System Sample Preparation Kit
(P/N: 05235804190)
MGP
EB
C. cobas® 4800 System Wash Buffer Kit
(P/N: 05235863190)
WB
D. cobas® 4800 System Wash Buffer Kit
(P/N: 05235871190)
WB
E. cobas® 4800 HPV Amplification/Detection Kit
Zestaw do amplifikacji/detekcji cobas® 4800 HPV
(P/N: 05235901190)
HPV MMX
HPV Mg/Mn
F. cobas® 4800 HPV Amplification/Detection Kit
Zestaw do amplifikacji/detekcji cobas® 4800 HPV
(P/N: 05235910190)
HPV MMX
HPV Mg/Mn
G. cobas® 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit
(P/N: 05235812190)
PK
SDS
LYS
H. cobas® 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit
(P/N: 05235839190)
PK
SDS
LYS
05990335001-03PL
c4800 SMPL PREP
240 testów
c4800 SMPL PREP
960 testów
c4800 WB
c4800 WB
c4800 HPV AMP/DET
c4800 HPV AMP/DET
c4800 LIQ CYT
c4800 LIQ CYT
7
240 testów
960 testów
240 testów
960 testów
240 testów
960 testów
Doc Rev. 3.0
I. cobas® 4800 HPV Controls Kit
Zestaw kontroli cobas® 4800 HPV
(P/N: 05235855190)
HPV (+) C
(Kontrola dodatnia cobas® 4800 HPV)
(–) C
(Kontrola ujemna systemu cobas® 4800)
c4800 HPV CTLS
10 zestawów
MATERIAŁY WYMAGANE, LECZ NIEDOSTARCZANE
Obsługa próbek i odczynników
• Pożywka do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR (Roche P/N 5619637190, opcjonalna)
• Końcówki CO-RE, 1000 µl, statyw 96 (Roche P/N 04639642001 lub Hamilton P/N 235905)
• Pojemnik na odczynniki 50 ml (Roche P/N 05232732001)
• Pojemnik na odczynniki 200 ml (Roche P/N 05232759001)
• Płytka (z głębokimi dołkami) do ekstrakcji systemu cobas® 4800 (Roche P/N 05232716001)
• Płytka AD 0,3 ml (z mikrodołkami) i film uszczelniający system cobas® 4800 (Roche P/N 05232724001)
• Trwała torba na odpady [Roche P/N 05530873001 (mała) lub 04691989001 (duża)]
• Plastikowa zsuwnia Hamilton STAR (Roche P/N 04639669001)
• Probówki okrągłodenne 13 ml, (Sarstedt P/N 60.541.122) do użytku jako wtórne probówki na próbki
• Korki, kolor naturalny (Sarstedt P/N 65.176.026, do ponownego zamykania przetworzonych próbek w okrągłodennych probówkach typu
Sarstedt 13 ml)
• Rękawice jednorazowe bezpudrowe
Przyrządy i oprogramowanie
• Aparat cobas x 480
• Analizator cobas z 480
• Jednostka sterująca systemu cobas® 4800 z oprogramowaniem systemu w wersji 1.0 lub nowszej
• cobas® 4800 Work Order Editor w wersji 0.2.9.0912 lub nowszej
Wyposażenie i materiały opcjonalne
• Pipety: dostarczające do 1000 µl
• Końcówki z barierą aerozolową bez DNazy: dostarczające do 1000 µl
• Wirówka laboratoryjna, wyposażona w bęben wirówki o minimalnej wartości RCF równej 1500
• Osobna płytka magnetyczna (Roche P/N 05440777001)
• Mieszadło wibracyjne (do mieszania jednej probówki)
• Mieszadło wibracyjne typu vortexer do mieszania wielu probówek [np. VWR P/N 58816-116]
POBIERANIE, TRANSPORT I PRZECHOWYWANIE PRÓBEK
UWAGA: Ze wszystkimi próbkami należy obchodzić się jak z materiałem potencjalnie zakaźnym.
A. Pobieranie próbek
Próbki z szyjki macicy, pobrane do pożywki do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR, płynnego podłoża PreservCyt lub płynu
konserwującego SurePath, zostały zatwierdzone do użycia z testem cobas® 4800 HPV. Próbki z szyjki macicy należy pobierać zgodnie
z instrukcjami producenta.
B. Transport próbek
Próbki z szyjki macicy, pobrane do pożywki do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR, płynnego podłoża PreservCyt lub płynu
konserwującego SurePath, można transportować w temperaturze 2–30°C. Próbki zawierające HPV muszą być transportowane zgodnie
z przepisami krajowymi, federalnymi, stanowymi i lokalnymi dotyczącymi transportu czynników etiologicznych31.
C. Przechowywanie próbek
Próbki z szyjki macicy pobrane do pożywki do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR, płynnego podłoża PreservCyt lub płynu
konserwującego SurePath można przechowywać w temperaturze 2–30°C przez okres do 6 miesięcy od daty pobrania. Próbki z szyjki macicy
pobrane do płynu konserwującego SurePath można przechowywać w temperaturze 2–8°C do 6 miesięcy, a w temperaturze 15–30°C do 14 dni
od daty pobrania.
05990335001-03PL
8
Doc Rev. 3.0
INSTRUKCJA UŻYTKOWANIA
UWAGA: Wszystkie odczynniki oprócz odczynników HPV MMX i HPV Mg/Mn przed załadowaniem do aparatu cobas x 480
muszą znajdować się w temperaturze pokojowej. Odczynniki HPV MMX i HPV Mg/Mn można ładować
bezpośrednio z temperatury przechowywania 2–8°C, ponieważ ich temperatura zrównoważy się z temperaturą
otoczenia wewnątrz aparatu cobas x 480 podczas procesu ich przetwarzania.
UWAGA: Próbki pobrane do pożywki do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR, płynnego podłoża PreservCyt
lub płynu konserwującego SurePath przed ich załadowaniem do aparatu cobas x 480 muszą znajdować się
w temperaturze pokojowej.
UWAGA: Dokładne instrukcje użytkowania można znaleźć w Podręczniku użytkownika systemu cobas® 4800.
Liczba testów w serii:
System cobas® 4800 jest przeznaczony do obsługi testu cobas® 4800 HPV o liczbie próbek i kontroli od 1 do 22 (do 24 testów w jednym
cyklu pracy) i od 1 do 94 próbek i kontroli (do 96 testów w jednym cyklu pracy). Każdy zestaw do przygotowania próbek systemu cobas® 4800,
zestaw do przygotowania płynu do badań cytologicznych systemu cobas® 4800, zestaw buforu płuczącego systemu cobas® 4800 i zestaw do
amplifikacji/ detekcji cobas® 4800 HPV zawiera ilość odczynników wystarczającą na 10 cykli pracy 24 testów (240 testów w zestawie) lub
96 testów (960 testów w zestawie). Zestaw kontroli cobas® 4800 HPV zawiera ilość odczynników, wystarczającą na 10 cykli pracy 24 lub
96 testów (10 kompletów w zestawie). Minimalna liczba dla jednego cyklu pracy w systemie cobas® 4800 to 1 próbka plus kontrole. Do
przeprowadzenia każdego cyklu pracy konieczna jest jedna kopia kontroli ujemnej [(–) C] systemu cobas® 4800 i jedna kopia kontroli
dodatniej [HPV (+) C] cobas® 4800 HPV (patrz część „Kontrola jakości”).
Przebieg pracy:
UWAGA: Chociaż nie stanowi to optymalnego zużycia odczynników, do cyklu pracy 24 próbek można użyć zestawu
960 testów.
UWAGA: Aby zwiększyć do maksimum wydajność procesu przetwarzania, całkowita liczba próbek pacjentów plus kontroli
powinna być wielokrotnością liczby osiem.
Test cobas® 4800 HPV można przeprowadzać z zastosowaniem dwóch przebiegów pracy, o nazwach w oprogramowaniu cobas® 4800: „Full
Workflow” lub „PCR Only Workflow”.
HPV Full Workflow:
„HPV Full Workflow” obejmuje przygotowanie próbek w aparacie cobas x 480 oraz amplifikację/detekcję w analizatorze cobas z 480. Cykl
pracy może obejmować 24 testy (z 1–22 próbkami plus 2 kontrole) lub 96 testów (z 1–94 próbkami plus 2 kontrole). Szczegółowe informacje
można znaleźć w części „Przeprowadzanie przebiegu pracy Full Workflow”, poniżej, oraz w Podręczniku użytkownika systemu cobas® 4800.
HPV PCR Only Workflow:
„HPV PCR Only Workflow” obejmuje amplifikację/detekcję w analizatorze cobas z 480. Cykl pracy może obejmować od 1 do 94 próbek plus
2 kontrole. Szczegółowe informacje można znaleźć w części „Przeprowadzanie przebiegu pracy PCR Only” poniżej oraz w Podręczniku
użytkownika systemu cobas® 4800.
Próbki:
Istnieją trzy rodzaje próbek z szyjki macicy, które można poddać oznaczeniu przy użyciu testu cobas® 4800 HPV: a) próbki z szyjki macicy
w podłożu płynnym PreservCyt, b) próbki z szyjki macicy w podłożu do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR i c) próbki z szyjki
macicy w płynie konserwującym SurePath. Próbki w podłożu płynnym PreservCyt i próbki w podłożu do przechowywania pobranych komórek
cobas® PCR można przetwarzać w aparacie cobas x 480 bezpośrednio po ich wyjęciu z podstawowego pojemnika o pojemności 20 ml,
opatrzonego właściwym kodem kreskowym lub po wyjęciu z opatrzonej właściwym kodem kreskowym okrągłodennej probówki Sarstedt 13 ml.
Próbki w płynie konserwującym SurePath muszą zostać przeniesione do opatrzonej właściwym kodem kreskowym okrągłodennej probówki
Sarstedt 13 ml w celu ich przetworzenia w aparacie cobas x 480. W celu uzyskania informacji na temat procedur właściwego kodowania
kreskowego należy zapoznać się z Podręcznikiem użytkownika systemu cobas® 4800 oraz listą kodów kreskowych dopuszczalnych dla
systemu cobas® 4800.
UWAGA: Minimalna objętość wypełnienia, jaka musi znajdować się w podstawowych pojemnikach zawierających podłoże
do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR i płynne podłoże PreservCyt, wynosi 3,0 ml. Stosując wtórne
okrągłodenne probówki 13 ml należy napełniać je minimalną objętością 1,0 ml i maksymalną objętością 10 ml.
UWAGA: Do pobierania próbek z szyjki macicy do testu cobas® 4800 HPV należy używać wyłącznie podłoża do
przechowywania pobranych komórek cobas® PCR, płynnego podłoża PreservCyt i płynu konserwującego
SurePath. Używanie testu cobas® 4800 HPV z innymi przyrządami do pobierania moczu i innymi rodzajami
pożywek nie zostało zatwierdzone. Używanie testu cobas® 4800 HPV z innymi przyrządami do pobierania próbek
i/lub innymi rodzajami pożywek może prowadzić do otrzymania fałszywie ujemnych, fałszywie dodatnich i/lub
nieważnych wyników.
UWAGA: Może być konieczne podzielenie próbek na alikwoty do opatrzonych właściwym kodem kreskowym
okrągłodennych probówek Sarstedt 13 ml w celu ich przetworzenia w aparacie cobas x 480. Do postępowania
z próbkami należy używać pipetorów z końcówkami z barierą aerozolową lub dodatnim wypieraniem. Aby
zapobiec skażeniu krzyżowemu przetworzonych próbek, do ponownego zatykania próbek po ich przetworzeniu
należy używać dodatkowych korków do tych probówek w innym kolorze (neutralnym; patrz rozdział MATERIAŁY
WYMAGANE, LECZ NIEDOSTARCZANE).
UWAGA: Podczas przenoszenia próbek z podstawowych pojemników do wtórnych, okrągłodennych probówek 13 ml
należy zachować ostrożność. Przed przeniesieniem należy zamieszać próbki w mieszadle wibracyjnym. Należy
zmieniać końcówki pipet po zakończeniu postępowania z każdą z próbek.
UWAGA: Nie należy przetwarzać próbek, które zawierają widoczną krew lub mają ciemnobrązowy kolor.
05990335001-03PL
9
Doc Rev. 3.0
Pojedynczy przebieg pracy może obejmować różne kombinacje próbek (podłoża do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR,
płynne podłoże PreservCyt i/lub płyn konserwujący SurePath), a każda próbka może zostać poddana oznaczeniu zarówno przy użyciu podtypu
testu metodą genotypowania HPV wysokiego ryzyka, jak i HPV wysokiego ryzyka Plus.
Przebiegi pracy
Przeprowadzanie przebiegu pracy Full Workflow:
A. Testowi cobas® 4800 HPV można poddawać cykle pracy od 1 do 22 próbek plus jedna kontrola ujemna systemu cobas® 4800 i jedna
kontrola dodatnia systemu cobas® 4800 HPV (obejmujące 24 testy) oraz od 1 do 94 próbek plus jedna kontrola ujemna systemu cobas®
4800, a także jedna kontrola dodatnia systemu cobas® 4800 HPV (obejmujące 96 testów).
B. Uruchom system i wykonaj procedury konserwacyjne, postępując zgodnie z instrukcją opisaną w Podręczniku użytkownika systemu
cobas® 4800 w części dotyczącej obsługi.
C. Utwórz plik harmonogramu pracy dla pełnego cyklu pracy, postępując zgodnie z instrukcją podaną w Podręczniku użytkownika systemu
cobas® 4800. Plik harmonogramu pracy nie jest wymagany w przypadku używania sieci LIS.
D. Wybierz rodzaj pożywki dla każdej z próbek.
• W pliku harmonogramu pracy wybierz „PreservCyt” dla żądania próbek w płynnym podłożu PreservCyt lub podłożu do przechowywania
pobranych komórek cobas® PCR.
• W pliku harmonogramu pracy wybierz „SurePath” dla żądania próbek w płynie konserwującym SurePath.
E. Aby raportować pojedyncze wyniki lub kombinacje testów typów wirusa HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 wysokiego
ryzyka, wybierz podtyp testu „HPV High Risk Panel”.
F. Aby raportować pojedyncze wyniki lub kombinacje testów typów wirusa HPV 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 wysokiego ryzyka
oraz oddzielnie raportować wyniki testu typu wirusa HPV 16 wysokiego ryzyka i wyniki testu typu wirusa HPV 18 wysokiego ryzyka, wybierz
podtyp testu „HPV High Risk Panel Plus Genotyping”.
G. Uruchom nowy cykl pracy, postępując zgodnie ze wskazówkami kreatora konfiguracyjnego oprogramowania. Wybierz rodzaj testu:
„HPV workflow”.
H. Postępuj zgodnie ze wskazówkami kreatora konfiguracyjnego oprogramowania, dotyczącymi ładowania próbek i postępowania z plikiem
harmonogramu pracy.
UWAGA: Próbki można ładować w opatrzonych kodem kreskowym podstawowych lub wtórnych probówkach w dowolnej
kolejności, jeśli tylko ich kody kreskowe odpowiadają kodom w harmonogramie pracy.
UWAGA: Jeśli podstawowe pojemniki z próbkami zawierające podłoże do przechowywania pobranych komórek cobas®
PCR lub płynne podłoże PreservCyt są przeznaczone do przetwarzania, przed załadowaniem należy je zamieszać
w mieszadle wibracyjnym.
I. Postępuj zgodnie ze wskazówkami kreatora konfiguracyjnego oprogramowania, dotyczącymi ładowania wszystkich produktów.
J. Postępuj zgodnie ze wskazówkami kreatora konfiguracyjnego oprogramowania, dotyczącymi ładowania wszystkich odczynników.
UWAGA: Kontrole [HPV (+) C i (–) C] nie są ładowane wraz z próbkami. Są one ładowane do nośnika na odczynniki
podczas ładowania odczynnika. Kontrolom HPV (+) i (–) są przydzielone odpowiednio dwie pozycje (A1 i B1)
każdej z płytek do ekstrakcji i płytek z mikrodołkami.
UWAGA: System cobas® 4800 ma wewnętrzny zegar, kontrolujący czas, przez jaki odczynniki znajdują się w systemie. Po
zeskanowaniu WB na zakończenie procesu ładowania jest przeznaczona 1 godzina. Następnie należy kliknąć
przycisk „Start”. Na zakładce „Workplace” wyświetla się zegar odliczający czas.
UWAGA: Aby zapewnić właściwe przeniesienie odczynnika MGP, zamieszaj w mieszadle wibracyjnym lub energicznie
wstrząśnij butelką MGP przed umieszczeniem jej w pojemniku na odczynniki.
K. Załaduj odczynniki do przygotowywania próbek (WB, MGP, EB, SDS i LYS) do pojemników na odczynniki opatrzonych kodem kreskowym,
stosując metodę „zeskanuj, zeskanuj, włóż, umieść”:
• Zeskanuj kod kreskowy butelki odczynnika.
• Zeskanuj kod kreskowy pojemnika na odczynniki.
• Włóż odczynnik do pojemnika.
• Umieść wypełniony pojemnik na odczynniki w przypisanej mu pozycji w nośniku na odczynniki.
L. Pojemniki na odczynniki są dostępne w dwóch rozmiarach: 200 ml i 50 ml. Postępuj zgodnie ze wskazówkami kreatora konfiguracyjnego
oprogramowania, dotyczącymi wyboru pojemnika na odczynniki odpowiednich rozmiarów. Kody kreskowe pojemnika na odczynniki muszą
znajdować się po prawej stronie nośnika.
UWAGA: Odczynniki do amplifikacji/detekcji (HPV MMX i HPV Mg/Mn), kontrole [HPV (+) C i (–) C] oraz PK są ładowane
bezpośrednio do nośnika na odczynniki i automatycznie skanowane przez aparat cobas x 480.
UWAGA: Wszystkie odczynniki i pojemniki na odczynniki są opatrzone kodem kreskowym i przeznaczone do jednokrotnego użycia. Oprogramowanie cobas® 4800 umożliwia śledzenie użycia odczynników oraz pojemników na
odczynniki i odrzucenie wcześniej używanych odczynników lub pojemników na odczynniki. Oprogramowanie
weryfikuje także, czy do aparatu załadowano odczynniki z zestawów o odpowiedniej liczbie testów, np.
zapobiegając użyciu zestawu 240 testów w cyklu pracy z ponad 22 próbkami pacjentów.
UWAGA: Oprogramowanie cobas® 4800 monitoruje datę ważności wszystkich odczynników. Odczynniki po upływie daty
ważności nie zostaną dopuszczone do stosowania w systemie cobas® 4800.
M. Rozpocznij przygotowanie próbek, klikając przycisk „Start Run”.
05990335001-03PL
10
Doc Rev. 3.0
N. Po pomyślnym zakończeniu procesu przygotowania próbek kliknij przycisk **„Unload”, aby wyładować nośnik na płytki.
** Stan przygotowania próbki można sprawdzić w tym momencie, przed kliknięciem przycisku „Unload”. Patrz podręcznik użytkownika
systemu cobas cobas® 4800.
O. Aby uszczelnić płytkę z mikrodołkami, przenieść płytkę do analizatora cobas z 480 i rozpocząć cykl pracy amplifikacji i detekcji, postępuj
zgodnie z instrukcją opisaną w Podręczniku użytkownika systemu cobas® 4800.
UWAGA: System cobas® 4800 ma wewnętrzny zegar, kontrolujący czas, jaki upływa od momentu dodania
przygotowanych próbek do odczynnika Master Mix, będącego w użyciu. Amplifikację i detekcję należy rozpocząć
jak najszybciej, jednak nie później niż 90 minut od zakończenia cyklu pracy aparatu cobas x 480. Na zakładce
„Workplace” wyświetla się zegar odliczający czas.
P. Po zakończeniu procesu amplifikacji i detekcji wyładuj płytkę z mikrodołkami z analizatora cobas z 480.
Q. Aby przeglądać i akceptować poszczególne wyniki, postępuj zgodnie z instrukcją opisaną w Podręczniku użytkownika systemu
cobas® 4800.
Przeprowadzanie przebiegu pracy PCR Only:
UWAGA: Przebieg pracy PCR Only jest dostępny jako opcja przywracania, w przypadku gdy pełny przebieg pracy nie
może zostać zakończony z powodu okoliczności, na które użytkownik nie ma wpływu (np. wyłączenie zasilania
podczas cyklu amplifikacji/detekcji).
UWAGA: Tylko próbki, których przetwarzanie w aparacie cobas x 480 zakończyło się pomyślnie, mogą zostać poddane
procesowi amplifikacji/detekcji z zastosowaniem cyklu pracy PCR Only. Podczas cyklu pracy PCR Only kontrola
systemu dotycząca odczynników i innych produktów jest ograniczona. Podczas przebiegu pracy PCR Only nie
zachodzi śledzenie pozycji próbek – użytkownik końcowy musi się upewnić, że bieżąca pozycja próbki w płytce
z mikrodołkami odpowiada przypisanej jej pozycji w pliku harmonogramu pracy. Podczas przygotowywania
płytki z mikrodołkami konieczne jest zachowanie maksymalnej ostrożności, aby zapewnić właściwe
przygotowanie reakcji PCR oraz w celu uniknięcia zakażenia.
UWAGA: Próbki przetworzone w aparacie cobas x 480 mają ograniczoną stabilność. Muszą one zostać poddane
amplifikacji/detekcji w przebiegu pracy PCR Only w ciągu 24 godzin, jeśli są przechowywane w temperaturze od
15°C do 30°C i w ciągu 7 dni, jeśli są przechowywane w temperaturze od 2°C do 8°C.
UWAGA: Aby dokonać zmian w kodach kreskowych dodatnich i ujemnych kontroli, postępuj zgodnie z instrukcją opisaną
w Podręczniku użytkownika systemu cobas® 4800.
A. Utwórz plik harmonogramu pracy dla przebiegu pracy PCR Only, postępując zgodnie z instrukcją opisaną w Podręczniku użytkownika
systemu cobas® 4800.
a. Informacje na temat kodów kreskowych próbek, rodzajów pożywek, podtypów testów oraz pozycji w płytce do ekstrakcji cobas® 4800
dla cyklu pracy, wymagającego powtórzenia procesu amplifikacji/detekcji, można znaleźć w pliku wydruku wyniku lub eksportu wyniku.
b. W przypadku kontroli dodatnich i ujemnych edytuj ostatnie 4 cyfry, aby określić liczbę ponownych zastosowań kodów kreskowych
kontroli dla przebiegu pracy tylko amplifikacji i detekcji, postępując zgodnie z instrukcją opisaną w Podręczniku użytkownika systemu
cobas® 4800.
B. Przygotuj odczynnik Master Mix dla testu cobas® 4800 HPV:
a. Dla cyklu pracy do 24 testów dodaj 240 µl odczynnika HPV Mg/Mn na jedną butelkę odczynnika HPV MMX (butelka 0,5 ml z zestawu
240 testów).
b. Dla cyklu pracy do 96 testów dodaj 450 µl odczynnika HPV Mg/Mn na każdą z dwóch butelek odczynnika HPV MMX (butelki 1,0 ml
z zestawu 960 testów).
UWAGA: Cykl pracy PCR Only musi się rozpocząć w ciągu 90 minut od dodania odczynnika HPV Mg/Mn do HPV MMX.
System nie kontroluje czasu, jaki upływa od momentu dodania przygotowanych próbek do roboczego
odczynnika Master Mix, będącego w użyciu w przebiegu pracy PCR Only. Użytkownik końcowy musi zapewnić,
że amplifikacja i detekcja rozpoczęła się w wyznaczonym czasie.
C. Dokładnie zmieszaj odczynnik roboczy Master Mix, ostrożnie odwracając fiolkę(-ki). Nie mieszaj roboczego odczynnika Master Mix
w mieszadle wibracyjnym.
D. Przenieś 25 µl odczynnika roboczego Master Mix do odpowiednich pozycji w płytce z mikrodołkami.
E. Umieść płytkę do ekstrakcji cyklu pracy, który ma zostać powtórzony, na osobną płytkę magnetyczną.
F. Ręcznie przenieś 25 µl eluatu z pozycji w płytce do ekstrakcji do odpowiednich pozycji w płytce z mikrodołkami. Upewnij się, że zostały
zachowane właściwe pozycje (np. eluat w pozycji A1 płytki do ekstrakcji jest przeniesiony do pozycji A1 płytki z mikrodołkami). Upewnij się,
że do płytki z mikrodołkami nie został przeniesiony odczynnik MGP.
G. Aby uszczelnić płytkę z mikrodołkami, postępuj zgodnie z instrukcją opisaną w Podręczniku użytkownika systemu cobas® 4800.
H. Odwiruj płytkę z mikrodołkami za pomocą bębna wirówki przez co najmniej 5 sekund przy wartości RCF wynoszącej 1500.
I. Przenieś płytkę do analizatora cobas z 480 i rozpocznij cykl amplifikacji i detekcji.
J. Po zakończeniu procesu amplifikacji i detekcji wyładuj płytkę z mikrodołkami z analizatora cobas z 480.
K. Aby przeglądać i akceptować poszczególne wyniki, postępuj zgodnie z instrukcją opisaną w Podręczniku użytkownika systemu
cobas® 4800.
05990335001-03PL
11
Doc Rev. 3.0
Interpretacja wyników
UWAGA: Cały proces walidacji testu i cyklu pracy jest przeprowadzany przez oprogramowanie cobas® 4800.
UWAGA: Ważny cykl pracy może obejmować zarówno ważne, jak i nieważne wyniki próbek.
W przypadku prawidłowego cyklu wyniki próbek interpretuje się w sposób przedstawiony w tabelach 1 i 2.
Tabela 1
Interpretacja wyników testu cobas® 4800 HPV na obecność DNA wirusa HPV
cobas® 4800 HPV
Raport wyniku i jego interpretacja
Test
Podtyp testu „HPV High Risk Panel”:
Dodatnie HPV wysokiego ryzyka
HR HPV POS
Wynik próbki jest dodatni dla DNA któregokolwiek lub kombinacji następujących typów wirusa HPV wysokiego
ryzyka: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.
Ujemne HPV wysokiego ryzyka*
HR HPV NEG
DNA HPV typu 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68 było niewykrywalne lub poniżej wcześniej
ustawionego progu.
Nieważne HPV wysokiego ryzyka
Invalid
Wyniki są nieważne. W celu otrzymania ważnego wyniku ponownie przeprowadź test oryginalnej próbki.
Brak wyników dla próbki
Instrukcje dotyczące przeglądania znaczników cyklu pracy i zalecanych czynności można znaleźć w Podręczniku
Failed
użytkownika systemu cobas® 4800. W celu otrzymania ważnego wyniku ponownie przeprowadź test oryginalnej
próbki.
Podtyp testu „HPV High Risk Panel Plus Genotyping”:
Other HR HPV POS, Dodatni inny typ HPV wysokiego ryzyka, dodatnie HPV16, dodatnie HPV18.
HPV16 POS,
Wynik próbki jest dodatni dla DNA HPV typu 16 i 18 oraz DNA któregokolwiek lub kombinacji następujących typów
HPV18 POS
wirusa HPV wysokiego ryzyka: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.
Dodatni inny typ HPV wysokiego ryzyka, dodatnie HPV16, ujemne HPV18*.
Other HR HPV POS, Wynik próbki jest dodatni dla DNA HPV typu 16 oraz DNA któregokolwiek lub kombinacji następujących typów
HPV16 POS,
wirusa HPV wysokiego ryzyka: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.
HPV18 NEG
DNA HPV typu 18 było niewykrywalne lub poniżej wcześniej ustawionego progu.
Dodatni inny typ HPV wysokiego ryzyka, ujemne HPV16*, dodatnie HPV18.
Other HR HPV POS, Wynik próbki jest dodatni dla DNA HPV typu 18 oraz DNA któregokolwiek lub kombinacji następujących typów wirusa
HPV16 NEG,
HPV wysokiego ryzyka: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.
HPV18 POS
DNA HPV typu 16 było niewykrywalne lub poniżej wcześniej ustawionego progu.
Dodatni inny typ HPV wysokiego ryzyka, ujemne HPV16*, ujemne HPV18*.
Other HR HPV POS, Wynik próbki jest dodatni dla DNA któregokolwiek lub kombinacji następujących typów wirusa HPV wysokiego
HPV16 NEG,
ryzyka: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.
HPV18 NEG
DNA HPV typu 16 i 18 było niewykrywalne lub poniżej wcześniej ustawionego progu.
Ujemny inny typ HPV wysokiego ryzyka*, dodatnie HPV16, dodatnie HPV18.
Other HR HPV NEG, DNA HPV typu 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68 było niewykrywalne lub poniżej wcześniej ustawionego
HPV16 POS,
progu.
HPV18 POS
W próbce wykryto obecność DNA HPV typu 16 i 18.
Ujemny inny typ HPV wysokiego ryzyka*, ujemne HPV16*, dodatnie HPV18.
Other HR HPV NEG, DNA HPV typu 16, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68 było niewykrywalne lub poniżej wcześniej
HPV16 NEG,
ustawionego progu.
HPV18 POS
W próbce wykryto obecność DNA HPV typu 18.
Ujemny inny typ HPV wysokiego ryzyka*, dodatnie HPV16, ujemne HPV18*.
Other HR HPV NEG, DNA HPV typu 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68 było niewykrywalne lub poniżej wcześniej
HPV16 POS,
ustawionego progu.
HPV18 NEG
W próbce wykryto obecność DNA HPV typu 16.
Other HR HPV NEG, Ujemny inny typ HPV wysokiego ryzyka*, ujemne HPV16*, ujemne HPV18*.
HPV16 NEG, HPV18 DNA HPV typu 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68 było niewykrywalne lub poniżej wcześniej
NEG
ustawionego progu.
Nieważne.
Invalid
Wyniki są nieważne. W celu otrzymania ważnych wyników ponownie przeprowadź test oryginalnej próbki.
Brak wyników dla próbki
Instrukcje dotyczące przeglądania znaczników cyklu pracy i zalecanych czynności można znaleźć w Podręczniku
Failed
użytkownika systemu cobas® 4800. W celu otrzymania ważnych wyników ponownie przeprowadź test oryginalnej
próbki.
* Wynik ujemny nie wyklucza obecności zakażenia wirusem HPV, gdyż wyniki zależne są od odpowiedniego pobrania próbki, nieobecności
inhibitorów oraz obecności ilości DNA wystarczającej do detekcji.
05990335001-03PL
12
Doc Rev. 3.0
Tabela 2
Interpretacja wyników testu cobas® 4800 HPV dla pacjentów z nieprawidłowościami cytologicznymi
Wyniki
Interpretacja
Other HR HPV* NEG, HPV16 NEG,
Bardzo małe prawdopodobieństwo dla ≥ CIN2.
HPV18 NEG
Other HR HPV* POS, HPV16 NEG,
Zwiększone prawdopodobieństwo, że ≥ CIN2 zostanie wykryte
HPV18 NEG
podczas kolposkopii.
Najwyższe prawdopodobieństwo, że ≥ CIN2 zostanie wykryte
HPV16 POS i/lub HPV18 POS
podczas kolposkopii32, 33.
UWAGA:
UWAGA:
UWAGA:
UWAGA:
UWAGA:
*Inne DNA HR HPV obejmują następujące typy: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.
Ujemne wyniki HPV nie powinny być powodem rezygnacji z kolposkopii u kobiet.
Oprócz wyników wyszczególnionych w tabeli powyżej możliwe są także wyniki nieważne dla jednej lub wielu
kombinacji. W razie otrzymania takich wyników, jak na przykład:
Other HR HPV NEG, HPV16 POS, HPV18 Invalid
Dodatnie i ujemne wyniki powinny być interpretowane w sposób przedstawiony w tabeli 1. W przypadku
przedstawionego przykładu wyniki dla HPV typu 18 są nieważne. W celu otrzymania ważnych wyników ponownie
przeprowadź test oryginalnej próbki.
Ujemne wyniki wskazują, że stężenia DNA HPV są niewykrywalne lub poniżej wcześniej ustawionego progu.
Dodatnie wyniki testu wskazują na obecność któregokolwiek lub więcej typów wirusa, jednak ponieważ
pacjentki są często współzakażone jego typami niskiego ryzyka, nie wyklucza to obecności typów niskiego
ryzyka u pacjentek z zakażeniami mieszanymi.
Wyniki tego testu powinny być interpretowane wyłącznie w połączeniu z informacjami pochodzącymi z oceny
klinicznej pacjentki i jej historii choroby.
KONTROLA JAKOŚCI
Każdy cykl pracy obejmuje jeden zestaw kontroli dodatnich i ujemnych testu cobas® 4800 HPV. W przypadku każdego cyklu pracy, aby przez
oprogramowanie cobas® 4800 zostały wyświetlone możliwe do odnotowania wyniki testu cobas® 4800 HPV tego cyklu pracy, muszą zostać
uzyskane ważne wyniki zarówno dla kontroli dodatniej, jak i ujemnej.
Kontrola dodatnia
Wynik kontroli HPV (+) musi być oznaczony jako „Valid”. Jeżeli wyniki kontroli HPV (+) są stale nieważne, skontaktuj się z miejscowym biurem
firmy Roche w celu uzyskania pomocy technicznej.
Kontrola ujemna
Wynik kontroli (–) musi być oznaczony jako „Valid”. Jeżeli wyniki kontroli (–) są stale nieważne, skontaktuj się z miejscowym biurem firmy
Roche w celu uzyskania pomocy technicznej.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI DOTYCZĄCE PROCEDURY
Jak w przypadku każdej procedury testowej, dla prawidłowego przeprowadzenia badania kluczowe znaczenie ma zachowanie zasad dobrej
praktyki laboratoryjnej. Z uwagi na wysoką czułość analityczną niniejszego testu należy przedsięwziąć wyjątkową ostrożność, używając
odczynników oraz mieszanin do amplifikacji, aby zapobiec kontaminacji.
OGRANICZENIA METODY
1. Test cobas® 4800 HPV wykrywa DNA typów 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68 wysokiego ryzyka. Test ten nie wykrywa
DNA wirusa HPV typów niskiego ryzyka (np. 6, 11, 42, 43, 44), gdyż takie testy nie mają wartości klinicznej34.
2. Test cobas® 4800 HPV do wykrywania wirusa brodawczaka ludzkiego typu 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 oraz 68 nie jest
zalecany do weryfikacji podejrzeń molestowania seksualnego.
3. Wykonywanie testu cobas® 4800 HPV nie zostało dostatecznie zbadane u pacjentów zaszczepionych przeciwko wirusowi HPV35.
4. Częstość występowania zakażenia wirusem HPV w populacji może wpływać na skuteczność testu. Dodatnie wartości predykcyjne ulegają
zmniejszeniu przy badaniu populacji z niską częstością zachorowań lub osób, u których nie występuje ryzyko zakażenia.
5. Zakażenie wirusem HPV nie jest wskaźnikiem wyniku cytologicznego HSIL ani CIN wysokiego stopnia, nie wskazuje również na rozwój
CIN2-3 lub raka. U większości kobiet zakażonych jednym lub większą ilością typów wirusa HPV wysokiego ryzyka nie rozwinie się CIN2-3
ani rak.
6. Ujemny wynik testu wirusa HPV wysokiego ryzyka nie wyklucza możliwości wystąpienia wyniku cytologicznego HSIL lub CIN2-3 albo raka.
7. Do badań należy używać tylko określonych rodzajów próbek. Test cobas® 4800 HPV został zatwierdzony wyłącznie do użycia z próbkami
z szyjki macicy pobranymi do pożywki do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR, płynnego podłoża PreservCyt i płynu konserwującego SurePath.
8. Detekcja HPV wysokiego ryzyka zależy od liczby jego kopii obecnych w próbce, na którą wpływać mogą metody pobierania próbek,
czynniki związane z pacjentem, faza zakażenia i obecność substancji wpływających na detekcję.
9. Test cobas® 4800 HPV obejmuje amplifikację i detekcję beta-globiny w celu zróżnicowania próbek HPV-ujemnych od tych, które nie
wykazują sygnału HPV z powodu niewystarczającej masy komórkowej w próbce. Wszystkie próbki HPV-ujemne muszą mieć ważny sygnał
beta-globiny w uprzednio zdefiniowanym zakresie, aby mogły zostać określone jako ważne ujemne przez system cobas® 4800.
10. Wiarygodność wyników zależy od odpowiedniego pobrania, transportu, przechowywania i przygotowania próbek. Należy postępować
zgodnie z procedurami opisanymi w tej ulotce dołączonej do opakowania, ulotce dołączonej do opakowania pożywki do przechowywania
pobranych komórek cobas® PCR oraz Podręczniku użytkownika systemu cobas® 4800.
05990335001-03PL
13
Doc Rev. 3.0
11. Dodanie do odczynnika Master Mix cobas® 4800 HPV enzymu AmpErase umożliwia selektywną amplifikację docelowego DNA; jednak
aby uniknąć skażenia odczynników, konieczne jest stosowanie dobrej praktyki laboratoryjnej i dokładne przestrzeganie procedur
wyszczególnionych w niniejszej instrukcji.
12. Tego produktu mogą używać wyłącznie osoby przeszkolone w zakresie technik PCR i używania systemu cobas® 4800.
13. Zatwierdzono użycie tego produktu tylko z aparatem cobas x 480 i analizatorem cobas z 480. Z tym produktem nie można stosować
żadnych innych urządzeń do przygotowania próbek ani systemów do PCR.
14. Z uwagi na różnice pomiędzy technologiami zaleca się, aby przed zmianą stosowanych metod użytkownik przeprowadził w laboratorium
badanie korelacji stosowanych metod w celu określenia różnic występujących pomiędzy nimi.
15. Nie oceniano również wpływu innych potencjalnych zmiennych, takich jak upławy, stosowanie tamponów, irygacje itd., ani zmiennych
związanych z pobieraniem wymazu.
16. Mutacje w obrębie wysoko konserwatywnych regionów DNA genomowego wirusa brodawczaka ludzkiego, z którym wiążą się primery i/lub
sondy używane w teście cobas® 4800 HPV, chociaż rzadkie, mogą spowodować niewykrycie obecności DNA wirusa.
17. Obecność inhibitorów PCR może prowadzić do uzyskiwania wyników fałszywie ujemnych lub nieważnych.
18. W próbkach z szyjki macicy są często obecne wykrywalne wzrokowo poziomy pełnej krwi, widoczne jako różowe lub jasnobrązowe
zabarwienie. Próbki te są normalnie przetwarzane w systemie cobas® 4800. Jeśli stężenia pełnej krwi przekraczają 2% (ciemnoczerwone
lub brązowe zabarwienie) w podłożu do przechowywania pobranych komórek cobas® PCR i w płynnym podłożu PreservCyt, istnieje
prawdopodobieństwo uzyskania wyniku fałszywie ujemnego.
19. Użycie dopochwowego środka nawilżającego Replens® powiązano z fałszywie ujemnymi wynikami próbek w płynie konserwującym
SurePath.
OCENA SKUTECZNOŚCI W BADANIACH NIEKLINICZNYCH
Porównanie z testem porównawczym HPV z oznaczeniem CE
Czułość kliniczna i specyficzność testu w wykrywaniu stanów chorobowych (≥ CIN2) została określona dla testu cobas® 4800 HPV oraz testu
porównawczego HPV z oznaczeniem CE w populacji kobiet w wieku co najmniej 21 lat z wynikami ASC-US badania cytologicznego
określonymi w rutynowym badaniu pod kątem raka szyjki macicy. Wszystkie testy przeprowadzono z użyciem próbek z szyjki macicy w płynnej
pożywce PreservCyt. Wszystkie z 855 pacjentek z początkowym wynikiem ASC-US badania cytologicznego poddano kolposkopii. Stan
zdrowia pacjentek został stwierdzony przez główny szereg badań patologicznych wykonanych na podstawie wyników próbek z biopsji uzyskanych
podczas zabiegu kolposkopii. Wyniki dla populacji z wynikami ASC-US podsumowano w tabeli 3.
Tabela 3*
Oceny czułości i specyficzności w wykrywaniu raka szyjki macicy (≥ CIN2 w głównym badaniu patologicznym)
testu cobas® 4800 HPV i testu porównawczego HPV z oznaczeniem CE w populacji z wynikami ASC-US
Parametr
Czułość
(N = 42)
Specyficzność
(N = 813)
Test cobas® 4800 HPV
Wartość szacunkowa (%) 95% CI
Test porównawczy HPV z oznaczeniem CE
Wartość szacunkowa (%)
95% CI
92,9
(81,0; 97,5)
83,3
(69,4; 91,7)
71,0
(67,8; 74,0)
72,0
(68,8; 74,9)
* Dane pacjentek przedstawione w tabeli 3 zostały przygotowane na podstawie danych części
populacji pacjentek biorącej udział w próbie klinicznej dotyczącej wirusa HPV przeprowadzonej
w Stanach Zjednoczonych (Evaluation of the cobas® 4800 HPV Test for the Detection of High-Grade
Cervical Disease in Women Undergoing Routine Cervical Cancer Screening).
Ryzyko obecności raka szyjki macicy (≥ CIN2) u kobiet w wieku ≥ 30 lat z wynikami badania cytologicznego w normie jest 7,9 razy wyższe
w przypadku otrzymania dodatniego wyniku testu cobas® 4800 HPV na obecność wysokiego HPV ryzyka niż w przypadku ujemnego wyniku
testu cobas® 4800 HPV. Oceny względnego ryzyka i ich 95% przedziały ufności przedstawiono w tabeli 4.
W przypadku kobiet w wieku 30 lat lub starszych test cobas® 4800 HPV można wykorzystać do oceny obecności lub braku obecności
genotypów 16 i 18 wirusa HPV. Ryzyko raka szyjki macicy (≥ CIN2) jest 14,4 razy wyższe w przypadku wyniku dodatniego dla HPV typu 16
i/lub HPV typu 18 testu cobas® 4800 HPV niż w przypadku wyniku ujemnego, a 2,4-krotnie wyższe w przypadku wyniku dodatniego dla HPV
typu 16 i/lub HPV typu 18 testu cobas® 4800 HPV w porównaniu z wynikiem dodatnim testu cobas® 4800 HPV dla 12 pozostałych typów
wysokiego ryzyka. W każdym przypadku, gdy dolna granica przedziału ufności 95% przekracza wartość 1, sugeruje to statystycznie wysokie
ryzyko rozwoju raka szyjki macicy w przypadku uzyskania dodatniego wyniku testu HPV.
05990335001-03PL
14
Doc Rev. 3.0
Tabela 4
Względne ryzyko raka szyjki macicy (≥ CIN2 w głównym badaniu patologicznym)
u kobiet w wieku ≥ 30 lat z wynikami badania cytologicznego w normie**
Oceny z zastosowaniem metody bootstrap
Wynik HPV
Ocena względnego ryzyka
95% CI LL 95% CI UL
Porównanie dodatniego i ujemnego
7,9
3,6
136,2
16+/18+ w por. do ujemnego
14,4
6,0
240,0
16+/18+ w por. do 12 innych HR+
2,4
1,4
3,8
**Dane pacjentek przedstawione w tabeli 4 przygotowano na podstawie danych części populacji
pacjentek biorącej udział w próbie klinicznej dotyczącej wirusa HPV przeprowadzonej
w Stanach Zjednoczonych (Evaluation of the cobas® 4800 HPV Test for the Detection of
High-Grade Cervical Disease in Women Undergoing Routine Cervical Cancer Screening).
Granica wykrywalności
Granica detekcji (LOD) genotypów wysokiego ryzyka HPV16, HPV18 i HPV31 wirusa HPV została określona dla testu cobas® 4800 HPV.
Granice detekcji (LOD) oszacowano z użyciem: 1) plazmidów HPV typu 31, HPV typu 16 i HPV typu 18 w tle poddanych pulowaniu HPVujemnych próbek pacjentów pobranych do płynnego podłoża PreservCyt i płynu konserwującego SurePath oraz 2) HPV linii komórkowych
dodatnich dla SiHa (HPV16) i HeLa (HPV18) w płynnym podłożu PreservCyt i płynie konserwującym SurePath, zawierających tło HPV-ujemnej
linii komórkowej (HCT-15). Plazmid oraz linie komórkowe zostały rozcieńczone do stężeń poniżej, powyżej oraz na przewidywanych
poziomach granicy detekcji (LOD). Dla każdego z 3 zestawów odczynników, zarówno w płynnym podłożu PreservCyt, jak i płynie
konserwującym SurePath, dla każdego plazmidu lub linii komórkowej przetestowano co najmniej 60 kopii. Granica detekcji (LOD) to granica
zawartości DNA wirusa HPV w próbce, której wyniki testowania są co najmniej w 95% dodatnie. Tabele 5 i 6 zawierają wyniki dla zestawu
odczynników, wykazującego najbardziej konserwatywną (najwyższą) granicę detekcji (LOD) w analizie – odpowiednio – płynnego podłoża
PreservCyt Solution i płynu konserwującego SurePath.
Tabela 5
Poziomy granicy detekcji dla HPV typu 31, 16, 18 oraz linii komórkowych SiHa (HPV16) i HeLa (HPV18)
w płynnym podłożu PreservCyt
Miano
95% przedział ufności
Liczba dodatnich/ % wyników
Typ HPV
(kopie lub
przetestowanych
dodatnich
Dolny
Górny
komórki/ml)
31
31
31
16
16
16
18
18
18
SiHa
(HPV 16)
SiHa
(HPV 16)
SiHa
(HPV 16)
HeLa
(HPV 18)
HeLa
(HPV 18)
HeLa
(HPV 18)
05990335001-03PL
600
300
150
1500
600
300
1500
600
300
60/60
59/61
49/60
60/60
60/60
55/61
60/60
60/60
42/61
100%
97%
82%
100%
100%
90%
100%
100%
69%
94%
89%
70%
94%
94%
80%
94%
94%
56%
100%
100%
90%
100%
100%
96%
100%
100%
80%
200
66/66
100%
95%
100%
100
64/65
98%
92%
100%
50
57/60
95%
86%
99%
80
60/60
100%
94%
100%
40
60/60
100%
94%
100%
20
56/60
93%
84%
98%
15
Doc Rev. 3.0
Tabela 6
Poziomy granicy detekcji dla HPV typu 31, 16, 18 oraz linii komórkowych SiHa (HPV16) i HeLa (HPV18)
w płynie konserwującym SurePath
Miano
Liczba dodatnich/ % wyników
Typ HPV
(kopie lub
przetestowanych
dodatnich
Dolny
Górny
komórki/ml)
31
31
31
16
16
16
18
18
18
SiHa
(HPV 16)
SiHa
(HPV 16)
SiHa
(HPV 16)
HeLa
(HPV 18)
HeLa
(HPV 18)
HeLa
(HPV 18)
300
150
75
600
300
150
1,500
600
300
60/60
57/60
46/60
60/60
60/60
51/60
60/60
60/60
56/60
100%
95%
77%
100%
100%
85%
100%
100%
93%
94%
86%
64%
94%
94%
73%
94%
94%
84%
100%
99%
87%
100%
100%
93%
100%
100%
98%
100
59/60
98%
91%
100%
50
57/60
95%
86%
99%
25
42/60
70%
57%
81%
80
60/60
100%
94%
100%
40
60/60
100%
94%
100%
20
59/60
98%
91%
100%
Weryfikacja reprezentatywności
Aby dokonać weryfikacji, czy test cobas® 4800 HPV jest zdolny do precyzyjnej detekcji wszystkich genotypów HPV wysokiego ryzyka,
określono granicę detekcji (LOD) (tabele 7 i 8) dla genotypów 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 i 68. Czułość testu cobas® 4800 HPV dla
genotypów 16, 18 i 31 HPV została określona w badaniu granicy detekcji, opisanym wcześniej w tej ulotce dołączonej do opakowania.
Ilościowo określone ilości plazmidu każdego z genotypów HPV zostały rozcieńczone do stężeń poniżej, powyżej oraz na przewidywanych
poziomach granicy detekcji (LOD), zarówno w płynnym podłożu PreservCyt, jak i w płynie konserwującym SurePath, zawierającym HPV
ujemne komórki HCT-15. Jedna seria odczynników została użyta do wytworzenia co najmniej 48 kopii dla każdego z poziomów dodatnich dla
każdej z pożywek. Dla każdego typu wirusa HPV zaraportowaną granicę (LOD) określono jako najniższe stężenie oznaczenia
z ≥ 95-procentowym odsetkiem trafień wyników dodatnich oraz z co najmniej 95-procentowym odsetkiem trafień wszystkich wyższych stężeń.
Tabela 7
Podsumowanie granicy detekcji genotypu wysokiego ryzyka
w badaniu reprezentatywności genotypu HPV cobas® 4800 HPV (płynne podłoże PreservCyt)
Liczba dodatnich/
Odsetek
Typ DNA HPV LOD (kopie/ml)
przetestowanych
trafień
Dolny
Górny
33
190
46/48
96%
86%
99%
35
480
48/48
100%
93%
100%
39
80
48/48
100%
93%
100%
45
190
46/48
96%
86%
99%
51
100
46/48
96%
86%
99%
52
2400
48/48
100%
93%
100%
56
1400
48/48
100%
93%
100%
58
480
47/48
98%
89%
100%
59
190
46/48
96%
86%
99%
66
640
48/48
100%
93%
100%
68
450
48/48
100%
93%
100%
05990335001-03PL
16
Doc Rev. 3.0
Tabela 8
Podsumowanie granicy detekcji genotypu wysokiego ryzyka
w badaniu reprezentatywności genotypu HPV cobas® 4800 HPV (płyn konserwujący SurePath)
Liczba dodatnich/
Odsetek
Typ DNA HPV LOD (kopie/ml)
przetestowanych
trafień
Dolny
Górny
33
480
47/49
96%
93%
100%
35
1400
48/48
100%
93%
100%
39
190
53/53
100%
93%
100%
45
480
49/49
100%
93%
100%
51
100
47/48
98%
89%
100%
52
7200
51/51
100%
93%
100%
56
1400
50/50
100%
93%
100%
58
1400
49/49
100%
93%
100%
59
480
46/48
96%
86%
99%
66
640
47/48
98%
89%
100%
68
1100
48/48
100%
93%
100%
Precyzja
Wewnętrzna precyzja została poddana kontroli z zastosowaniem członów panelu przygotowanego dla badania granicy detekcji, opisanego
w tej ulotce dołączonej do opakowania. W analizie precyzji wykorzystano poziomy równe i wyższe od granicy detekcji. Panele przygotowano
przez wprowadzenie emitujących impulsy plazmidów HPV31, HPV16 i HPV18 do tła HPV-ujemnych próbek pacjentów pobranych do płynnego
podłoża PreservCyt i płynu konserwującego SurePath.
Wartości odsetka trafień dodatnich dla członów paneli (płynne podłoże PreservCyt i płyn konserwujący SurePath) równych i powyżej granicy
detekcji (LOD) przedstawiono odpowiednio w tabelach 9 i 10. Wartości odsetka trafień były powyżej 95% dla wszystkich poziomów paneli
plazmidu. Zmienność wartości Ct dla testu poddano analizie oraz obliczono udział czynników losowych dotyczących zestawu odczynników,
systemów, pomiędzy cyklami pracy oraz wewnątrz cykli i podsumowano w tabeli 11 dla płynnego podłoża PreservCyt, a w tabeli 12 – dla płynu
konserwującego SurePath. Tabela 13 przedstawia wartość SD i %CV dla Ct w przypadku różnych czynników, od których zależy zmienność
płynnego podłoża PreservCyt. Tabela 14 przedstawia wartość Ct SD i %CV dla czynników, od których zależy zmienność płynu
konserwującego SurePath.
Tabela 9
Podsumowanie odsetka trafień dla badania precyzji testu cobas® 4800 HPV równego
lub większego od granicy detekcji (LOD) (w płynnym podłożu PreservCyt)
95% CI dla odsetka
Stężenie
Stężenie
Liczba
Liczba
Odsetek
trafień
Docel. typ
(kopie lub
panelu
testów wyn. dod.
trafień
komórki/ml)
Dolny
Górny
> LOD
600
186
186
100%
98%
100%
HPV31
= LOD
300
187
184
98%
95%
100%
> LOD
1500
186
186
100%
98%
100%
HPV16
= LOD
600
186
186
100%
98%
100%
> LOD
1500
186
186
100%
98%
100%
HPV18
= LOD
600
186
186
100%
98%
100%
Tabela 10
Podsumowanie odsetka trafień dla badania precyzji testu cobas® 4800 HPV równego
lub większego od granicy detekcji (LOD) (w płynie konserwującym SurePath)
95% CI dla odsetka
Stężenie
Liczba
Liczba
Odsetek
Stężenie
trafień
Docel. typ
(kopie lub
testów wyn. dod.
trafień
panelu
komórki/ml)
Dolny
Górny
> LOD
300
180
180
100%
98%
100%
HPV31
= LOD
150
180
175
97%
94%
99%
> LOD
600
180
180
100%
98%
100%
HPV16
= LOD
300
180
180
100%
98%
100%
> LOD
1500
180
180
100%
98%
100%
HPV18
= LOD
600
180
180
100%
98%
100%
05990335001-03PL
17
Doc Rev. 3.0
Tabela 11
Analiza czynników zmienności wartości Ct
dla poziomów panelu badania precyzji testu cobas® 4800 HPV, przygotowanych w płynnym podłożu PreservCyt
Czynniki zmienności/procent udziału
Stężenie
Średnia
Docel. typ
Liczba
Seria
panelu
piku
System Seria Losowe
Razem
odczynnika
0,038
0
0,111
0,079
0,228
> LOD
186
36,3
17%
0%
49%
35%
100%
HPV16
0,025
0
0,042
0,161
0,228
186
37,5
= LOD
11%
0%
18%
71%
100%
0,043
0
0,149
0,067
0,259
> LOD
186
36,6
16%
0%
58%
26%
100%
HPV18
0,027
0
0,050
0,184
0,261
= LOD
186
37,8
10%
0%
19%
71%
100%
0,003
0,002
0,105
0,187
0,297
> LOD
186
36,5
1%
1%
35%
63%
100%
HPV31
0,020
0
0,157
0,489
0,666
= LOD
187
37,6
3%
0%
24%
73%
100%
Tabela 12
Analiza czynników zmienności wartości Ct
dla poziomów panelu badania precyzji testu cobas® 4800 HPV, przygotowanych w płynie konserwującym SurePath
Czynniki zmienności/procent udziału
Stężenie
Średnia
Docel. typ
Liczba
Seria
panelu
piku
System Seria Losowe
Razem
odczynnika
0,014
0
0,039
0,157
0,209
> LOD
180
37,2
7%
0%
18%
75%
100%
HPV16
0
0
0,090
0,316
0,405
= LOD
180
38,2
0%
0%
22%
78%
100%
0,011
0
0,119
0,073
0,204
> LOD
180
36,3
5%
0%
58%
36%
100%
HPV18
0
0
0,148
0,219
0,366
= LOD
180
37,7
0%
0%
40%
60%
100%
0
0
0,099
0,393
0,493
> LOD
180
37,2
0%
0%
20%
80%
100%
HPV31
0,026
0,015
0,038
0,684
0,764
= LOD
180
38,1
3%
2%
5%
90%
100%
05990335001-03PL
18
Doc Rev. 3.0
Tabela 13
Analiza SD i %CV wartości Ct dla poziomów panelu badania precyzji testu cobas® 4800 HPV,
przygotowanych w płynnym podłożu PreservCyt
Czynniki SD/%CV
Stężenie
Średnia
Docel. typ
Liczba
Seria
panelu
piku
System
Seria
Losowe
Razem
odczynnika
0,19
0
0,33
0,28
0,48
> LOD
186
36,3
0,50%
0,00%
0,90%
0,80%
1,30%
HPV16
0,16
0
0,20
0,40
0,48
186
37,5
= LOD
0,40%
0,00%
0,50%
1,10%
1,30%
0,21
0
0,39
0,26
0,51
> LOD
186
36,6
0,60%
0,00%
1,10%
0,70%
1,40%
HPV18
0,16
0
0,22
0,43
0,51
= LOD
186
37,8
0,40%
0,00%
0,60%
1,10%
1,30%
0,05
0,05
0,32
0,43
0,54
> LOD
186
36,5
0,10%
0,10%
0,90%
1,20%
1,50%
HPV31
0,14
0
0,40
0,70
0,82
= LOD
187
37,6
0,40%
0,00%
1,10%
1,90%
2,20%
Tabela 14
Analiza SD i %CV wartości Ct dla poziomów panelu badania precyzji testu cobas® 4800 HPV,
przygotowanych w płynie konserwującym SurePath
Czynniki SD/%CV
Stężenie
Średnia
Docel. typ
Liczba
Seria
panelu
piku
System
Seria
Losowe
Razem
odczynnika
0,12
0
0,20
0,40
0,46
> LOD
180
37,2
0,30%
0,00%
0,50%
1,10%
1,20%
HPV16
0
0
0,30
0,56
0,64
= LOD
180
38,2
0,00%
0,00%
0,80%
1,50%
1,70%
0,11
0
0,34
0,27
0,45
> LOD
180
36,3
0,30%
0,00%
1,00%
0,70%
1,20%
HPV18
0
0
0,38
0,47
0,61
= LOD
180
37,7
0,00%
0,00%
1,00%
1,20%
1,60%
0
0,02
0,32
0,63
0,70
> LOD
180
37,2
0,00%
0,10%
0,80%
1,70%
1,90%
HPV31
0,16
0,12
0,20
0,83
0,87
= LOD
180
38,1
0,40%
0,30%
0,50%
2,20%
2,30%
05990335001-03PL
19
Doc Rev. 3.0
Swoistość analityczna
Panel bakterii, grzybów i wirusów, w tym takich, które można powszechnie znaleźć w drogach moczowo-płciowych kobiet, a także kilka
typów wirusa brodawczaka ludzkiego, sklasyfikowanych jako niskiego lub nieokreślonego ryzyka, poddano testowi cobas® 4800 HPV
w celu określenia jego specyficzności analitycznej. Organizmy wyszczególnione w tabeli 15 zostały wprowadzone w wysokich stężeniach
(≥ 1 x 103 jednostek/reakcję) do próbki HPV-ujemnej w płynnym podłożu PreservCyt oraz do próbki HPV-ujemnej w płynie konserwującym
PreservCyt, zawierającym plazmidowe DNA HPV31, HPV16 i HPV18 w ilości 3-krotnej wartości granicy detekcji (LOD). Wyniki wskazywały, że
obecność żadnego z tych organizmów nie zakłóciła detekcji plazmidowego DNA HPV31, HPV16 i HPV18 ani nie powodowała fałszywie
dodatniego wyniku w próbce HPV-ujemnej.
Tabela 15
Drobnoustroje badane pod kątem swoistości analitycznej
Achromobacter xerosis
Wirus Herpes simplex 1
Staphylococcus saprophyticus
Acinetobacter calcoaceticus
Wirus Herpes simplex 2
Streptococcus agalactiae
Acinetobacter lwoffi
Ludzki wirus upośledzenia odporności (HIV-1) Streptococcus anginosus
Acinetobacter sp. genospecies 3
Kingella kingae
Streptococcus pyogenes
Actinomyces israelii
Klebsiella pneumoniae ss ozaenae
Streptococcus sanguis
Adenowirus
Lactobacillus acidophilus
SV40
Aerococcus viridans
Lactobacillus crisptus
Treponema pallidum
Alcaligenes faecalis
Lactobacillus delbrueckii s. lactis
Trichomonas vaginalis
Bacillus thuringiensis
Lactobacillus jensenii
Ureaplasma urealyticum
Bacteroides fragilis
Lactobacillus vaginalis
Veillonella parvula
Bacteroides ureolyticus
Lactococcus lactis cremoris
Vibrio parahaemolyticus
Bifidobacterium longum
Legionella pneumophila
Weissella paramesenteroides
Bifidobacterium adolescentis
Micrococcus luteus
Yersinia enterocolitica
Bifidobacterium breve
Mobiluncus curtisii s. curtisii
HPV 6
Campylobacter jejuni
Moraxella osloensis
HPV 11
Candida albicans
Morganella morganii
HPV 26
Chlamydia trachomatis
Mycobacterium avium
HPV 40
Chromobacter violaceum
Mycobacterium smegmatis
HPV 42
Citrobacter braakii
Mycoplasma genitalium
HPV 54
Clostridium perfringens
Mycoplasma hominis
HPV 55B
Corynebacterium genitalium
Neisseria gonorrhoeae
HPV 61
Wirus cytomegalii
Neisseria meningitidis, Serogrupa A
HPV 62
Eikenella corrodens
Pasteurella multocida
HPV 64
Enterobacter cloacae
Pediococcus acidilactici
HPV 67
Enterococcus faecalis
Peptostreptococcus anaerobius
HPV 69
Enterococcus faecium
Propionibacterium acnes
HPV 70
Wirus Epstein-Barr
Proteus mirabilis
HPV 71
Erysipelothrix rhusiopathiae
Proteus vulgaris
HPV 72
Escherichia coli
Providencia stuartii
HPV 73
Ewingella americana
Pseudomonas aeruginosa
HPV 81
Fusobacterium nucleatum
Ruminococcus productus
HPV 82
Gemella morbillorum
Salmonella minnesota
HPV 83
Gardnerella vaginalis
Serratia marcescens
HPV 84
Haemophilus ducreyi
Staphylococcus aureus
HPV 89 (CP6108)
Wirus zapalenia wątroby typu B (HBV)
Staphylococcus epidermidis
05990335001-03PL
20
Doc Rev. 3.0
Substancje wpływające na wynik testu
Do oszacowania wpływu endogennych i egzogennych substancji wpływających na wynik testu, które potencjalnie mogą być obecne w próbkach
z szyjki macicy, użyto HPV-dodatnich i HPV-ujemnych próbek z szyjki macicy, a także próbek spreparowanych. Materiały badawcze
zastosowane w opisanych badaniach przedstawiono w tabeli 16. Stężenia badanych endogennych i egzogennych substancji odpowiadają
warunkom, jakie mogłyby panować podczas pobierania próbki.
Jako potencjalne substancje endogenne wpływające na wynik testu, znajdujące się w próbkach z szyjki macicy, przetestowano pełną krew,
jednojądrzaste krwinki krwi obwodowej (ang. Peripheral Blood Mononuclear Cells – PBMC) i śluz szyjkowy. Poziomy każdej z przetestowanych
potencjalnych substancji wpływających na wynik testu oraz obserwacje dotyczące tego badania opisano w tabeli 17. W przypadku komórek
PBMC i śluzu szyjkowego w badanych poziomach nie zaobserwowano wpływu na wyniki testu. Pełna krew obecna w widocznie wykrywalnych
ilościach do 2% nie wykazała wpływu na wyniki testu.
Tabela 16
Opisy próbki badania wpływu na wyniki testu
Rodzaj próbki
Opis
10 pojedynczych HPV-dodatnich próbek w płynnym podłożu PreservCyt
HPV-dodatnie próbki
podzielono na alikwoty w celu poddaniu ich testom z udziałem i bez
z szyjki macicy
udziału endogennych substancji wpływających na wynik testu
10 pojedynczych HPV-ujemnych próbek w płynnym podłożu PreservCyt
HPV-ujemne próbki
podzielono na alikwoty w celu poddaniu ich testom z udziałem i bez
z szyjki macicy
udziału endogennych substancji wpływających na wynik testu
HPV-dodatnie (kanał1) próbki w płynnym podłożu PreservCyt
Spreparowana HPV-dodatnia
rozcieńczono próbką HPV-ujemną do poziomu około 3 x granicy detekcji
próbka z szyjki macicy
(LOD). Plazmidy HPV typu 16 (kanał 2) i 18 (kanał 3) dodano następnie
w ilości ~ 3 x granica detekcji (LOD).
Pule płynnego podłoża PreservCyt Każdy z plazmidów typu 31, 16, 18 HPV rozcieńczono do ilości
i płynu konserwującego SurePath 3 x granica detekcji (LOD) w pulach próbki w podłożu PreservCyt i płynie
3 x granica detekcji (LOD)
koserwującym SurePath.
Tabela 17
Wyniki badania wpływu na wyniki testu dla substancji endogennych
Obserwowany wpływ na wynik
Badana substancja
Badane stężenia
testu
1%, 1,5%, 2%, 3% udział
Krew pełna
Powyżej 2%
objętościowy
PBMC
Śluz szyjkowy
104, 105, 106 komórek/ml
Śluz pochodzący ze standardowej
procedury oczyszczania ze śluzu
szyjkowego
Brak
Brak
Wszystkie 18 produktów do higieny intymnej i antykoncepcyjnych dla kobiet, sprzedawanych bez recepty (ang. over-the-counter – OTC),
przetestowano jako potencjalne substancje wpływające na wynik testu. Typy potencjalnych substancji wpływających na wynik testu
i obserwacje dotyczące tego badania w pulach płynnego podłoża PreservCyt i płynu konserwującego SurePath w ilościach 3 x granica detekcji
(LOD) przedstawiono w tabeli 18.
Tabela 18
Wyniki badania wpływu na wyniki testu dla substancji egzogennych
Opis substancji
Obserwowany wpływ na wynik
testu
Żele i pianki antykoncepcyjne
Brak
Dopochwowe preparaty nawilżające
Tak*
Irygator dopochwowy
Brak
Kremy przeciwgrzybicze zawierające: 1% klotrimazol, chlorowodorek
fenazopirydyny, 1% hydrokortyzon, 2% azotan mikonazolu, 6,5% maść
Brak
zawierająca tiokonazol, 20% benzokaina
*Dopochwowy środek nawilżający Replens® (miejscowy żel nawilżający) wywołał wyniki fałszywie
ujemne dla kopii w puli płynu konserwującego SurePath w ilości 3 x granica detekcji (LOD).
05990335001-03PL
21
Doc Rev. 3.0
Porównywalność matrycy
Wszystkie 1752 pacjentki zakwalifikowano do pobrania par próbek z szyjki macicy do płynnego podłoża PreservCyt i płynu konserwującego
SurePath. Każda z par próbek z szyjki macicy została poddana oznaczeniu za pomocą testu cobas® 4800 HPV w celu oszacowania
zgodności wyników. W tabeli 19 próbki o dodatnich wynikach dla któregokolwiek z trzech kanałów detekcji wirusa HPV traktowano jako
dodatnie, natomiast próbki o ujemnym wyniku dla wszystkich kanałów detekcji wirusa HPV traktowano jako ujemne. Dodatnia zgodność
pomiędzy próbkami w płynie konserwującym SurePath i płynnym podłożu PreservCyt wynosiła 96,4%; ujemna zgodność wynosiła 95,1%,
a ogólna zgodność – 95,4%.
Tabela 19
Podsumowanie wyników testu cobas® 4800 HPV dla próbek pobieranych jednocześnie do płynnego podłoża PreservCyt
i płynu konserwującego SurePath z użyciem wyniku testu „HPV High Risk Panel”
Płynne podłoże PreservCyt (20 ml)
Pary próbek z szyjki macicy
N = 1752
Dodatni
Ujemny
Razem
Dodatni
407
65
472
Płyn konserwujący SurePath
Ujemny
15
1265
1280
(10 ml)
Razem
422
1330
1752
Zgodność wyników dodatnich = 407/422 = 96,4% (95% CI 94,2%, 98,0%)
Zgodność wyników ujemnych = 1265/1330 = 95,1% (95% CI 93,8%, 96,2%)
Całkowita zgodność wyników = 1672/1752 = 95,4% (95% CI 94,3%, 96,4%)
Wyniki badania 1752 pacjentek zostały poddane także analizie polegającej na połączeniu wyników dla wszystkich trzech kanałów detekcji
wirusa HPV. W analizie tej (tabela 20) połączono wyniki dla każdego z 1–3 kanałów. Dodatnia zgodność pomiędzy próbkami w płynie
konserwującym SurePath i płynnym podłożu PreservCyt wynosiła 96,9%; ujemna zgodność wynosiła 98,0%, a ogólna zgodność – 97,9%.
Tabela 20
Podsumowanie wyników testu cobas® 4800 HPV dla próbek pobieranych jednocześnie do płynnego podłoża PreservCyt
i płynu konserwującego SurePath z użyciem wyniku testu „HPV High Risk Panel Plus Genotyping”
Płynne podłoże PreservCyt (20 ml)
Pary próbek z szyjki macicy
N = 5256
Dodatni
Ujemny
Razem
Dodatni
492
94
586
Płyn konserwujący
SurePath
Ujemny
16
4654
4670
(10 ml)
Razem
508
4748
5256
Zgodność wyników dodatnich = 492/508 = 96,9% (95% CI 94,9%, 98,2%)
Zgodność wyników ujemnych = 4654/4748 = 98,0% (95% CI 97,6%, 98,4%)
Całkowita zgodność wyników = 5146/5256 = 97,9% (95% CI 97,5%, 98,3%)
05990335001-03PL
22
Doc Rev. 3.0
PIŚMIENNICTWO
1. Burd, Eileen M. 2003. Human Papillomavirus and Cervical Cancer. Clinical Microbiology Reviews. 16:1-17.
2. zur Hausen, H. 2002. Papillomaviruses and Cancer: From Basic Studies to Clinical Application. Nat Rev Cancer. 2(5):342-50.
3. Walboomers, Jan M.M., Jacobs, Marcel V., Manos, M.M., et al. 1999. Human Papillomavirus is a Necessary Cause of Invasive Cervical
Cancer Worldwide. Journal of Pathology. 189:12-19.
4. Bernard HU. Review: The clinical importance of the nomenclature, evolution and taxonomy of human papillomaviruses. J Clin Virol. 2005; 32S, S1-6.
5. Molijn A, Kleter B, Quint W, van Doorn, L. Review: Molecular diagnosis of human papillomavirus (HPV) infections. J Clin Virol. 2005; 32S:S43-51.
6. zur Hausen H. Roots and perspectives of contemporary papillomavirus research. J Cancer Res Clin Oncol. 1996; 122:3-13.
7. de Villiers EM, Fauguet C, Broker TR, Bernard HU, zur Hausen H. Classification of papillomaviruses. Virology. 2004; 324:17-27.
8. Franco EL, Rohan TE, Villa LL. Epidemiologic evidence and human papillomavirus infection as a necessary cause of cervical cancer. J Natl
Cancer Inst. 1999; 91:506-511.
9. Lorincz AT, Reid R, Jenson AB, et al. Human papillomavirus infection of the cervix: relative risk associations of 15 common anogenital
types. Obstet Gynecol. 1992; 79:328-37.
10. Bosch, F.X., Manos, M.M., Munoz, N., et al. 1995. International Biological Study on Cervical Cancer (IBSCC) Study Group. Prevalence of
Human Papillomavirus in Cervical Cancer: a Worldwide Perspective. Journal of the National Cancer Institute, Vol. 87, No. 11:796-802.
11. Bosch, F.X., A. Lorincz, N. Muñoz, C.J.L.M. Meijer, K.V. Shah (2002) “The causal relation between human papillomavirus and cervical
cancer” J Clin Path 55:244-265.
12. Muñoz N, F.X. Bosch, S. de Sanjosé, R. Herrero, X. Castellsagué, K.V. Shah, P.J.F. Snijders, and Chris J.L.M. Meijer, for the International
Agency for Research on Cancer Multicenter Cervical Cancer Study Group. (2003) “Epidemiologic Classification of Human Papillomavirus
Types Associated with Cervical Cancer” N Engl J Med 348(6):518-527.
13. Clifford GM, Smith JS, Plummer M, Muñoz N, Franceschi S. Human papillomavirus types in invasive cervical cancer worldwide: a metaanalysis. Br J Cancer. 2003; 88:63-73.
14. Koutsky, L. 1997. Epidemiology of genital human papillomavirus infection. American Journal of Medicine. 102(5A):3-8.
15. Winer RL, Kiviat NB, Hughes JP, et al. Development and duration of human papillomavirus lesions, after initial infection. J Infect Dis. 2005;191:731-738.
16. Moscicki, A, Schiffman M, Kjaer S, Villa L. Updating the natural history of HPV and anogenital cancer. Vaccine 2006; 24(S3); 42-51.
17. Moscicki AB, Ellenberg JH, Farhat S, Xu J. Persistence of human papillomavirus infection in HIV-infected and –uninfected adolescent girls:
risk factors and differences, by phylogenetic type. J Infect Dis. 2004 Jul 1;190(1):37-45.
18. Palmer Castle PE, Schiffman M, Herrero R, Hildesheim A, Rodriguez AC, Bratti MC, Sherman ME, Wacholder S, Tarone R, Burk RD. A
prospective study of age trends in cervical human papillomavirus acquisition and persistence in Guanacaste, Costa Rica. J Infect Dis. 2005
Jun 1;191(11):1808-16.
19. Zielinski GD, Snijders PJF, Rozendaal l, et al. High-risk HPV testing in women with borderline and mild dyskaryosis; long term follow-up
data and clinical relevance. J Pathol 2001;195:300-306.
20. Holowaty P, Miller AB, Rohan T, To T. Natural history of dysplasia of the uterine cervix, J Natl Cancer Inst 1999; 91:252-58.
21. Nobbenhuis MA, Helmerhorst TJ, van den Brule AJ, Rozendaal L, Voorhorst FJ, Bezemer PD, Verheijen RH, Meijer CJ. Cytological regression
and clearance of high-risk human papillomavirus in women with an abnormal cervical smear. Lancet. 2001;358(9295):1782-1783.
22. Myers, T.W. and Gelfand, D.H. 1991. Reverse transcription and DNA amplification by a Thermus thermophilus DNA polymerase.
Biochemistry. 30:7661-7666.
23. Davies, P., Kornegay, J., Iftner, T. 2001. Current methods of testing for human papillomavirus. Best Practice and Research Clinical
Obstetrics and Gynaecology. Vol. 15, No. 5:677-700.
24. Birch, D.E., et al. 1996. The use of a thermally activated DNA polymerase PCR gives improved specificity, sensitivity and product yield without
additives or extra process steps. Nature. Vol 381, No 6581:445-446.
25. Meng, Q., et al. 2001. Automated Multiplex Assay System for Simultaneous Detection of Hepatitis B Virus DNA, Hepatitis C Virus RNA, and
Human Immunodeficiency Virus Type 1 RNA. J Clin Microbiol. Vol 39, No 8:2937-2945.
26. Longo, M.C., Berninger, M.S. and Hartley, J.L. 1990. Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination in polymerase
chain reactions. Gene. 93:125-128.
27. Higuchi, R., Dollinger, G., Walsh, P.S., and Griffith, R. 1992. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences.
Bio/Technology 10:413-417.
28. Heid, C.A., Stevens, J., Livak, J.K., and Williams, P.M. 1996. Real time quantitative PCR. Genome Research 6:986-994.
29. Richmond, J.Y. and McKinney, R.W. eds. 1999. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication Number (CDC) 93-8395.
30. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections. Approved
Guideline-Third Edition. CLSI Document M29-A3 Villanova, PA:CLSI, 2005.
31. International Air Transport Association. Dangerous Goods Regulations, 48th Edition. 2007.
32. Wheeler, C.M., Hunt, W.C., Joste, N.E., Key, C.R., Quint, W.G.V. and Castle, P.E. 2009. Human Papillomavirus Genotype Distributions:
Implications for Vaccination and Cancer Screening in the United States. J Natl Cancer Inst. 101:475-487.
33. Khan, M.J., Castle, P.E., Lorincz, A.T., Wacholder, S., Sherman, M., Scott, D.R., Rush, B.B., Glass, A.G. and Schiffman, M. 2005. The
Elevated 10-Year Risk of Cervical Precancer and Cancer in Women With Human Papillomavirus (HPV) Type 16 and 18 and the Possible
Utility of Type-Specific HPV Testing in Clinical Practice. J Natl Cancer Inst. 97:1072-1079.
34. Wright TC, Jr., Massad LS, Dunton CJ, Spitzer M, Wilkinson EJ, and Solomon D. 2007. 2006 Consensus Guidelines for the Management
of Women with Abnormal Cervical Cancer Screening Tests, Am J Obstet Gynecol 197 (4); 346-355.
35. Saslow D, Runowicz CD, Solomon D, Moscicki A-B, Smith RA, Eyre HJ, Cohen C. 2002, American Cancer Society Guideline for the Early
Detection of Cervical Neoplasia and Cancer. CA Can Jour Clin 53: 342-362.
05990335001-03PL
23
Doc Rev. 3.0
Informacje dotyczące wersji dokumentu
Doc Rev. 3.0
12/2011
Wprowadzono zmiany w rozdziale POBIERANIE, TRANSPORT I PRZECHOWYWANIE PRÓBEK,
aby usunąć wymóg schładzania próbek SurePath przez 24 godziny od momentu pobrania,
a informacje dotyczące stabilności próbek SurePath zmieniono na stabilność przez 6 miesięcy
w temperaturze 2–8°C oraz 14 dni w temperaturze 15–30°C.
W razie jakichkolwiek pytań prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche.
Roche Molecular Systems, Inc., Branchburg, NJ 08876 USA
Członek Grupy Roche
Distributed by
Roche Diagnostics (Schweiz) AG
Industriestrasse 7
6343 Rotkreuz, Switzerland
Roche Diagnostics
2, Avenue du Vercors
38240 Meylan, France
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Straße 116
68305 Mannheim, Germany
Distributore in Italia:
Roche Diagnostics S.p.A.
Viale G. B. Stucchi 110
20052 Monza, Milano, Italy
Roche Diagnostics, SL
Avda. Generalitat, 171-173
E-08174 Sant Cugat del Vallès
Barcelona, Spain
Roche Diagnostics
201, boulevard Armand-Frappier
H7V 4A2 Laval, Québec, Canada
(For Technical Assistance call:
Pour toute assistance technique,
appeler le: 1-877 273 3433)
Distribuidor em Portugal:
Roche Sistemas de Diagnósticos Lda.
Estrada Nacional, 249-1
2720-413 Amadora, Portugal
Roche Diagnostica Brasil Ltda.
Av. Engenheiro Billings, 1729
Jaguaré, Building 10
05321-010 São Paulo, SP Brazil
ROCHE, COBAS, COBAS X, COBAS Z, EAGLEZ05 i AMPERASE są znakami towarowymi firmy Roche.
Technologia zapobiegania zanieczyszczeniu preparatu enzymu AmpErase resztkami jest chroniona patentem USA nr 5 035 996 oraz jego
zagranicznymi odpowiednikami, będącymi w posiadaniu firmy Invitrogen Corporation; udostępniono na zasadzie licencji firmie Roche Molecular
Systems, Inc.
EPPENDORF MULTIPETTE i EPPENDORF COMBITIP są znakami towarowymi Eppendorf-Netheler-Hinz GmbH, Hamburg, Niemcy.
PRESERVCYT jest znakiem towarowym firmy Cytyc Corporation.
REPLENS jest znakiem towarowym firmy Lil’ Drug Store Products, Inc.
SUREPATH jest znakiem towarowym firmy TriPath Imaging, Inc.
Barwniki cyjaninowe zawarte w produkcie są objęte prawami patentowymi firmy GE Healthcare Bio-Sciences Corp. oraz Carnegie Mellon
University i udostępniane są firmie Roche na zasadzie licencji w celu ich włączenia do składników zestawów badawczych oraz zestawów do
diagnostyki in vitro. Wszelkie wykorzystanie takich zestawów do celów innych niż badawcze lub związane z diagnostyką in vitro wymaga
uzyskania podlicencji od firmy GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, New Jersey, USA, oraz Carnegie Mellon University, Pittsburgh,
Pensylwania, USA.
Copyright 2011 Roche Molecular Systems, Inc. Wszystkie prawa zastrzeżone.
12/2011
Doc Rev. 3.0
05990335001-03PL
24
(05641225001-05ENGL)
05990335001-03
Doc Rev. 3.0

cobas 4800 HPV Test

Transkrypt

Podobne dokumenty

Zakładka dla uczniów

skierowanie zewnętrzne na test-hpv

deklaracja przystąpienia do szczepienia przeciwko wirusowi hpv

Centralny Szpital Kliniczny MSWiA Nowa szczepionka przeciwko HPV

FORMULARZ ZGODY NA BEZPŁATNE SZCZEPIENIA p/HPV

Zakażenie HPV - wirusy ryzyka nowotworowego! Jeden z rodzajów

Ouiz – analiza zbiorcza

Informacja prasowa