F48 Microgen Listeria lateks

F48 MICROGEN® Listeria
WSTĘP
Pierwotnym źródłem zakaŜenia w zakaŜeniach sporadycznych i epidemiach powodowanych przez Listeria jest
zanieczyszczona Ŝywność, zwłaszcza produkty nabiałowe. Z powodu związku Listeria z zakaŜeniami
pokarmowymi, szerokiego rozpowszechnienia tych bakterii w środowisku oraz nosicielstwa jelitowego u wielu
gatunków zwierzęcych, szybkie wykrywanie gatunków z rodzaju Listeria jest waŜne w mikrobiologicznych
badaniach jakościowych Ŝywności.
PRZEZNACZENIE TESTU
MICROGEN® Listeria jest szybkim testem aglutynacji lateksowej do potwierdzenia identyfikacji
prawdopodobnych kolonii Listeria spp. ze stałych podłoŜy wybiórczych. Test moŜna uŜywać w połączeniu
z testami biochemicznymi do pełnej identyfikacji Listeria spp.
ZASADA TESTU
Do pokrywania cząsteczek lateksu uŜywa się poliwalentne surowice przeciwko oczyszczonym białkom
rzęskowym Listeria monocytogenes i Listeria grayi. Po zmieszaniu z zawiesiną zawierającą Listeria species,
cząsteczki lateksu szybko aglutynują, tworząc łatwo dostrzegalne grudki. MICROGEN™ Listeria wykrywa
wszystkie ruchliwe szczepy Listeria sp. do limitu czułości testu.
SKŁAD TESTU
Dostarczone materiały:
F48a Odczynnik lateksowy Listeria; cząsteczki lateksowe pokryte króliczą surowicą przeciwko antygenom
rzęskowym Listeria. Konserwowane 0,02% Thiomersalem.
F48b Kontrola dodatnia konserwowana 0,02% Thiomersalem.
F40
0,85% izotoniczny roztwór soli utrwalony 0,1% azydkiem sodowym.
Jednorazowe kartoniki
Jednorazowe patyczki do mieszania
DODATKOWE MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIE WCHODZĄCE W SKŁAD ZESTAWU
• ezy bakteriologiczne
ŚRODKI OSTROśNOŚCI
Środki bezpieczeństwa:
1. Izotoniczny roztwór soli dostarczony w zestawie zawiera 0,099% azydek sodowy, który słuŜy jako
środek konserwujący. Azydek sodowy moŜe reagować z ołowianą lub miedzianą instalacją
kanalizacyjną, tworząc potencjalnie wybuchowe azydki metali. Utylizować zalewając duŜą objętością
wody, aby zapobiec osadzaniu się azydków.
2. Kontrola dodatnia została inaktywowana w czasie procesu wytwarzania. Jednak powinno się ją
traktować jak potencjalnie zakaźną.
3. NaleŜy podjąć odpowiednie środki ostroŜności podczas pracy i utylizacji potencjalnych patogenów.
PRZECHOWYWANIE
®
MICROGEN Listeria powinien być przechowywany w temp. 2 - 8°C. Nie zamraŜać. Zestawu nie naleŜy
uŜywać po upływie daty waŜności wydrukowanej na naklejce na kartonie.
ŚRODKI PROCEDURALNE
1. MICROGEN® Listeria powinien być uŜywany zgodnie z dołączoną instrukcją.
2. Nie rozcieńczać Ŝadnego odczynnika z zestawu.
3. Nie mieszać odczynników z róŜnych partii i zestawów.
4. Nie uŜywać przeterminowanych zestawów.
5. Nie zamraŜać Ŝadnych odczynników z zestawu.
6. Upewnić się, Ŝe poświęcono odpowiednią uwagę rozdziałowi „Kontrola jakości” z tej instrukcji.
F48 MICROGEN® Listeria
Strona 1
7. Zachować ostroŜność podczas zapisywania wyników aglutynacji. Reakcje, które są zbyt silne lub
„włókniste” mogą nie być prawdziwą aglutynacją.
METODA UśYCIA
®
Przed uŜyciem doprowadzić zestaw odczynników MICROGEN Listeria do temperatury pokojowej.
®
Kolonie pobrane z wybiórczych podłoŜy stałych moŜna uŜywać do testu MICROGEN Listeria oraz do
®
biochemicznej analizy MICROGEN Listeria (nr kat. MID-67).
KONTROLA JAKOŚCI
Za kaŜdym razem, kiedy uŜywa się zestaw, naleŜy wykonać następujące kontrole, aby upewnić się, Ŝe test jest
zdatny do uŜycia:
1. Kontrola odczynnika
Dodać 1 kroplę odczynnika lateksowego dla Listeria do 1 kropli roztworu soli na tym samym polu na
karcie reakcyjnej, zamieszać i obserwować przez 1 minutę czy zachodzi aglutynacja. Nie powinna
zajść aglutynacja. JeŜeli ta kontrola ją wykaŜe, to albo odczynnik, albo sól jest prawdopodobnie
zanieczyszczona i naleŜy ją wyrzucić.
2. Kontrola dodatnia
Umieścić 1 kroplę kontroli dodatniej w polu na karcie reakcyjnej. Umieścić 1 kroplę odczynnika
lateksowego na tym samym polu obok kontroli dodatniej. NIE POZWOLIĆ, śEBY
ZAKRAPLACZ DOTKNĄŁ KONTROLĘ DODATNIĄ. Zmieszać lateks i kontrolę dodatnią
czystym patyczkiem, rozprowadzając zawiesinę na całej powierzchni pola reakcyjnego na karcie.
Delikatnie kołysać kartę i badać na oznaki aglutynacji w ciągu maksymalnie 2 minut. Łatwo
dostrzegalna aglutynacja z odczynnikiem lateksowym wskazuje na jego normalne funkcjonowanie.
PROCEDURA BADAWCZA
Metoda identyfikacji ze stałych podłoŜy wybiórczych.
1. PołoŜyć jednorazową kartę reakcyjną na stole.
2. Nanieść 1 kroplę roztworu soli na pole na karcie.
3. UŜywając dostarczonego patyczka lub ezę bakteriologiczną, zawiesić podejrzane kolonie w kropli soli,
aby powstała gęsta, jednorodna zawiesina. Zawiesiny powinno się robić z kolonii o morfologii
przypominającej Listeria sp.
4. Obserwować, czy w zawiesinie zachodzi aglutynacja lub wykłaczanie, które mogą wskazywać na
autoaglutynację. JeŜeli zawiesina pozostaje gładka, przejść do etapu 5 (zob. ograniczenia uŜycia,
punkt 1).
5. Delikatnie wymieszać odczynnik lateksowy na Listeria przez odwracanie buteleczki kilka razy.
Umieścić 1 kroplę odczynnika w tym samym polu reakcyjnym obok zawiesiny. NIE POZWOLIĆ,
ABY ZAKRAPLACZ DOTKNĄŁ ZAWIESINĘ BAKTERYJNĄ. Wymieszać odczynnik
lateksowy i zawiesinę bakteryjną przy pomocy dostarczonego patyczka na całej powierzchni
zaznaczonego pola reakcyjnego i delikatnie kołysać.
Po wymieszaniu wyrzucić patyczek do odpowiedniego środka dezynfekcyjnego.
6. Sprawdzić, cz zachodzi aglutynacja w ciągu maksymalnie 2 minut.
7. Po odczytaniu wyrzucić zuŜyte karty do odpowiedniego środka dezynfekcyjnego.
INTERPRETACJA WYNIKÓW
Aglutynacja po 2 minutach jest wynikiem dodatnim i wskazuje na obecność Listeria sp. w próbce. Brak
aglutynacji wskazuje, Ŝe Listeria sp. jest nieobecna w badanej hodowli lub jest obecna na poziomie poniŜej
czułości testu.
F48 MICROGEN® Listeria
Strona 2
OGRANICZENIA TESTU
1. Wiadomo, Ŝe szorstkie szczepy Listeria spp. powodują niespecyficzną aglutynację w soli i dlatego nie
mogą być badane przy pomocy MICROGEN® Listeria.
2. Hodowle rosnące w temperaturze powyŜej 30°C mogą nie wytwarzać rzęsek i z tego powodu nie
®
dawać dodatnich wyników z MICROGEN Listeria
3. Przy pomocy MICROGEN Listeria nie moŜna wykrywać nieruchliwych szczepów.
4. Pewne gatunki Staphylococcus spp. i gram-dodatnich laseczek mogą dawać fałszywie dodatnie reakcje.
®
5. Identyfikacja przy pomocy MICROGEN Listeria jest wstępna i wszystkie wyniki dodatnie powinny
być potwierdzone metodami biochemicznymi (np. uŜywając MID-67 Listeria Identification System).
CHARAKTERYSTYKA TESTU
MICROGEN™ Listeria zbadano na koloniach z panelu 105 dobrze scharakteryzowanych szczepów Listeria
spp. Potwierdziła się identyfikacja wszystkich tych kolonii.
Gatunek
(potwierdzony testem biochemicznym)
L. monocytogenes
L. innocua
L. seeligeri
L. welshimeri
l. ivanovii
L. grayi
Razem
MICROGEN
Listeria Latex
dodatnie
59
22
9
7
4
4
105
MICROGEN
Listeria Latex
ujemne
0
0
0
0
0
0
0
LITERATURA
1. WHO Working Group. 1988. Foodborne listeriosis. Bull WHO 66: 241-428.
2. Brackett R.E. 1988. Presence and persistence of Listeria monocytogenes in food and water. Food
Technal 42: 162
3. Kerr K.G., Dealler S.F. and Lacy R.W. 1988. Listeria in cook-chill food. Lancet 2; 37-38.
4. Billie J. and Doyle M.P. Listeria and Erysypelothrix . Chapt. 32 on Manual of Clinical Microbiology,
5th Edition 1991. Eds. Albert Ballows, William J. Hausler, Kenneth L., Herman D. Isenberg, H. Jean
Shadomy. American Society for Microbiology.
INNE SUGEROWANE LEKTURY
1. Gellin B.G. i Broome C.V. 1989. Listeriosis. JAMA 216: 1313-1320.
2. McLaughlin J. 1988. The identification of Listeria species. Public Health Laboratory Service.
DMRQC Newsletter 3: 1-3.
GRASO Biotech
Krąg 4A. 83-200 Starogard Gdański
Dział Obsługi Klienta: 058 562 30 21, 058 562 56 61 do 64 wew. 30,
[email protected]; www.podloza.pl, www.grasobiotech.pl
F48 MICROGEN® Listeria
Strona 3