AE1/AE3/PCK26

ZASADY POSTĘPOWANIA
Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) Primary Antibody
Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) rozpoznaje większość cytokeratyn kwasowych i
wszystkie cytokeratyny zasadowe, co czyni z niego użyteczny barwnik niemal wszystkich
tkanek nabłonkowych i ich nowotworów. Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) zawiera
koktajl mysich przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko epitopowi
występującemu w keratynach ludzkiego naskórka zgodnie z doniesieniami WoodcockMitchell, et al.9 Ten koktajl przeciwciał reaguje z cytokeratynami o masie cząsteczkowej
56,5 kD, 50 kD, 50’ kD, 48 kD i 40 kD należącymi do podrodziny kwasowej oraz z
cytokeratynami o masie 65–67 kD, 64 kD, 59 kD, 58 kD, 56 kD i 52 kD należącymi do
podrodziny zasadowej.9,10,11,12,13 Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) wiąże się do
keratyn w utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie tkanek oraz wykazuje
cytoplazmatyczny wzorzec barwienia. Ten koktajl przeciwciał można wizualizować przy
pomocy produktu ultraView Universal DAB Detection Kit (nr kat. 760-500/05269806001).
Dalsze informacje zawiera dokumentacja ultraView Universal DAB Detection Kit
760-2595
05267145001
50
760-2135
05266840001
250
DOSTARCZANY ODCZYNNIK
Preparat Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) (760-2595) zawiera odczynnik w ilości
wystarczającej do przeprowadzenia 50 badań.
Jeden dozownik Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) o pojemności 5 ml (760-2595)
Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26)
zawiera około 231,5 μg mysich przeciwciał monoklonalnych.
Primary Antibody (Anti-Pan Keratin
Preparat Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) (760-2135) zawiera odczynnik w ilości
(AE1/AE3/PCK26) to koktajl
wystarczającej do przeprowadzenia 250 badań.
przeciwciał skierowanych przeciwko
keratynom obecnym w komórkach
Jeden dozownik Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) o pojemności 25 ml (760-2135)
nabłonka prostego i złożonego.
zawiera około 1,6 mg mysich przeciwciał monoklonalnych.
Produkt ten wykazuje
Przeciwciało jest rozcieńczone w soli fizjologicznej z buforem fosforanowym, białkiem
cytoplazmatyczny wzór barwienia i
nośnikowym i 0,05% ProClin 300, konserwantem.
może być stosowany do wspomagania
Rysunek 1. Tkanka prawidłowej wątroby
Całkowite stężenie białek w odczynniku wynosi około 3 mg/ml. Stężenie swoistych
identyfikacji prawidłowych i
barwiona produktem Anti-Pan Keratin
przeciwciał wynosi około 46,3 μg/ml.
nieprawidłowych komórek nabłonka
(AE1/AE3/PCK26)
Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) to koktajl mysich przeciwciał monoklonalnych;
oraz do wspomagania oznaczania
składniki są wytwarzane jako materiał z płynu wysiękowego (PCK26) lub oczyszczone
rodowodu nowotworu. Przeciwciało jest przeznaczone do jakościowego barwienia
przeciwciało (AE1 oraz AE3).
skrawków tkankowych utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie.
Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego patologa w połączeniu z Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki firmy VENTANA dołączonej do
opakowania, aby uzyskać szczegółowy opis następujących kwestii: (1) Zasady
badaniem histologicznym, odnośnymi danymi klinicznymi i właściwymi badaniami
przeprowadzania procedury, (2) Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone do
kontrolnymi.
zestawu, (3) Pobieranie próbek i przygotowanie do analizy, (4) Procedury kontroli jakości,
To przeciwciało przeznaczone jest do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
(5) Rozwiązywanie problemów, (6) Interpretacja wyników i (7) Ogólne ograniczenia.
PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA
MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIEDOSTARCZANE
Cytokeratyny są łańcuchami polipeptydowymi, które tworzą białka strukturalne zwane
Nie dostarczono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji VENTANA,
filamentami pośrednimi, z których zbudowany jest cytoszkielet komórek nabłonkowych.
oraz elementów pomocniczych, takich jak dodatnie i ujemne kontrolne preparaty
Cytokeratyny dzielą się na podrodziny kwaśne i zasadowe. Występują one parami w
mikroskopowe tkanek.
tkankach nabłonkowych, przy czym skład tych par zależy od typu komórek nabłonkowych,
Nie wszystkie produkty przedstawione w ulotce dołączonej do opakowania są dostępne
etapu zróżnicowania, środowiska wzrostu komórek oraz zaawansowania choroby.
we wszystkich rejonach geograficznych. Należy skonsultować się z lokalnym
Dziewiętnaście różnych postaci cytokeratyn opisuje się przy użyciu ich masy
przedstawicielem odpowiedzialnym za wsparcie techniczne.
cząsteczkowej i pH punktu izoelektrycznego, zarówno w liniach komórkowych nabłonka
prawidłowego, jak i złośliwego.1,2,3 Ekspresję cytokeratyn o niskiej masie cząsteczkowej
PRZECHOWYWANIE
(40–54 kD) obserwuje się często w jednowarstwowym nabłonku walcowatym, natomiast
Po otrzymaniu i gdy preparat nie jest używany, należy go przechowywać w temperaturze
ekspresję cytokeratyn o dużej masie cząsteczkowej (48–67 kD) – w nabłonku
2–8°C. Nie zamrażać.
4
wielowarstwowym. Przeciwciała monoklonalne skierowane przeciwko różnym
W celu zapewnienia właściwego dozowania odczynnika i stabilności przeciwciał, po
cytokeratynom mogą być przydatne do ustalania pochodzenia słabo zróżnicowanych
każdym użyciu należy założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce
nowotworów.5 Ponieważ peptydy cytokeratyn są skojarzone z komórkami nabłonkowymi,
w pozycji pionowej.
stanowią istotne klinicznie markery ułatwiające rozróżnianie raków od nowotworów
złośliwych pochodzenia pozanabłonkowego, takich jak chłoniaki i mięsaki.6,7 Identyfikacja Na każdym dozowniku przeciwciała podana jest data ważności. Prawidłowo
przechowywany odczynnik zachowuje trwałość do daty określonej na etykiecie. Nie wolno
cytokeratyn zyskuje na znaczeniu w immunopatologii. Algorytm diagnostyczny
stosować odczynnika po upływie daty ważności.
wykorzystania cytokeratyn do klasyfikacji nowotworów przedstawiono w pracy
PRZEZNACZENIE
„Immunomicroscopy: A Diagnostic Tool for the Surgical Pathologist” (Immunomikroskopia
jako narzędzie w patologii chirurgicznej), w rozdziale 14.1 Brak reaktywności z keratynami
przy wysokim prawdopodobieństwie występowania raka oznacza konieczność wykonania
dalszych badań immunohistochemicznych,5 ponieważ może wystąpić nieoczekiwana
ekspresja lub brak ekspresji antygenu, zwłaszcza w tkankach nowotworowych.
Przeciwciała pierwotne przeciwko keratynom rozpoznają prawdopodobnie tylko
nowotwory pochodzenia nabłonkowego, z wyjątkiem mięsaka nabłonkowatego,
maziówczaka i międzybłoniaka.8 Niekiedy immunoreaktywność wykazywać będą
elementy zrębowe otaczające tkanki i komórki o silnym odczynie.
2015-03-13
FT0700-410k
1/4
PRZYGOTOWANIE PRÓBKI
Do stosowania z tym pierwszorzędowym przeciwciałem nadają się rutynowo
przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem
stosowania zestawu do detekcji firmy VENTANA i automatów do barwienia VENTANA
BenchMark ULTRA, BenchMark XT, BenchMark GX. Zalecanym środkiem do utrwalania
tkanek jest 10% obojętna zbuforowana formalina 14. Preparaty należy niezwłocznie
wybarwić, ponieważ antygenowość ciętych skrawków tkanek może z czasem ulegać
osłabieniu.
Przy badaniu nieznanych preparatów zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli
dodatniej i ujemnej.
14143PL Rev D
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
Wyłącznie do zastosowania profesjonalnego.
W tym odczynniku zastosowano środek ProClin 300 jako konserwant. Został on
uznany za środek drażniący i jego kontakt ze skórą może powodować uczulenie.
Podczas pracy z produktem należy stosować uzasadnione środki ostrożności.
Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. Stosować
odpowiednią odzież i rękawice ochronne.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak
niebezpieczne materiały biologiczne i utylizować z zachowaniem właściwych
środków ostrożności.
Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu
z wrażliwymi miejscami spłukiwać obfitą ilością wody.
Unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników ze względu na możliwość
otrzymania nieprawidłowych wyników.
W celu uzyskania informacji na temat zalecanej metody utylizacji produktu należy
skontaktować się z władzami lokalnymi i/lub krajowymi.
Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie
charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zwrotach dotyczących
zagrożeń na stronie www.ventana.com.
PROCEDURA BARWIENIA
Przeciwciała pierwszorzędowe firmy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania w
automatach do barwienia VENTANA BenchMark ULTRA, BenchMark XT i BenchMark GX
wraz z zestawami do detekcji i akcesoriami firmy VENTANA. Zalecane protokoły
barwienia – patrz ‎Tabela 1.
Te przeciwciała zostały zoptymalizowane do określonego czasu inkubacji, jednakże
użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego
odczynnika.
Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane
zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi aparatu. Więcej informacji na temat
procedury barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej do
opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji VENTANA.
Tabela 1. Zalecane protokoły barwienia dla produktu Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26)
z użyciem zestawu do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit oraz aparatów
BenchMark ULTRA, BenchMark XT lub BenchMark GX.
metody detekcji i preferencji badacza. Więcej informacji na temat zmiennych związanych z
utrwalaniem zawiera pozycja „Immunohistochemistry Principles and Advances”.15
DODATNIA KONTROLA TKANKOWA
Przykładem dodatniej kontroli tkankowej dla tego przeciwciała jest skóra.
INTERPRETACJA BARWIENIA
Odczynnik Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) charakteryzuje się cytoplazmatycznym
schematem barwienia komórek.
SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA
Przy użyciu tego koktajlu przeciwciał odnotowano swoiste barwienie mięśni gładkich poza
obszarem docelowym, komórek siateczki w tkankach limfoidalnych oraz komórek
śródbłonka, przy czym w większości przypadków było ono łagodne do umiarkowanego,
jednak w pewnych przypadkach ogniskowo ciężkie. Stosowanie odczynnika blokującego
(VENTANA Antibody Diluent with Casein) zmniejszało, ale nie eliminowało barwienia poza
obszarem docelowym bez pogarszania reaktywności swoistej i tym samym jest zalecane.
Resztkowe barwienie poza obszarem docelowym nie powinno zakłócać interpretacji
barwienia.
CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA
Przeprowadzono badania barwienia produktem ultraView Universal DAB Detection Kit
pod kątem jego swoistości, czułości i powtarzalności. Wyniki tych badań wymieniono
poniżej w Tabeli 2 i Tabeli 3.
Swoistość
Tabela 2. Swoistość preparatu Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) oceniano na
podstawie badania próbek tkanek zdrowych, utrwalonych w formalinie i zatopionych w
parafinie.
Tkanka
Liczba
dodatnich /
wszystkich
przypadków
Tkanka
Liczba
dodatnich /
wszystkich
przypadków
Mózg
0/3
Grasica (składniki
nabłonkowe)
3/3
Móżdżek
0/3
Szpik kostny
0/3
Rodzaj procedury
Metoda
Gruczoł nadnerczy (kora)
2/2
Płuco
7/7
Odparafinowanie
Wybrana
Jajnik (komórki nabłonka)
3/3
Serce (mięsień sercowy)
0/3
Kondycjonowanie preparatu
komórkowego
(odsłanianie antygenu)
Cell Conditioning 1,
łagodne
Trzustka
2/2
Przełyk
3/3
Węzeł chłonny
0/3
Żołądek
3/3
Płat przedni przysadki
3/3
Jelito cienkie
3/3
Jądra
0/3
Okrężnica
10/10
Tarczyca
3/3
Wątroba (hepatocyty i
przewody żółciowe)
11/11
Pierś (nabłonek)
2/2
Język (komórki
nabłonka)
Śledzionaa
1/3
Nerka
Migdałek (nabłonek
płaski)
3/3
Gruczoł krokowy
5/5
* Podczas etapu ultraBlock zalecane jest stosowanie odczynnika VENTANA Antibody
Diluent with Casein (nr kat. 760-219/06440002001) w celu ograniczenia barwienia mięśni
gładkich.
Pęcherz moczowy
3/3
Przytarczyce
3/3
Mięsień szkieletowy
(język)
0/1
Szyjka macicy
2/2
Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, a także różne warunki
środowiskowe i ogólne wyposażenie laboratoryjne konieczne może być wydłużenie lub
skrócenie inkubacji przeciwciała pierwszorzędowego, kondycjonowania komórek albo
wstępnej obróbki proteazą dla poszczególnych próbek, w zależności od zastosowanej
Nerw obwodowy
0/3
Skóra
3/3
Mezotelium (osierdzie)
2/2
Enzym (proteaza)
Protease 3, 4 minuty
Przeciwciało (pierwotne)
Aparat BenchMark ULTRA
8 minut, 36℃
Aparat BenchMark XT
8 minut, 37℃
Aparat BenchMark GX
4 minuty, 37℃
ultraBlock
*VENTANA Antibody Diluent with
Casein, 4 minuty
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
2015-03-13
FT0700-410k
3/3
34/34
a: Barwienie komórek śródbłonka naczyń zatokowych poza obszarem docelowym
2/4
14143PL Rev D
Czułość
Tabela 3. Czułość preparatu Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) oceniano na podstawie
badania próbek tkanek nowotworowych utrwalonych w formalinie i zatopionych w
parafinie.
Nowotwór
Liczba dodatnich /
wszystkich
przypadków
Glajaka
1/1
Oponiak atypowy
0/1
Wyściółczak anaplastyczny
0/1
Skąpodrzewiak
0/1
Surowiczy gruczolakorak jajnika
1/1
Gruczolakorak jajnika
1/1
Nowotwór endokrynny trzustki (nowotwór komórek wysp
trzustkowych)
0/1
Gruczolakorak trzustki
Nowotwór
Liczba dodatnich /
wszystkich
przypadków
Rak brodawkowaty nerki
10/11
Rak barwnikooporny nerki
10/10
Gruczolakorak prostaty
16/16
Rozrost gruczołu krokowego
7/7
Mięśniak gładkokomórkowy
0/2
Gruczolakorak błony śluzowej macicy
1/1
Rak jasnokomórkowy błony śluzowej macicy
1/1
Rak płaskonabłonkowy szyjki macicy
2/2
Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy
0/1
Rak podstawnokomórkowy
1/1
1/1
Rak kolczystokomórkowy skóry
1/1
Nasieniakb
2/2
Nerwiakowłókniak
0/1
Rak rdzeniowy tarczycy
1/1
Nerwiak płodowy
0/1
Rak brodawkowaty tarczycy
1/1
Międzybłoniak
1/1
Rak wewnątrzprzewodowy sutka
4/4
Chłoniak Hodgkina (ziarnica złośliwa)
0/1
Rak rdzeniasty sutka
2/2
Chłoniak anaplastyczny wielkokomórkowy
0/1
Rak brodawkowaty sutka
1/1
Rak nabłonka dróg moczowych
1/1
Rak śluzowy sutka
3/3
Mięsak gładkokomórkowy o niskim stopniu złośliwości
0/1
Kostniakomięsak
0/1
Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych
0/1
Mięsak gładkokomórkowy o umiarkowanym stopniu złośliwości
0/1
Inwazyjny przewodowy rak sutka
11/11
Inwazyjny rak zrazikowy sutka
3/3
Choroba Pageta
3/3
Chłoniak rozlany z dużych limfocytów B
0/3
Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuca
0/1
Rak płaskonabłonkowy płuca
11/11
Gruczolakorak płuca
10/10
Niskozróżnicowany rak wielkokomórkowy płuc
1/1
Rak neuroendokrynny przełyku
1/1
Gruczolakorak przełyku
1/1
Rak z komórek sygnetowatych
8/8
Gruczolakorak jelita cienkiego
1/1
Gruczolakorak jelita grubego
35/35
Nowotwór podścieliskowy przewodu pokarmowego (GIST)
35/36
Rak przewodów żółciowych
5/5
Wątrobiak zarodkowy
0/1
2015-03-13
FT0700-410k
kwaśnym białkiem fibrylarnym gleju (GFAP), prowadząc do nieprawidłowego barwienia
nowotworów gleju16
b: Jeden przypadek miał odpowiednie barwienie rzadkie
Powtarzalność
Przeprowadzono badania powtarzalności dla Anti-Pan Keratin (AE1/AE3/PCK26) w celu
wykazania:

Odtwarzalności wyników koktajlu przeciwciał.

Odtwarzalności wyników w jednym badaniu i między badaniami za pomocą aparatu
BenchMark ULTRA.

Odtwarzalności wyników w obrębie platformy przy użyciu aparatów BenchMark
ULTRA, BenchMark XT oraz BenchMark GX.

Odtwarzalności wyników między platformami pomiędzy urządzeniami BenchMark
ULTRA, BenchMark XT i BenchMark GX.
Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy.
0/3
Rak wątrobowokomórkowy
Rak jasnokomórkowy nerki
a: Wynik dodatni może być spowodowany reaktywnością krzyżową przeciwciał AE1/AE3 z
PIŚMIENNICTWO
1.
2.
11/11
3/4
Taylor RT, Cote RJ. Immunomicroscopy: A diagnostic tool for the surgical
pathologist, 2nd Edition. W.B. Saunders Company, Philadelphia, 1994.
Angus B, Kiberu S, Purvis J, Wilkinson L, et al. Cytokeratins in cervical dysplasia
and neoplasia: A comparative study of immunohistochemical staining using
monoclonal antibodies NCL-5D3, CAM 5.2, and PKK1. J Pathol. 1988;155(1):71-75.
14143PL Rev D
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
Moll R, Franke WW, Schiller DL, et al. The catalog of human cytokeratins: patterns
of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell. 1982;31(1):11-24.
Steinert PM, Steven AC, Roop DR. The molecular biology of intermediate filaments.
Cell. 1985;42(2):411-420.
Kamel OW, Rouse RV, Warnke RA. Heterogeneity of epithelial marker expression in
routinely processed, poorly differentiated carcinomas. Arch Pathol Lab Med.
1991;115(6):566-570.
Leader M, Patel J, Makin C, et al. An analysis of the sensitivity and specificity of the
cytokeratin marker CAM 5.2 for epithelial tumors. Results of a study of 203
sarcomas, 50 carcinomas and 28 malignant melanomas. Histopathol. 1986;10(12):
1315-1324.
Robbins SL, Cotran RS, and Kumar V. Pathologic basis of disease. W.B. Saunders
Company. New York, 1984. p. 200.
Lane EB, Alexander CM. Use of keratin antibodies in tumor diagnosis. Semin
Cancer Biol. 1990;1(3):165-179.
Woodcock-Mitchell J, Eichner R, Nelson WG, et al. Immunolocalization of keratin
polypeptides in human epidermis using monoclonal antibodies. J Cell Biol.
1982;95(2):580-588.
Spagnolo DV, Michie SA, Crabtree GS, et al. Monoclonal anti-keratin (AE1)
reactivity in routinely processed tissue from 166 human neoplasms. Am J Clin
Pathol. 1985;84(6):697-704.
Lane EB, Rugg EL, Navsaria H, et al. A mutation in the conserved helix termination
peptide of keratin 5 in hereditary skin blistering. Nature. 1992;356(6366):244-246.
Sun TT, Tseng SC, Huang AJ, et al. Monoclonal antibody studies of mammalian
epithelial keratins: a review. Annals NY Acad Sci. 1985;455:307-329.
Eichner R, Bonitz P, Sun TT. Classification of epidermal keratins according to their
immunoreactivity, isoelectric point, and mode of expression. Cell Biol.
1984;98(4):1388-1396.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong
Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of
Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002.
Fanburg-Smith JC, Majidi M, Miettinen M. Keratin expression in schwannoma: a
study of 115 retroperitoneal and 22 peripheral schwannomas. Mod Pathol.
2006;19(1):115-121.
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
BENCHMARK, ultraView, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami towarowymi firmy
Roche.
Wszystkie pozostałe znaki towarowe stanowią własność odnośnych właścicieli.
© 2014 Ventana Medical Systems, Inc.
DANE KONTAKTOWE
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
2015-03-13
FT0700-410k
4/4
14143PL Rev D