Metoda z Arsenazo III - "Aqua

WAPŃ
ODCZYNNIKI
BIOLABO
Metoda z Arsenazo III
Odczynnik do ilościowego oznaczania wapnia
w ludzkiej surowicy, osoczu i moczu
BIOLABO
PRODUCENT:
WYŁĄCZNY DYSTRYBUTOR:
BIOLABO SA,
AQUA-MED ZPAM – KOLASA sp. j.
02160, Maizy, France
ul. Wólczańska 212, 90-531 Łódź
NR KAT. R90004 (R1 : 1 x 125 ml, R2 : 1 x 10 ml)
AQUA-MED
Tel. : 0-42 636 38 02, 636 37 51
IVD DO DIAGNOSTYKI IN VITRO
Fax : 0-42 637 02 96
ZNACZENIE KLINICZNE (1) (2)
Wapń odgrywa dużą rolę w ludzkiej fizjologii nie tylko jako strukturalny
składnik kości i zębów, ale także w przewodnictwie nerwowomięśniowym i krzepnięciu krwi.
Poziom wapnia w surowicy może się zmieniać wskutek zaburzeń
wchłaniania jelitowego, zmian w stężeniu białek, szczególnie albumin,
których stężenie powinno być mierzone jednocześnie z wapniem.
Hyperkalcemia jest stwierdzana w nadczynności przytarczyc, szpiczaku
mnogim, nowotworach kości, nowotworach przytarczyc i w innych
stanach przebiegających z demineralizacją kości.
Hypokalcemia jest obserwowana niedoczynności przytarczyc i w
niektórych przypadkach martwicy i ostrego zapalenia trzustki.
ZASADA (4)
TRWAŁOŚĆ I PRZECHOWYWANIE
Przechowywać w 18-25°C i chronić przed dostępem światła.
• Nie otwarte :
Odczynniki są trwałe do daty ważności na etykiecie.
• Po otwarciu :
Odczynnik R1 jest trwały minimum przez 3 miesiące, jeśli jest wolny od
kontaminacji.
Trwałość wzorca (R2) : Kilka tygodni raz otwarty (przenieść potrzebną
ilość, zamknąć ponownie i przechowywać w 18-25°C).
Wyrzucić odczynnik, jeśli jest mętny lub jeśli ślepa odczynnikowa w 650
nm > 0.400.
Zestaw może być transportowany w temperaturze pokojowej.
W lekko kwaśnym pH metalo-chromogen Arsenazo III łączy się z
wapniem z utworzeniem barwnego kompleksu, którego absorbancja
mierzona w 650 nm (640-660) jest proporcjonalna do stężenia wapnia w
próbce.
POBIERANIE I OPRACOWANIE PRÓBKI (1) (2)
ODCZYNNIKI
24 godzinny mocz :
Zakwasić po pobraniu za pomocą 20 do 30 ml 6N HCl aby rozpuścić
sole wapnia.
Rozcieńczyć (1 + 2) wodą destylowaną przed wykonaniem oznaczenia.
R1
ODCZYNNIK ARSENAZO III
Bufor imidazolowy pH 6.8 w 25°C
Arsenazo III
Surfaktant
Środek konserwujący
R2
> 90 mmol/l
> 0.18 mmol/l
0.1 %
WZORZEC
Surowica lub heparynizowane osocze :
Nie używać cytrynianów, szczawianów lub EDTA. Krew żylna uzyskana
od pacjenta na czczo z minimalnym uciskiem stazy i bez ćwiczenia
dłonią lub po przywróceniu krążenia po minimum 1 minucie.
Wapń całkowity jest trwały w surowicy przez :
• minimum 7 dni w 2-8°C.
• 6 miesięcy w -20°C.
Długotrwałe mrożenie może prowadzić do parowania, liofilizacji lub
współprecypitacji z fibryną (np. heparynizowane osocza) lub lipidami.
Wapń 10 mg/dl (2.5 mmol/l)
INTERFERENCJE (3)
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
Odczynniki BIOLABO są przeznaczone do profesjonalnego użytku w
diagnostyce in vitro.
• Używać odpowiednią ochronę (fartuch, rękawiczki, okulary).
• Nie pipetować ustami.
• Zanieczyszczoną skórę czy zanieczyszczone oczy, przemyć starannie
dużą ilością wody i zasięgnąć porady lekarza.
• Odczynniki zawierają azydek sodowy (stężenie < 0.1%), który może
reagować z miedzią i ołowiem kanalizacji. Wylewając spłukać dużą
ilością wody.
• Pozostałe informacje są zawarte w Karcie Charakterystyki Substancji
Niebezpiecznej.
• Odpady : Przestrzegać przepisów obowiązujących w kraju.
Wszystkie próbki powinny być traktowane jako potencjalnie zakaźne i
zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej należy stosować
właściwe środki ostrożności. Przestrzegać przepisów obowiązujących w
kraju.
PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKÓW
Odczynniki są gotowe do użycia.
Hemoliza, żółtaczka, lipemia, paraproteiny i magnez : Aby zmniejszyć
pozytywne lub negatywne interferencje, dokonać pomiaru w dwóch
długościach fal (analiza bichromatyczna) lub kilku długościach fal, lub
dodatkowo wykonać oznaczenie ślepej próbki.
Obchodzić się ostrożnie z próbkami, kalibratorami i kontrolami aby
uniknąć kontaminacji przez wapń z otoczenia. Używać jednorazowych
probówek i kuwet, szkło myć w 1N HCl, bardzo dobrze spłukać wodą
demineralizowaną.
Plastikowe i szklane pojemniki mogą adsorbować wapń podczas
przechowywania, szczególnie w rozcieńczonym roztworze.
Obszerniejszy przegląd czynników wpływających na to oznaczenie
znajduje się w publikacji Young D.S.
Wersja : AT 90004 20 10 2004
NIZBĘDNE NIE DOSTARCZONE MATERIAŁY
PROCEDURA MANUALNA
1.
Podstawowe wyposażenie analitycznego laboratorium
medycznego.
2. Prawidłowe i patologiczne surowice kontrolne.
Należy utrzymywać stałą temperaturę, ponieważ absorbancja barwnika
jest wrażliwa na temperaturę.
Odpipetować do dobrze
oznakowanych probówek testowych :
KALIBRACJA
•
•
Wzorzec z zestawu (R2) lub BIOLABO-Multikalibrator NR KAT.
R95015.
lub
jakikolwiek
kalibrator
spójny
z
metodą/materiałem
referencyjnym.
KONTROLA JKOŚCI
•
BIOLABO EXATROL-N (wartości prawidłowe), NR KAT. R95010.
•
BIOLABO EXATROL-P (wartości patologiczne), NR KAT. R95011.
•
Surowice kontrolne odwołujące się do tej samej metody.
•
Zewnętrzny program kontroli jakości.
Zaleca się kontrolowanie w następujących przypadkach :
•
Minimum raz na serię.
•
Minimum raz w ciągu 24 godzin.
•
Przy zmianie butelki odczynnika.
•
Po serwisowaniu aparatu.
Jeśli kontrola jest poza zakresem, podjąć następujące działania :
1.
Powtórzyć test z tą samą kontrolą.
2.
Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, przygotować świeżą surowicę
kontrolną i powtórzyć test.
3.
Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, użyć nową butelkę świeżego
kalibratora i powtórzyć test.
4.
Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, wykalibrować nową butelkę
odczynnika.
5.
Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, skontaktować się z działem
technicznym BIOLABO lub lokalnym dystrybutorem.
WARTOŚCI OCZEKIWANE (2)
Wcześniaki
0-10 dni
10 dni –24 miesiące
24 miesiące –12 lat
12 lat -18 lat
18-60 lat
60-90 lat
> 90 lat
mmol/l
6.2-11.0
7.6-10.4
9.0-11.0
8.8-10.8
8.4-10.2
8.6-10.0
8.8-10.2
8.2-9.6
CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA
Między
seriami
n = 20
1 ml
1 ml
1 ml
Wodę destylowaną
20 µl
20 µl
20 µl
Dobrze wymieszać. Pozostawić na 1 minutę w temperaturze pokojowej.
Odczytać absorbancję w 650 nm (640-660) wobec ślepej odczynnikowej.
Zabarwienie chronione przed dostępem światła jest trwałe przez 1 godzinę.
Uwagi :
9 Bichromatyczna analiza : druga długość fali 700 nm.
9 Apilkacje na automatyczne analizatory są dostępne na życzenie.
Prosimy o kontakt z działem technicznym BIOLABO.
OBLICZENIA
Obliczyć wynik następująco :
Surowica lub osocze :
Wynik =
Poziom
Poziom
prawidłowy: wysoki :
Średnia
mg/dl
8.82
14.02
Średnia
mg/dl
8.96
14.14
SD mg/dl
0.04
0.06
SD mg/dl
0.11
0.20
CV %
0.5
0.4
CV %
1.26
1.42
Granica wykrywalności :
ok. 0.21 mg/dl
Czułość dla 1 mg/dl : Abs 0.070 w 650 nm.
LINIOWOŚĆ
Oznaczenie jest liniowe do 15.0 mg/dl (3.75 mmol/l). Jeśli powyżej,
rozcieńczyć próbkę wodą demineralizowaną i powtórzyć oznaczenie
uwzględniając współczynnik rozcieńczenia. Zakres liniowości zależy od
stosunku próbka/odczynnik.
Abs (pr. badanej)
Abs (wzorca)
x stężenie wzorca
Mocz rozcieńczony (1 + 2) : pomnożyć powyższy wynik przez współczynnik
rozcieńczenia 3.
PIŚMIENNICTWO
(1)
(2)
(3)
TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R.
Ashwood, W.B. Saunders (1999) p. 1395-1406, p.1435-1439.
Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 102-104.
YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995) p.
3-115 à 3-125
BAUER J. P., Affinity and stochiometry of calcium binding Arsenazo III, Anal.
Biol. Chem.(1981), 110, p.61-72
Wersja : AT 90004 20 10 2004
Każde laboratorium powinno wyznaczyć swoje zakresy wartości prawidłowych dla
populacji, dla której świadczy usługi laboratoryjne.
Poziom
wysoki :
Odczynnik
Wyprodukowano we Francji
[1.55-2.75]
[1.90-2.60]
[2.25-2.75]
[2.20-2.70]
[2.10-2.55]
[2.15-2.50]
[2.20-2.55]
[2.05-2.40]
WAPŃ CAŁKOWITY w 24 h moczu : < 300 mg/24 h (< 7.5 mmol/24 h).
Poziom
Wewnątrz
prawidłowy:
serii
n = 20
Badana
Próbkę
(4)
WAPŃ CAŁKOWITY w surowicy:
Populacja
mg/dl
Wzorzec
Wzorzec
Częstotliwość kalibracji zależy
od prawidłowości funkcjonowania
aparatu i przechowywania odczynnika.
Zaleca się kalibrację w następujących przypadkach :
1. Przy zmianie serii odczynnika.
2. Po serwisowaniu aparatu.
3. Jeśli wartości kontroli są poza zakresem, nawet po użyciu nowej
butelki świeżej surowicy.
Ślepa