kreatynina - "Aqua-Med" ZPAM – KOLASA sp.j

KREATYNINA
ODCZYNNIKI
BIOLABO
Metoda kinetyczna
Odczynniki do ilościowego oznaczania kreatyniny
w ludzkiej surowicy, osoczu i moczu
BIOLABO
PRODUCENT:
WYŁĄCZNY DYSTRYBUTOR :
BIOLABO SA,
02160, Maizy, France
Nr kat. 80107: (R1 : 1 x 125 ml, R2 : 1 x 125 ml, R3 : 1 x 10 ml)
AQUA-MED ZPAM - KOLASA sp. j.
Wólczańska 212, 90-531 Łódź
AQUA-MED,
Tel : 0-42 636 38 02, 636 37 51
IVD DO DIAGNOSTYKI IN VITRO
Fax : 0-42 637 02 96
ZNACZENIE KLINICZNE (1)
TRWAŁOŚĆ I PRZECHOWYWANIE
Przekształcanie fosfokreatyny i kreatyny jest szczególną cechą
procesów metabolicznych skurczu mięśnia. Kreatyna i częściowo
fosfokreatyna ulegają przemianie do zbędnego produktu - kreatyniny. W
ten sposób ilość produkowanej każdego dnia kreatyniny jest związana
z masą mięśniową (i ciężarem ciała), wiekiem, płcią, dietą oraz
wysiłkiem fizycznym i nie ulega dużym zmianom z dnia na dzień. Ze
względu na to, że kreatynina jest produkowana endogennie, uwalniana
do płynów ustrojowych ze stałą szybkością i jej poziom w osoczu
utrzymywany jest w wąskich granicach, klirens kreatyniny może być
miernikiem filtracji kłębkowej (GFR).
Przechowywać w 18-25°C i chronić przed dostępem światła.
• Nie otwarte odczynniki są trwałe do daty ważności na etykiecie.
• Raz otwarte odczynniki są trwałe przez minimum 6 miesięcy, jeśli są
wolne od kontaminacji.
Odczynnik roboczy jest trwały minimum przez 30 dni w 2-8°C.
Trwałość wzorca (butelka R3) : Raz otwarty kilka tygodni (przenieść
potrzebną ilość, zamknąć ponownie i przechowywać w 18-25°C).
Wyrzucić każdy odczynnik, który jest mętny lub jeśli absorbancja
odczynnika roboczego jest > 0.300 w 490 nm.
Zestaw może być transportowany w temperaturze pokojowej.
ZASADA (4)(5)
Reakcja kolorymetryczna (reakcja Jaffe) kreatyniny z alkalicznym
pikrynianem mierzona kinetycznie w 490 nm (490-510), bez etapu
wstępnego. Reakcja została ulepszona (swoistość, szybkość) przez
rozwój metody szybkości początkowej.
SKŁAD ODCZYNNIKÓW
R1
ZASADA
Xi :
Odczynnik DRAŻNIĄCY
R36/38 : Działa drażniąco na oczy i skórę.
S26 :
Zanieczyszczone oczy przemyć natychmiast dużą
i zasięgnąć porady lekarskiej.
Fosforan disodowy
Wodorotlenek sodowy
R2
6.4 mmol/l
150 mmol/l
BARWNIK
Dodecylu siarczan sodowy
Kwas pikrynowy
pH 4.0
R3
ilością wody
0.75 mmol/l
4.0 mmol/l
WZORZEC
POBIERANIE I PRZYGOTOWANIE PRÓBKI (2)
Surowica lub heparynizowane osocze.
Mocze : Zbierać mocz w ścisłych przedziałach czasowych (4, 12 lub 24
godzin).
Rozcieńczyć 1+19 wodą destylowaną lub demineralizowaną
przed oznaczeniem.
• Kreatynina jest trwała w próbce :
przez 24 godziny w 2-8°C (mrozić dla dłuższego przechowywania).
INTERFERENCJE (1) (2) (3) (5)
Hemoliza, bilirubina i lipemia mogą powodować fałszywie ujemne wyniki.
Bilirubina : Patrz § PROCEDURA MANUALNA, Procedura n°2.
Kwas askorbinowy, glukoza i również niektóre antybiotyki interferują z
oznaczeniem kreatyniny metodą Jaffe.
Czas odczytywania jest główną determinantą swoistości reakcji Jaffe;
niektóre substancje interferujące działają szybko (acetooctan), inne
powoli (białka). Większość kinetycznych metod zaleca czasy odczytu w
odstępach pomiędzy 30 i 150 sekundami.
Obszerniejszy przegląd czynników wpływających na to oznaczenie
znajduje się w publikacji Young D.S.
Kreatynina 2 mg/dl (177 µmol/l)
NIZBĘDNE NIE DOSTARCZONE MATERIAŁY
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
Odczynniki BIOLABO są przeznaczone do profesjonalnego użytku in vitro.
• Używać odpowiedniej ochrony (fartuch, rękawiczki, okulary).
• Nie pipetować ustami.
• Zanieczyszczoną skórę czy zanieczyszczone oczy przemyć dużą ilością wody i
zasięgnąć porady lekarza.
• Pozostałe informacje są zawarte w Karcie Charakterystyki Substancji
Niebezpiecznej
• Odpady : Przestrzegać przepisów obowiązujących w danym kraju.
Wszystkie próbki powinny być traktowane jako potencjalnie zakaźne – zgodnie z
zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej stosować odpowiednie środki ostrożności.
Przestrzegać przepisów obowiązujących w danym kraju.
PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKÓW
Zmieszać zawartość butelki R1 z zawartością butelki R2
(1 objętość/1 objętość). Może być użyta skalowana probówka testowa.
Analizator automatyczny : odczynnik R1 i R2 mogą być dodawane
oddzielnie (patrz § PROCEDURA MANUALNA).
1.
Podstawowe wyposażenie analitycznego laboratorium
medycznego.
2. Prawidłowe i patologiczne surowice kontrolne.
KALIBRACJA
•
•
Wzorzec z zestawu lub BIOLABO-Multikalibrator, Nr kat. R95015.
lub jakikolwiek kalibrator spójny pomiarowo z metodą referencyjną
czy materiałem referencyjnym.
Częstotliwość kalibracji zależy
od prawidłowości funkcjonowania
aparatu pomiarowego i trwałości odczynnika.
Zaleca się kalibrację w następujących przypadkach :
1.
Kiedy zmienia się butelkę odczynnika.
2.
Po serwisowaniu aparatu .
3.
Jeśli uzyskane wyniki kontroli są poza zakresem, nawet po użyciu nowej
butelki świeżej surowicy kontrolnej.
Wersja : AT 80107 05 07 2004
KONTROLA JAKOŚCI
PROCEDURA MANUALNA
•
BIOLABO EXATROL-N (wartości prawidłowe), NR KAT. R95010.
•
BIOLABO EXATROL-P (wartości patologiczne ), NR KAT. R95011.
•
Inne surowice kontrolne odwołujące się do tej samej metody.
•
Program zewnętrznej kontroli jakości.
Zaleca się kontrolowanie w następujących przypadkach :
•
Minimum raz na serię.
•
Minimum raz w ciągu 24 godzin.
•
Przy zmianie butelki odczynnika.
•
Po serwisowaniu aparatu.
Jeśli kontrola jest poza zakresem, podjąć następujące działania :
1. Powtórzyć test z tą samą kontrolą.
2. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, przygotować świeżą
surowicę kontrolną i powtórzyć test.
3. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, użyć nową butelkę
świeżego kalibratora i powtórzyć test.
4. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, przeprowadzić kalibrację z
nową butelką odczynnika.
5. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, skontaktować się z
działem technicznym BIOLABO lub lokalnym dystrybutorem.
Pozwolić aby odczynniki i próbki osiągnęły temperaturę pomiaru.
Przeprowadzić wszystkie oznaczenia w stałej temperaturze (patrz
uwaga 4).
Procedura n°1 : „Odczynnika roboczego” dla nieżółtaczkowych
próbek
Odpipetować do kuwety o
d=1cm :
Ślepa
(dowolna)
Wzorzec
Badana
Odczynnik roboczy
1 ml
1 ml
1 ml
Wodę destylowaną
100 µl
100 µl
Wzorzec
100 µl
Próbkę (Uwaga 1)
Dobrze wymieszać. Po 30 sekundach odczytać absorbancję A1 w 490 nm
(490-510) wobec ślepej odczynnikowej lub wody destylowanej. Dokładnie po 2
minutach od pierwszego odczytu, odczytać absorbancję A2.
Procedura n°2 : “Dwuodczynnikowa” dla żółtaczkowych surowic
WARTOŚCI OCZEKIWANE (2)
Odpipetować do kuwety o
d=1cm :
Surowica lub osocze
Kreatynina
mg/dl
[ µmol / l ]
Mężczyźni
Kobiety
0.9 -1.3
0.6 -1.1
[ 80-115 ]
[ 53-97]
Kreatynina
mg / kg / 24 h
[ µmol / kg / 24 h l]
Mężczyźni
Kobiety
14 - 26
11 - 20
[ 124-230 ]
[ 97-177 ]
Dorośli < 40 lat
Dorośli > 40 lat
Wzorzec
Próbka
Odczynnik R1
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
Wodę destylowaną
100 µl
100 µl
Wzorzec
Mocze
GFR (Szybkość filtracji kłębkowej)
Ślepa
(dowolna)
100 µl
Próbkę (Uwaga 1)
Inkubowac przez 5 minut w stałej temperaturze, następnie dodać:
0.5 ml
Odczynnik R2
0.5 ml
0.5 ml
Dobrze wymieszać. Po 30 sekundach odczytać absorbancję A1 w 490 nm
(490-510) wobec ślepej odczynnikowej lub wody destylowanej. Dokładnie po
2 minutach od pierwszego odczytu, odczytać absorbancję A2.
ml na minutę
120 (100 – 140)
Fizjologiczny spadek o ok. 1% na każdy rok.
Każde laboratorium powinno ustalić swój własny zakres wartości
prawidłowych dla populacji, dla której świadczy usługi laboratoryjne.
Uwagi :
1.
2.
Próbka : surowica, osocze lub rozcieńczony mocz wodą dest. 1+19.
Procedury na automatyczne analizatory są dostępne na życzenie.
Skontaktować się z działem technicznym BIOLABO.
Odczynnik roboczy (patrz § PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKA).
Wykonać oznaczenie w 37°C dla zoptymalizowania czułości.
3.
4.
DZIAŁANIE (PROCEDURA N°1)
Wewnątrz
serii
n = 20
Poziom
prawidłowy
Poziom
wysoki
Pomiędzy
seriami
n = 20
Poziom
prawidłowy
Poziom
wysoki
Średnia mg/dl
1.32
3.65
Średnia mg/dl
1.09
4.63
SD mg/dl
0.016
0.03
SD mg/dl
0.065
0.125
CV %
1.2
0.8
CV %
5.9
2.7
Granica wykrywalności :
ok. 0.2 mg/dl w 37°C.
Czułość dla 1 mg/dl : ok. 18 mAbs/min w 37°C.
Badania porównawcze z komercyjnie dostępnym odczynnikiem:
y = 1.06 x – 0.051
r = 1.000
LINIOWOŚĆ
Oznaczenie jest liniowe do 15 mg/dl (1327 µmol/l). Jeśli powyżej,
rozcieńczyć próbkę roztworem soli i powtórzyć oznaczenie z
uwzględnieniem współczynnika rozcieńczenia. Liniowość zależy od
stosunku próbka/odczynnik.
OBLICZENIA
Obliczyć wynik następująco :
(A2 - A1) badanej
Surowica lub
osocze :
Wynik =
(A2 - A1) wzorca
x Stężenie wzorca
Mocze rozcieńczone 1+19 : Pomnożyć powyższy wynik x20.
GFR (za pomocą oznaczania klirensu kreatyniny):
z użyciem 24 godzinnej zbiórki moczu i surowiczej kreatyniny
=
Skorygowany klirens kreatyniny (ml/min) UCr x V x 1.73
SCr x BSA
UCr = Kreatynina w moczu w mg/dl lub µmol/l
SCr = Surowicza kreatynina w mg/dl lub µmol/l
V = Objętość wydzielanego moczu w ml/min (24 godz. objęt. moczu/1440)
BSA = Powierzchnia ciała w m2
LUB
z użyciem tylko surowiczej kreatyniny (wzór Cockrofta i Gaulta)
Klirens kreatyniny =
(140 – wiek w latach) x 2.12 x cięż. ciała w kg x K
Surowicza kreatynina (µmol/l) x BSA (m2)
K = 1.00 dla mężczyzn or K = 0.85 dla kobiet
PIŚMIENNICTWO
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R.
Ashwood, W.B. Saunders (1999) p. 1241-1245.
Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 186-188.
YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995)
p.3-190 to 3-211
Fabiny D. L., et Ertingshausen G., Clin. Chem. ( 1971), 17, p.696-700.
D. Labbé et al., Ann. Biol. Clin. (1996), 54, p. 285 – 298
Wyprodukowano we Francji
Wersja : AT 80107 05 07 2004