Opis procedury Wytyczne do oznaczania białka wiąŜącego retinol w

Białko wiąŜące retinol
System IMMAGE® do badań immunochemicznych
Opis procedury
Wytyczne do oznaczania
białka wiąŜącego retinol w surowicy
®
przy uŜyciu systemu IMMAGE * do badań immunochemicznych
Informacje ogólne
Przeznaczenie
Opis procedury dotyczy ilościowego oznaczania białka wiąŜącego retinol (retinol binding protein – RBP) w surowicy
®
ludzkiej metodą nefelometryczną przy uŜyciu systemu IMMAGE do badań immunochemicznych (1, 2).
Zakres pomiarowy
Około 16–169 mg/L, w zaleŜności od konkretnej partii kalibratora.
Zakres normy
26–60 mg/L. Zaleca się wyznaczenie zakresu normy dla lokalnej populacji.
Ustawienia urządzenia
Urządzenie programuje się zgodnie z „Ustawieniami urządzenia” na stronie 3.
Odczynniki
Przeciwciała
Bufor
Kalibrator
Próby kontrolne
Rozcieńczalnik
Nr kat.
A0040
S2007
X0908
X0940
X0939
447640
S2005
Nazwa
Polyclonal Rabbit Anti-Human Retinol Binding Protein
Dako Turbidimetry/Nephelometry Reaction Buffer 1
Human Serum Protein Calibrator
Human Serum Protein High Control
Dako Human Serum Protein Low Control
IMMAGE® Immunochemistry System DIL 1
Beckman Coulter Part (4x120 mL) lub
Dako Turbidimetry/Nephelometry Dilution Buffer 1
Próbki
Surowica ludzka
Stabilne przez 7 dni w temperaturze 2–8 °C.
Stabilne przez 3 miesiące w temperaturze –20 °C (Tylko w przypadku zamro Ŝenia).
ZamroŜone próbki naleŜy rozmraŜać w temperaturze 37 °C i dobrze wymiesza ć przed wykonaniem oznaczenia.
Kalibrator
Kalibrator jest rozcieńczany ręcznie w IMMAGE® Immunochemistry System DIL 1 lub Dako Turbidimetry/Nephelometry
Dilution Buffer 1.
Bufor
Bufor jest gotowy do uŜytku.
Przeciwciała
Przeciwciała są gotowe do uŜytku. W sporadycznych przypadkach przeciwciała są lekko mętne, zaleca się wówczas
przefiltrowanie ich przez filtr z błoną 0,22 µm.
Stabilność przeciwciał nierozcieńczonych: do terminu waŜności podanego na etykiecie.
Stabilność przeciwciał rozcieńczonych: 28 dni w temperaturze 2–8 °C.
Stabilność w urządzeniu: 28 dni.
Wydajność: 1 mL przeciwciał umoŜliwia dokonanie około 47 odczytów kuwet wzorców lub próbek. Przy obliczaniu
wymaganej objętości odczynnika naleŜy wziąć pod uwagę nieuŜyteczną objętość buteleczki.
Stabilność kalibracji
Zaleca się powtarzanie kalibracji co 28 dni, po zmianie partii odczynnika, przygotowaniu nowej porcji
rozcieńczonych przeciwciał, po przefiltrowaniu rozcieńczonych przeciwciał lub w przypadku, gdy jakość wyników
spadnie poniŜej poziomu przyjętego w danym laboratorium.
Rozwiązywanie problemów
Jeśli wydajność nie jest akceptowalna, naleŜy dokonać ponownej kalibracji. Zweryfikować odczynniki i procedurę.
Jeśli problem nie ustępuje, naleŜy skontaktować się z dostawcą urządzenia lub obsługą techniczną firmy Dako.
Piśmiennictwo
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: method optimization. Basic principles for quantitative determination of
human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab Med
2001; 39: 1098-109.
2. Instrukcja obsługi systemu IMMAGE® do badań immunochemicznych. IMMAGE jest zarejestrowanym znakiem
towarowym firmy Beckman Coulter, Inc., Fullerton, CA
(121150-001)
30 197.A0040.01/PL/SSH/2010.10.28 str. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel.: +45 44 85 95 00 | Fax: +45 44 85 95 95 | Nr CVR 33 21 13 17
Białko wiąŜące retinol
System IMMAGE® do badań immunochemicznych
Dane dotyczące działania
Czułość
Typowymi wartościami określonymi dla 20,6 mg/L białka RBP są odpowiedzi aparatu w liczbie ok. 284 uzyskane w
analizatorze Beckman Immage.
Limit detekcji
Szacunkowy limit detekcji wynosi 15 mg/L.
Precyzja
Precyzję określono poprzez przebadanie dwóch próbek kontrolnych i jednej próbki surowicy metodą analityczną
ANOVA w 6 seriach. W kaŜdej serii wykonano nową kalibrację i po 6 oznaczeń.
Human Serum
Protein Low Control
(X0939)
Human Serum
Protein High Control
(X0940)
Pula surowic z
niskim steŜeniem
Odchylenie standardowe
mg/L
Całk.
wsp.
zmienności
(%)
n
0,614
1,6
36
0,893
1,109
1,3
36
0,584
0,609
2,8
36
Białko wiąŜące
retinol
wartość średnia
mg/L
W
serii
Poza
serią
37,9
0,251
0,560
86,9
0,659
21,9
0,173
Razem
Liniowość
Przyjmuje się liniowość w zakresie 16–100 mg/L, najwyŜsze badane stęŜenie.
Bezpieczny zakres
Nie stwierdzono nadmiernego stęŜenia antygenu dla stęŜenia białka RBP < 476 mg/L (najwyŜsze badane stęŜenie).
Zakłócenia
Nie stwierdzono zakłóceń przy stęŜeniach do 8,4 g/L hemoglobiny, 380 mg/L bilirubiny, 2 g/L intralipidu oraz 100 IU/mL
czynnika reumatoidalnego.
(121150-001)
30 197.A0040.01/PL/SSH/2010.10.28 str. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel.: +45 44 85 95 00 | Fax: +45 44 85 95 95 | Nr CVR 33 21 13 17
Białko wiąŜące retinol
System IMMAGE® do badań immunochemicznych
®*
Ustawienia urządzenia IMMAGE do badań immunochemicznych
Procedura
1. Zaprogramować odczynnik zdefiniowany przez uŜytkownika z parametrami wymienionymi poniŜej. Bardziej
szczegółowe informacje zawiera rozdział 5 Instrukcji obsługi systemu IMMAGE do badań immunochemicznych.
2. Przenieść Dako Antibody Reagent do pojemnika „A” w nowej kasecie zdefiniowanej przez uŜytkownika.
3. Przenieść Dako Reaction Buffer 3 do pojemnika „B” tej kasety. Zob. uwaga poniŜej.
4. Nadać substancji (Chemistry) nazwę „RBP”.
5. Wartość kalibratora jest zaleŜna od partii. Gdy uŜywany jest Dako Calibrator
(nr kat. X0908), naleŜy ręcznie przygotować następującą serię rozcieńczeń zgodnie z przedstawioną poniŜej tabelą
rozcieńczeń.
6. Jako rozcieńczalnika próbek uŜyć IMMAGE DIL1 (nr kat. Beckman Coulter 447255) i w systemie IMMAGE
skonfigurować go jako DIL1.
Tabela rozczeńczeń
Standard
(Standardowy)
Std. (1)
Std. (2)
Std. (3)
Std. (4)
Std. (5)
Std. (6)
X0908
[
[
[
[
[
[
15
20
40
80
100
150
NaCl
0,9%
]
]
]
]
]
]
[
[
[
[
[
[
150
115
95
100
50
0
]
]
]
]
]
]
f(i)
MnoŜnik
stęŜ.
f(1)
f(2)
f(3)
f(4)
f(5)
f(6)
0,0909
0,1481
0,2963
0,4444
0,6667
1,000
X0908
[
[
[
[
[
[
0,0909 x (C(Cal))
0,1481 x (C(Cal))
0,2963 x (C(Cal))
0,4444 x (C(Cal))
0,6667 x (C(Cal))
1,0000 x (C(Cal))
]
]
]
]
]
]
StęŜenie białka RBP we wzorcach (C(i)) (mg/L) obliczane jest ze stęŜenia białka RBP (C(Cal)) (mg/L) podanego dla
konkretnej partii kalibratora (X0908) oraz względnego mnoŜnika stęŜenia (f(i)), jako iloczyn, tj. C(i) = f(i) x C(Cal) .
Dokładną wartość C(Cal) bieŜącej partii podano na Karcie parametrów analitycznych.
Informacje o protokole
Nazwa substancji
Białko wiąŜące
retinol
Nr partii
XXXXXX
Protokół
Jednostki
mg/L
Niekompetytywna
metoda nefelometryczna
Numer seryjny
odczynnika
Objętość próbki lub
rozcieńczenia
XXXXXXX
Termin waŜności
odczynnika
XX/XX/XX
75 µL
Wzmocnienie
3
Objętość buforu
0 µL
Rozcieńczenie
kalibratora
1:5
Objętość
w pojemniku A
Objętość w
pojemniku B
Poziomy
kalibratorów/repliki
21 µL
Rozcieńczenie próbki
1:18
195 µL
Czas reakcji
2,0 minuty
6/2
Nastawy kalibratora
ZaleŜne od partii
XX Zdefiniowane przez uŜytkownika
Model zdefiniowany przez uŜytkownika: logistyka czteroparametrowa
Uwaga:
(121150-001)
Maksymalna objętość pojemnika „A” i „B” kasety UDR wynosi 8,0 mL, zaś objętość martwa wynosi 250 µL. System
dozuje 195 µL buforu z pojemnika B zgodnie z protokołem opisanym powyŜej, jednak faktycznie zasysa łącznie 200 µL,
aby wykluczyć ryzyko skaŜenia cieczy. A zatem maksymalnie napełniony pojemnik wystarcza na około 35 testów.
Zaleca się monitorowanie zuŜycia odczynników i uzupełnianie ich w pojemnikach A i B do czasu zuŜycia wszystkich
300 testów z kasety.
30 197.A0040.01/PL/SSH/2010.10.28 str. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel.: +45 44 85 95 00 | Fax: +45 44 85 95 95 | Nr CVR 33 21 13 17