w moczu w urządzeniu Beckman Coulter AU Systems

Alfa-1-mikroglobulina
Beckman Coulter AU Systems
Opis procedury
Wytyczne do oznaczania
alfa-1-mikroglobuliny (białka HC) w moczu
w urządzeniu Beckman Coulter AU Systems
Informacje ogólne
Niniejsza procedura oznaczenia alfa-1-mikroglobuliny została opracowana dla urządzenia AU480, ale dotyczy teŜ
systemów AU400, AU600, AU640, AU2700, AU5400 i AU680, stosujących te same ustawienia.
Przeznaczenie
Opis procedury dotyczy ilościowego oznaczenia alfa-1-mikroglobuliny w próbkach materiału pochodzenia ludzkiego
z wykorzystaniem turbidymetrii, przy uŜyciu urządzenia Beckman Coulter AU Systems (1, 2).
Zakres pomiarowy
Około 2,5–100,0 mg/L, w zaleŜności od konkretnej partii kalibratora.
Zakres normy
0–7 mg/L (3). Zaleca się wyznaczenie zakresu normy dla lokalnej populacji.
Ustawienia urządzenia
Urządzenie programuje się zgodnie z „Ustawieniami urządzenia” znajdującymi się na stronie 3.
Odczynniki
Przeciwciało
Bufor reakcyjny
Rozcieńczalnik
Kalibrator
Kontrole
Próbki
Mocz ludzki.
Stabilne przez 10 dni w temperaturze 2–8 °C.
Nie zaleca się zamraŜania próbek przed analizą.
Kalibrator
Dako Human Urine Protein Calibrator, nr kat. X0975 jest rozcieńczany ręcznie w następującej serii rozcieńczeń.
Dane dotyczące działania w urządzeniu Beckman Coulter AU480
Nr kat.
Q0495
S2007
S2005
X0975
X0976
X0977
Wzorzec
Lp. (i)
Wzorzec (1)
Wzorzec (2)
Wzorzec (3)
Wzorzec (4)
Wzorzec (5)
Wzorzec (6)
Nazwa
Dako Polyclonal Rabbit Anti-Human Alpha-1-Microglobulin
Dako Turbidimetry/Nephelometry Reaction Buffer 1
Dako Turbidimetry/Nephelometry Dilution Buffer 1
Dako Human Urine Protein Calibrator
Dako Human Urine Protein Low Control
Dako Human Urine Protein High Control
X0975
µL
[
[
[
[
[
[
10
20
50
100
280
350
NaCl
µL
]
]
]
]
]
]
[
[
[
[
[
[
390
380
310
200
140
0
f(i)
]
]
]
]
]
]
f(1)
f(2)
f(3)
f(4)
f(5)
f(6)
MnoŜnik
stęŜ.
0,0250
0,0500
0,1389
0,3333
0,6667
1,0000
C(i)
StęŜenie
[0,0250 x C(Cal)
[0,0500 x C(Cal)
[0,1389 x C(Cal)
[0,3333 x C(Cal)
[0,6667 x C(Cal)
[1,0000 x C(Cal)
]
]
]
]
]
]
StęŜenie alfa-1-mikroglobuliny we wzorcach (C(i)) (mg/L) obliczane jest z alfa-1-mikroglobuliny (C(Cal)) (mg/L)
podanego dla konkretnej partii kalibratora (X0975) oraz względnego mnoŜnika stęŜenia (f(i)), jako iloczyn,
tj. C(i) = f(i) x C(Cal). Proszę sprawdzić w karcie specyfikacji dokładną wartość C(Cal) dla bieŜącej partii.
Bufor (R1)
Bufor jest gotowy do uŜytku. W analizatorze stabilny do 30 dni.
Przeciwciało (R2)
Przeciwciało jest gotowe do uŜytku.
W sporadycznych przypadkach przeciwciała są lekko mętne — zaleca się wówczas przefiltrowanie ich przez filtr
z błoną 0,22 µm.
Stabilność w temperaturze 2–8 °C: Zob. ulotkę informacyjną i datę waŜności na etykiecie.
W analizatorze stabilny do 30 dni.
Wydajność: 1 mL roztworu przeciwciała jest równowaŜny około 18 odczytom kuwet wzorców lub próbek. Przy
obliczaniu wymaganej objętości odczynnika naleŜy wziąć pod uwagę nieuŜyteczną objętość buteleczki.
Stabilność kalibracji
Zaleca się powtarzanie kalibracji kaŜdego 30 dnia lub po zmianie partii odczynnika lub w przypadku, gdy jakość
wyników spadnie poniŜej poziomu przyjętego w danym laboratorium.
Rozwiązywanie problemów
Jeśli wydajność nie jest akceptowalna, naleŜy dokonać ponownej kalibracji. Zweryfikować odczynniki i procedurę.
Jeśli problem nie ustępuje, naleŜy skontaktować się z dostawcą urządzenia lub obsługą techniczną firmy Dako.
(122563-001)
D09604PL_001_Q0495.01/PHC/2012.06 str. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Alfa-1-mikroglobulina
Beckman Coulter AU Systems
Dane dotyczące działania
Czułość
Wartość gęstości optycznej (OD) około 0,25 w urządzeniu Beckman Coulter AU480 odpowiada stęŜeniu alfa-1mikroglobuliny wynoszącemu około 100 mg/L.
Limit detekcji
Szacunkowy limit detekcji wynosi 0,72 mg/L.
Precyzja
Precyzję określono poprzez przebadanie dwóch próbek kontrolnych i dwóch próbek moczu metodą analityczną
ANOVA w 3 seriach. W kaŜdej serii wykonano nową kalibrację i po 6 oznaczeń.
Próbki
A1M
Wartość
średnia
(mg/L)
Odchylenie standardowe
(mg/L)
W serii
Między
seriami
Razem
Całk. wsp.
zmienności
(%)
n
Urine Low Control,
Nr kat. X0976
16,4
0,20
0,80
0,83
5,0
18
Urine High Control,
Nr kat. X0977
81,9
0,46
3,11
3,14
3,8
18
Próbka moczu
ludzkiego z niskim
stęŜeniem
11,2
0,22
0,47
0,52
4,6
18
Próbka moczu
ludzkiego z wysokim
stęŜeniem
48,5
0,31
1,76
1,79
3,7
18
Dokładność
W przypadku kontroli Dako Urine Protein Low Control, nr kat. X0976, i Dako Urine Protein High Control,
nr kat. X0977, moŜna spodziewać się odzysku alfa-1-mikroglobuliny na poziomie 85–115%.
Liniowość
Test jest liniowy w zakresie 2,5–100 mg/L.
Bezpieczny zakres
Nie stwierdzono nadmiernego stęŜenia antygenu dla stęŜenia alfa-1-mikroglobuliny do 1 194 mg/L..
Zakłócenia
Nie obserwowano reaktywności krzyŜowej ze znanymi białkami.
Nie stwierdzono zakłóceń przy stęŜeniach do 5 g/L kreatyniny, 50 g/L mocznika, 100 g/L glukozy, 25 mmol/L wapnia
i 20 g/L albuminy.
W pobliŜu początku zakresu pomiarowego (zakres niskich wartości) w próbkach zawierających hemoglobinę i/lub
bilirubinę moŜe być wykrywane za wysokie stęŜenie alfa-1-mikroglobuliny.
Porównanie metod
Oznaczanie alfa-1-mikroglobuliny zgodnie z niniejszą procedurą porównano z innymi dostępnymi komercyjnie
testami turbidymetrycznymi. Dane dostępne są na Ŝyczenie.
Piśmiennictwo
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination
of human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab
Med 2001; 39:1098-1109.
2. Olympus AU manual(s).
3. Tencer J, Thysell H, Grubb A. Analysis of proteinuria: reference limits for urine excretion of albumin, protein
HC, Immunoglobulin G, κ- and λ-immunoreactivity, orosomucoid and α1-antitrypsin. Scan J Clin Lab Invest
1996; 56:691-700.
(122563-001)
D09604PL_001_Q0495.01/PHC/2012.06 str. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Alfa-1-mikroglobulina
Beckman Coulter AU Systems
Ustawienia urządzenia
Specific test parameters
Sample vol.
Pre-Diluent Rate
Rgt. Volume R1(R1-1)
R2(R2-1)
15.0 µL
1
∇
180 µL
50
µL
Common Rgt. Type
None
Wavelength
Pri 410 ∇nm
Method
END ∇
Reaction Slope
+
∇
Measuring Point 1 First
10
Measuring Point 2 First
Liniearity Limit
%
lag time Check
∇
Dilution
0
µl
Dilution
0
µl
Dilution
Name
Sec
Last
Last
OD limit
Min OD
-0.1000
Reagent OD limit
First
Low -0.1000
Last
Low -0.1000
Max OD
2.5000
High
High
2.5000
2.5000
High
B
B
100
0
0
µl
20
None
∇nm
27
Dynamic range Low
Correlation Factor A
Factor for Maker A
2.50
1
1
On-board stability
LIH Influence Check
Lipemia
Icterus
Hemolysis
30
Day
∇
∇
∇
∇
2
∇
0
Hour
+
∇
Yes
∇
Lot/Lot
∇
Calibration specific
Calibration Type:
6AB
<Calibration Parameters>
Calibrator
Point 1
*
∇
Point 2
*
∇
Point 3
*
∇
Point 4
*
∇
Point 5
*
∇
Point 6
*
∇
Point 7
∇
Point 8
∇
Point 9
∇
Point 10
∇
∇
Formula:
OD
Conc
**
**
**
**
**
**
Rozcieńczalnikt – nr kat. S2005
∇
Counts:
Low
High
-0.1000
2.5000
-0.1000
2.5000
-0.1000
2.5000
-0.1000
2.5000
-0.1000
2.5000
-0.1000
2.5000
Slope Check
Allowance Range Check
ο Reagent Blank
ο Calibration
Advanced Calibration
Operation
Interval (RB/ACAL)
<Point Cal. For
No. of Correction Points
Master Curve>
Calibrator
OD
Point-1
∇
Point-2
∇
MB Type Factor:
SPLINE
∇
Conc
1-Point Calibration Point
R1 – nr kat. S2007
Use Master Curve
OD Range
Low
High
None
∇
∇
ο Lot Calibration
Stability
Rgt Blank
Calibration
30
30
Day
Day
Hour
Hour
ο with Conc-0
R2 – nr kat. Q0495.
[*]
Definiowane przez klienta.
[**]
StęŜenie 6 wzorców uzyskanych poprzez rozcieńczenie kalibratora Dako Human Urine Protein Calibrator, nr kat. X0975.
(122563-001)
0
0
D09604PL_001_Q0495.01/PHC/2012.06 str. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17