Opis procedury Wytyczne do oznaczania cystatyny C w surowicy

Cystatyna C
Beckman Coulter AU Systems
Opis procedury
Wytyczne do oznaczania
cystatyny C w surowicy/osoczu
w urządzeniu Beckman Coulter AU Systems
Informacje ogólne
Niniejsza procedura oznaczenia cystatyny C została opracowana dla urządzenia AU680, ale dotyczy teŜ systemów
AU400, AU600, AU640, AU2700, AU5400, AU480 i AU5800, stosujących te same ustawienia.
Dane dotyczące działania w urządzeniu Beckman Coulter AU680
Przeznaczenie
Opis procedury dotyczy ilościowego oznaczenia cystatyny C w próbkach materiału pochodzenia ludzkiego
z wykorzystaniem turbidymetrii, przy uŜyciu urządzenia Beckman Coulter AU Systems (1, 2).
Zakres pomiarowy
Około 0,4–7,0 mg/L, w zaleŜności od konkretnej partii kalibratora.
Zakres normy
0,59–1,03 mg/L. Zaleca się wyznaczenie zakresu normy dla lokalnej populacji.
Ustawienia urządzenia
Urządzenie programuje się zgodnie z „Ustawieniami urządzenia” znajdującymi się na stronie 3.
Odczynniki
Przeciwciało
Bufor reakcyjny
Kalibrator
Kontrole
Rozcieńczalnik
Próbki
Ludzka surowica, osocze z dodatkiem heparyny lub osocze z EDTA.
Stabilne przez 2 dni w temperaturze 2–8 °C.
Stabilne przez co najmniej 3 miesiące w temperaturze –20 °C.
ZamroŜone próbki naleŜy rozmraŜać w temperaturze 37 °C i dobrze wymiesza ć przed wykonaniem oznaczenia.
Kalibrator
Kalibrator Dako Cystatin C Calibrator (ERM-DA471/IFCC standaryzowany), nr kat. X7912 jest rozcieńczany ręcznie
w następującej serii rozcieńczeń.
Nr kat.
LX004
S2361
X7912
X7913
Wzorzec
Lp. (i)
Wzorzec (1)
Wzorzec (2)
Wzorzec (3)
Wzorzec (4)
Wzorzec (5)
Wzorzec (6)
Nazwa
Cystatin C Immunoparticles (standaryzowane ERM-DA471/IFCC)
Dako Turbidimetry/Nephelometry Reaction Buffer 9
Dako Cystatin C Calibrator (standaryzowany ERM-DA471/IFCC)
Dako Cystatin C Control Set (standaryzowany ERM-DA471/IFCC)
Roztwór NaCl 154 mmol/L (0,9%, stęŜenie wagowo-objętościowe)
X7912
µL
[
[
[
[
[
[
20
40
80
150
280
350
NaCl
µL
]
]
]
]
]
]
[
[
[
[
[
[
350
330
330
240
120
0
]
]
]
]
]
]
f(i)
MnoŜnik
stęŜ.
f(1)
f(2)
f(3)
f(4)
f(5)
f(6)
0,0541
0,1081
0,1951
0,3846
0,7000
1.0000
C(i)
StęŜenie
[0,0541 x C(Cal)
[0,1081 x C(Cal)
[0,1951 x C(Cal)
[0,3846 x C(Cal)
[0,7000 x C(Cal)
[1,0000 x C(Cal)
]
]
]
]
]
]
StęŜenie cystatyny C we wzorcach (C(i)) (mg/L) obliczane jest ze stęŜenia cystatyny C (C(Cal)) (mg/L) podanego dla
konkretnej partii kalibratora (X7912) oraz względnego mnoŜnika stęŜenia (f(i)), jako iloczyn, tj. C(i) = f(i) x C(Cal).
Proszę sprawdzić w karcie specyfikacji dokładną wartość C(Cal) dla bieŜącej partii.
Bufor (R1)
Bufor jest gotowy do uŜytku. W analizatorze stabilne do 12 tygodni.
Przeciwciało (R2)
Roztwór czynników immunologicznych jest gotowy do uŜytku.
Stabilność w temperaturze 2–8 °C: Zob. ulotkę informacyjną i datę waŜności na etykiecie.
W analizatorze stabilne do 12 tygodni.
Wydajność: 1 mL roztworu czynników immunologicznych umoŜliwia dokonanie około 27 odczytów kuwet wzorców
lub próbek. Przy obliczaniu wymaganej objętości odczynnika naleŜy wziąć pod uwagę nieuŜyteczną objętość
buteleczki.
Stabilność kalibracji
Zaleca się powtarzanie kalibracji co 8 tygodni po zmianie partii odczynnika lub w przypadku, gdy jakość wyników
spadnie poniŜej poziomu przyjętego w danym laboratorium.
Rozwiązywanie problemów
Jeśli wydajność nie jest akceptowalna, naleŜy dokonać ponownej kalibracji. Zweryfikować odczynniki i procedurę.
Jeśli problem nie ustępuje, naleŜy skontaktować się z dostawcą urządzenia lub obsługą techniczną firmy Dako.
(122546-001)
D09556PL_001_LX004.01/PHC/2012.05 str. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Cystatyna C
Beckman Coulter AU Systems
Dane dotyczące działania
Czułość
Wartość gęstości optycznej (OD) około 0,35 w urządzeniu Beckman Coulter AU680 odpowiada stęŜeniu cystatyny
C ok. 7,0 mg/L.
Limit detekcji
Szacunkowy limit detekcji wynosi 0,07 mg/L.
Precyzja
Precyzję określono poprzez przebadanie dwóch próbek kontrolnych i surowic o dwóch róŜnych stęŜeniach
cystatyny C metodą analityczną ANOVA w 3 seriach. W kaŜdej serii wykonano nową kalibrację i po 6 oznaczeń.
Próbki
Cystatyna C
Wartość
średnia
(mg/L)
Odchylenie standardowe
(mg/L)
W serii
Między
seriami
Razem
Całk. wsp.
zmienności
(%)
n
Cystatin C Control 1,
Nr kat. X7913
4,12
0,098
0,054
0,111
2,7
18
Cystatin C Control 2,
Nr kat. X7913
1,23
0,011
0,010
0,015
1,2
18
Próbka surowicy
ludzkiej z niskim
stęŜeniem
1,74
0,010
0,026
0,028
1,6
18
Próbka surowicy
ludzkiej z wysokim
stęŜeniem
4,03
0,057
0,032
0,066
1,6
18
Dokładność
Przy stosowaniu kontroli Dako Cystatin C Control 1, nr kat. X7913 i Dako Cystatin C Control 2, nr kat. X7913,
moŜna oczekiwać odzyskania 90–110% cystatyny C.
Liniowość
Test jest liniowy w zakresie 0,4–7,0 mg/L.
Bezpieczny zakres
Nie stwierdzono nadmiernego stęŜenia antygenu dla stęŜenia cystatyny poniŜej 10,5 mg/L.
Zakłócenia
Nie stwierdzono zakłóceń przy stęŜeniach do 10 g/L hemoglobiny, 600 mg/L bilirubiny, 16 g/L intralipidu oraz
1200 IU/mL czynnika reumatoidalnego.
Porównanie metod
Oznaczania cystatyny C zgodnie z niniejszą procedurą porównano z innymi dostępnymi komercyjnie testami
turbidymetrycznymi. Dane dostępne są na Ŝyczenie.
Piśmiennictwo
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination
of human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab
Med 2001; 39:1098-1109.
2. Olympus AU manual(s).
(122546-001)
D09556PL_001_LX004.01/PHC/2012.05 str. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Cystatyna C
Beckman Coulter AU Systems
Ustawienia urządzenia
Specific test parameters
Sample vol.
Pre-Diluent Rate
Rgt. Volume R1(R1-1)
R2(R2-1)
2
1
154
34
µL
∇
µL
µL
Common Rgt. Type
None
Wavelength
Pri 540 ∇nm
Method
FIXED ∇
Reaction Slope
+
∇
Measuring Point 1 First
11
Measuring Point 2 First
Liniearity Limit
%
lag time Check
∇
Dilution
0
µl
Dilution
0
µl
Dilution
Name
Sec
Last
Last
20
800
OD limit
Min OD
-0,1000
Reagent OD limit
First
Low -0,1000
Last
Low -0,1000
Max OD
3,0000
High
High
3,0000
3,0000
High
B
B
7.00
0
0
µl
∇nm
22
Dynamic range Low
Correlation Factor A
Factor for Maker A
0.40
1
1
On-board stability
LIH Influence Check
Lipemia
Icterus
Hemolysis
90
Day
∇
∇
∇
∇
2
∇
0
Hour
+
∇
Yes
∇
Lot/Lot
∇
Calibration specific
Calibration Type:
6AB
<Calibration Parameters>
Calibrator
Point 1
*
∇
Point 2
*
∇
Point 3
*
∇
Point 4
*
∇
Point 5
*
∇
Point 6
*
∇
Point 7
∇
Point 8
∇
Point 9
∇
Point 10
∇
∇
Formula:
OD
Conc
**
**
**
**
**
**
∇
Counts:
Low
High
-0,1000
3,0000
-0,1000
3,0000
-0,1000
3,0000
-0,1000
3,0000
-0,1000
3,0000
-0,1000
3,0000
Slope Check
Allowance Range Check
ο Reagent Blank
ο Calibration
Advanced Calibration
Operation
Interval (RB/ACAL)
<Point Cal. For
No. of Correction Points
Master Curve>
Calibrator
OD
Point-1
∇
Point-2
∇
MB Type Factor:
SPLINE
∇
Conc
1-Point Calibration Point
Use Master Curve
OD Range
Low
High
None
Rozcieńczalnikt – Roztwór NaCl 154 mmol/L (0,9%, stęŜenie wagowo-objętościowe)
∇
∇
ο Lot Calibration
Stability
Rgt Blank
Calibration
90
90
Day
Day
0
0
Hour
Hour
ο with Conc-0
R1 – Nr kat. S2361
R2 – Nr kat. LX004.
[*]
Definiowane przez klienta.
[**]
StęŜenie 6 wzorców uzyskanych poprzez rozcieńczenie kalibratora Dako Cystatin C Calibrator (standardyzowany ERM-DA471/IFCC),
nr kat. X7912.
(122546-001)
D09556PL_001_LX004.01/PHC/2012.05 str. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17