1. ROZPOCZĘCIE PROCESU FERMENTACJI

1. ROZPOCZĘCIE PROCESU FERMENTACJI
CEL ĆWICZENIA:
Przygotowanie mieszaniny fermentacyjnej do produkcji etanolu przez drożdże (Saccharomyces
cerevisiae). Końcowa objętość mieszaniny fermentacyjnej– 4,0 L
Źródło węgla – GLUKOZA CGLUKOZY = 10-14 %
Drożdże piekarnicze – 5g
PRZYGOTOWANIE
1. Rozpuścić odpowiednią naważkę glukozy w wodzie destylowanej.
2. Przenieść do butli i dokładnie wymieszać.
3. Pobrać ok. 8 mL próbki do oznaczania stężenia glukozy i pozostawić w szczelnie zamkniętej
probówce w temperaturze -20 °C do dalszych zajęć.
4. Następnie dodać drożdże poczekać aż spęcznieją i dobrze zamieszać butlą.
5. Butlę szczelnie zamknąć korkiem z rurką odprowadzającą CO2 i pozostawić na okres kilku
tygodni w temperaturze pokojowej.
2. OPRACOWANIE KRZYWYCH
KALIBRACYJNYCH NA GLUKOZĘ
Należy przygotować krzywe standardowe dla glukozy w pH podanym przez prowadzącego dla
testu z odczynnikiem DNS oraz odczynnikiem różowym. Wyznaczone krzywe będą
wykorzystywane w czasie laboratorium z obróbki wstępnej materiału lignocelulozowego oraz w
oznaczeniach stopnia konwersji glukozy w procesie fermentacji alkoholowej.

TEST DNS (analiza na obecność glukozy i innych cukrów redukujących)
Do 0,5 mL roztworu zawierającego glukozę o stężeniu 0,1 – 2,0 g/L dodać 1,5 mL odczynnika
DNS i próby wstawić na 5 min do 100 °C. Następnie próby ochłodzić, dodać 8 mL wody
destylowanej i po 25 min od wyciągnięcia z łaźni zmierzyć absorbancję przy 550 nm względem
próby kontrolnej. Do kontroli zamiast roztworu cukru dodaje się 0,5 mL wody, a następnie próbkę
tą traktuje się jak wszystkie pozostałe.

Oznaczanie stężenia glukozy testem enzymatycznym.
Zasada metody. Glukoza pod wpływem oksydazy glukozowej utlenia się do kwasu
glukonowego z wytworzeniem nadtlenku wodoru. Ten ostatni reaguje w obecności
peroksydazy z kwasem hydrobenzoesowym (HBA) i 4-aminoantypiryną (AAP) tworząc
czerwony barwnik chinonoiminę, którego intensywność zabarwienia mierzona przy długości
fali 500 nm jest wprost proporcjonalna do stężenia glukozy w próbce.
Glukoza + O2 + H2O Oksydaza glukozowa
H2O2 + HBA + AAP Peroksydaza
kwas glukonowy +H2O2
chinonoimina + 4 H2O
Odczynniki: Odczynnik I (składniki aktywne: oksydaza glukozowa, peroksydaza, AAP,
HBA, bufor fosforanowy), stabilizowany standard glukozy.
Z odpowiednio rozcieńczonej próbki pobrać 10 μl do 1 ml odczynnika zawierającego
oksydazę glukozową (Glukoza OXY DST, Alpha Diagnostics), inkubować przez 5 min w
37oC, a następnie mierzyć absorbancję przy długości fali 550 nm.