Polyclonal Rabbit Anti-Human Alpha-1-Fetoprotein Nr kat

Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Alpha-1-Fetoprotein
Nr kat. A 0008
Wydanie z 01.12.2002
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Polyclonal Rabbit Anti-Human Alpha-1-Fetoprotein (AFP), nr kat. A 0008, jest przeznaczone do
oznaczeń ludzkiej alfa-1-fetoproteiny przy użyciu testów immunocytochemicznych (1, 2, 3), ELISA (4) oraz
technik immunoprecypitacji żelowej.
Wyniki dodatnie mogą stanowić pomoc w identyfikacji nienowotworowej i nowotworowej choroby wątroby,
guzów z pęcherzyka żółtkowego oraz mieszanych nowotworów germinalnych. Ważne jest jednak, aby
przeciwciała nie stosować samodzielnie, lecz razem z panelem przeciwciał.
Interpretację wyników powinien przeprowadzić pracownik uprawniony do wykonywania takich badań, na
podstawie historii choroby pacjenta oraz innych testów diagnostycznych.
Wstęp
AFP jest glikoproteiną o masie cząsteczkowej 70 kDa, zawierającą 590 reszt aminokwasowych. Glikoproteina
ta jest syntetyzowana przez komórki embrionalnego pęcherzyka żółtkowego, wątroby płodu i płodowego
przewodu jelitowego (5, 6). AFP stanowi bardzo przydatny marker służący do wykrywania wielu wad
rozwojowych i różnego typu patologii, zarówno nowotworowych, jak i nienowotworowych (7). Ekspresję AFP
obserwuje się w około 44% przypadków raka wątrobowokomórkowego oraz w germinalnych guzach
gonadalnych i pozagonadalnych, w tym w nowotworach z pęcherzyka żółtkowego. U dorosłych
immunobarwienie normalnych tkanek nie wykrywa AFP (5). Niemniej AFP wykrywane jest w śladowych
ilościach w normalnej surowicy u dorosłych, a w większych stężeniach w surowicy matek oraz surowicy
płodowej i płynie owodniowym (8).
Odczynnik dostarczony
Oczyszczona frakcja immunoglobulin z surowicy odpornościowej królika, dostarczana w postaci płynnej.
W 0,1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3.
Stężenie białka w g/L: patrz informacja podana na etykiecie fiolki.
Wahanie wartości miana w różnych seriach A 0008 wynosi poniżej 10%. Ten poziom zmienności uzyskuje się
przez dopasowanie miana każdej z serii do miana referencyjnego przeciwciała, utrzymywanego w temperaturze
–80°C.
Immunogen
Alfa-1-fetoproteina wyizolowana z ludzkiej surowicy pępowinowej.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z ludzką alfa-1-fetoproteiną. Ślady przeciwciał powodujących skażenie zostały usunięte
przez absorpcję w fazie stałej z użyciem białek osocza ludzkiego.
Swoistość przeciwciała stwierdzono następującymi metodami:
Immunoelektroforeza krzyżowa: Łuk immunoprecypitacyjny alfa-1-fetoproteiny pojawia się jedynie w testach
z wykorzystaniem 12,5 L przeciwciała A 0008 na cm2 żelu z 2 L ludzkiej surowicy pępowinowej. W przypadku
testów z użyciem 2 L osocza ludzkiego nie pojawia się żaden łuk precypitacyjny. Barwienie: barwnik Coomassie
Briliant Blue.
ELISA: W testach z wykorzystaniem pośredniej metody ELISA nie obserwuje się znaczącej reakcji z normalnym
ludzkim osoczem.
Jak wykazano metodą immunoelektroforezy rakietkowej, przeciwciało wchodzi w reakcje krzyżowe z ekwiwalentem
białkowym AFP kotów i gnu (9).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, należy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. Ten produkt można wykorzystać w różnych technikach badawczych oraz z różnymi rodzajami próbek
i materiałów, dlatego każde laboratorium powinno dokonać walidacji systemu stosowanego do analiz.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie używać po upływie daty ważności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z
badaniem próbek pacjenta należy wykonywać odpowiednie kontrole. W przypadku uzyskania nieoczekiwanych
wyników, których nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, i istnieje podejrzenie, że
przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy skontaktować się z Działem Pomocy Technicznej naszej
firmy.
IMMUNOCYTOCHEMIA
Przygotowanie próbek
(107731-002)
Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować do znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie i
zatopionych w parafinie. Wstępne przygotowanie tkanek poprzez nadtrawienie proteinazą K lub odsłonięcie
A 0008/PL/KSS/01.12.02 s. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
epitopu w podwyższonej temperaturze nie jest wymagane. Ani podczas przygotowania, ani następującej po nim
procedury barwienia immunocytochemicznego nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki.
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciało Polyclonal Rabbit Anti-Human Alpha-1-Fetoprotein, nr kat. A 0008, można
rozcieńczać w zakresie 1:400–1:800 w przypadku jego stosowania na utrwalonych w formalinie skrawkach
parafinowych wątroby płodów ludzkich przy 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej z przeciwciałem
pierwotnym. Optymalne warunki mogą się różnić w zależności od próbki oraz metody przygotowania i powinny
być określone przez poszczególne laboratoria. Zalecaną kontrolą ujemną jest odczynnik Dako Rabbit
Immunoglobulin Fraction (Solid-Phase Absorbed), nr kat. X 0936, rozcieńczony do takiego samego stężenia białka
jak pierwsze przeciwciało. Jeśli nie wyznaczono trwałości odczynnika w aktualnie stosowanym systemie
testowym, zaleca się rozcieńczenie produktu bezpośrednio przed użyciem lub zastosowanie do tego celu
odczynnika Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4008 oraz K 4010. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do
wybranego zestawu wizualizacji.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia (1).
Tkanki normalne: W 20-dniowych zarodkach ludzkich przeciwciało znakuje komórki endodermalne wewnętrznej
powierzchni woreczka żółtkowego. W owodni także wykazano obecność AFP (10).
Tkanki patologiczne: Przeciwciało poddano testom ze 189 próbkami guzów germinalnych pobranych podczas
orchidektomii (95 przypadków nasieniaka i 94 przypadki guzów nienasieniakowych). Wszystkie nasieniaki były
AFP-ujemne, natomiast 66% pozostałych przypadków wykazywało barwienie AFP-dodatnie. Dla 21%
nowotworów zarodkowych (EC), 25% komponentów EC guzów mieszanych, wszystkich komponentów
nowotworów z woreczka żółtkowego, 20% potworniaków (T) oraz 47% komponentów T wykazano obecność
AFP. W przypadku raka przedinwazyjnego kanalików nasiennych przylegających do guza nigdy nie stwierdzono
barwienia AFP-dodatniego (1). U chorych na raka żołądka z podwyższonym poziomem AFP w surowicy, w 19
z 35 przypadków (54%) wystąpiło znakowanie przeciwciałem (2).
ELISA
Wskazówki dotyczące
sporządzania roztworu
W przypadku wykonywania testu typu „sandwich” ELISA z dwoma przeciwciałami dla alfa-1-fetoproteiny za instrukcję
może posłużyć podręcznik „Ogólna procedura wykonywania testu ELISA” (General ELISA Procedure) wydany przez
firmę Dako (zamówienie nr 30 023). Poniżej przedstawiono procedurę pomiaru AFP w surowicy (przedział 5–
200 μg/L).
1.
2.
3.
Przeciwciało opłaszczające: Przeciwciało Dako Rabbit Anti-Human Alpha-1-Fetoprotein, nr kat. A 0008,
rozcieńczone do stężenia białka 10 mg/L.
Wzorzec: Dako Alpha-1-Fetoprotein Standard, nr kat. X 0900, w rozcieńczeniu 1:2 750–1:110 000.
Rozcieńczenie badanych próbek (surowicy): 1:5.
Przeciwciało do detekcji: Dako Peroxidase-Conjugated Rabbit Anti-Human Alpha-1-Fetoprotein, nr kat.
P 0128. Zalecane rozcieńczenie 1:3 000.
Jeśli nie wyznaczono trwałości produktu w aktualnie stosowanym systemie testowym, zaleca się go rozcieńczać
bezpośrednio przed użyciem.
Piśmiennictwo
1. Jacobsen GK, Jacobsen M. Alpha-fetoprotein (AFP) and human chorionic gonadotropin (HCG) in testicular
germ cell tumours. A prospective immunohistochemical study. Acta Path Microbiol Immunol Scand Sect A
1983; 91:165–76.
2. Kodama T, Kameya T, Hirota T, Shimosato Y, Ohkura H, Mukojima T et al. Production of alpha-fetoprotein,
normal serum proteins, and human chorionic gonadotropin in stomach cancer: Histologic and
immunohistochemical analyses of 35 cases. Cancer 1981; 48:1647–55.
3. Perrone T, Steeper TA, Dehner LP. Alpha-fetoprotein localization in pure ovarian teratoma. An
immunohistochemical study of 12 cases. Am J Clin Pathol 1987; 88:713–17.
4. MacDonald DJ, Kelly AM. The rapid quantitation of serum alpha-fetoprotein by two-site micro enzyme
immunoassay. Clin Chim Acta 1978; 87:367–72.
5. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology; Londyn: Oxford
University Press; 1999. p. 9–10.
6. Mizejewski GJ. -fetoprotein as a biologic response modifier: Relevance to domain and subdomain
structure (minireview). Proc Soc Exp Biol Med 1997; 215:333–62.
7. Nunez EA. Biological role of alpha-fetoprotein in the endocrinological field: Data and hypotheses. Tumor
Biol 1994; 15:63–72.
8. Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders Company; 1995. p. 236–38.
9. Hau J, Nilsson M, Skovgaard-Jensen H-J, de Souza A, Eriksen E, Wandall LT. Analysis of animal serum
proteins using antisera against human analogous proteins. Scand J Lab Anim Sci 1990; 17:3–7.
10. Jacobsen GK, Jacobsen M, Henriksen OB. An immunohistochemical study of a series of plasma proteins
in the early human conceptus. Oncodev Biol Med 1981; 2:399–410.
Objaśnienia symboli
(107731-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
A 0008/PL/KSS/01.12.02 s. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17