Monoclonal Mouse

Monoclonal Mouse
Anti-Human
BCL10 Protein
Klon 151
Nr kat. M 7260
Wydanie z 27.11.03
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human BCL10 Protein, Clone K 151, jest przeznaczone do badań
immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje podpopulacje normalnych komórek B i T i jest przydatnym
narzędziem w podklasyfikacji chłoniaków. W chłoniakach MALT (chłoniaki strefy brzeżnej z komórek B tkanki
limfatycznej związanej z błoną śluzową) z translokacją t (1 ; 14) przeciwciało silnie znakowało jądra i
cytoplazmę, przy czym 55% chłoniaków MALT bez takiej translokacji wykazywało taki sam wzór znakowania,
chociaż na dużo niższym poziomie (1).
Identyfikacja różnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu
przeciwciał. Interpretację powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog w oparciu o historię choroby
pacjenta oraz inne testy diagnostyczne.
Wstęp
Gen BCL10 koduje białko aminokwasu 233 z domeną rekrutacji kaspazy terminalu N (CARD) wykrytą w kilku
apoptotycznych cząsteczkach regulujących. Wstępne doświadczenia in vitro przejściowej nadekspresji
sugerują, że BCL10 wywołuje apoptozę i uaktywnia jądrowy współczynnik- (NF-) (1,2). Translokacje
obejmujące gen BCL10 występują rzadko w chłoniakach MALT, stanowiąc mniej niż 5% wszystkich
przypadków i dotąd jedynie w chłoniakach MALT pojawiających się w żołądku i płucach. Translokacja t(1;14)
zestawia gen BCL10 obok genu łańcucha ciężkiego immunoglobulin i prowadzi do nadekspresji i nienormalnej
jądrowej lokalizacji białka BCL10.
Praktycznie wszystkie przypadki chłoniaka MALT noszące translokację t(11;18) także wykazują nienormalną
ekspresję jądrową BCL10, aczkolwiek na dużo niższych poziomach. Stwierdza się mutacje genu BCL10 w
małej proporcji chłoniaków komórek B, w tym chłoniaków MALT. Mutacje często prowadzą do ekspresji
okrojonego białka BCL10, jednak przy zachowaniu domeny CARD, która jest wystarczająca i niezbędna dla
uaktywnienia współczynnika NF- (2).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
dializowany wobec 0,05 mol/L Tris/HCL o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: 151 (Uwaga: klony 151 i 151.1 są identyczne) (1). Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiej IgG: Patrz: informacja podana na etykiecie fiolki.
Immunogen:
Pełnej długości rekombinant białka BCL10 (1).
Swoistość
Przy wykorzystaniu techniki Western blotting dla jednorodnej zamrożonej tkanki z migdałków, chłoniaka MALT i
komórek HEK 293, przeciwciało dominująco znakuje pasmo o masie 32 kDa i słabsze pasmo o masie 37 kDa
(1). Zastosowanie techniki Western blotting jednorodnych komórek HEK 293 transfekowanych przy użyciu
różnych produktów BCL10 wskazuje, że przeciwciało rozpoznaje epitop pomiędzy aminokwasami 122-168 (1).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
prawidłowe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8 C. Nie używać po upływie daty ważności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z
badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór
barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że
przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy
Technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować do znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie,
zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą podwyższonej temperatury
podczas odzyskiwania epitopu. Optymalne wyniki otrzymuje się przy użyciu Dako Target Retrieval Solution,
High pH, nr kat. S 3308 lub Dako Target Retrieval Solution, o pH 9, nr kat. S 2368. Mniej optymalne wyniki
otrzymuje się przy użyciu Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700 lub 10 mmol/L buforu cytrynianowego
o pH 6.0. Przygotowanie tkanek przy użyciu Dako Proteinase K, nr kat. S 3020 okazało się nieskuteczne. Nie
wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki podczas przygotowania lub następującej po nim procedury
barwienia immunocytochemicznego.
(107160-002)
M 7260/PL/CE/27.11.03 p.1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human BCL 10 Protein, nr kat. M 7260, można stosować
w rozcieńczeniu w stosunku 1:25-1:50 podczas stosowania na skrawkach ludzkich migdałków lub chłoniaków
MALT z translokacją t(1;14) utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie, stosując wzbudzane
temperaturą odzyskiwanie epitopu w Dako Target Retrieval Solution, o pH 9, nr kat. S 2368 przez 20 minut oraz
inkubację w temperaturze pokojowej z pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się
zmieniać w zależności od próbki i metody przygotowania i powinny być określone przez każde z
poszczególnych laboratoriów. Zalecaną kontrolą ujemną jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczona
do takiego samego stężenia mysiej IgG jak pierwsze przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała
i kontroli ujemnej nie została ustalona podczas rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te
odczynniki bezpośrednio przed użyciem lub rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S
0809. Kontrolę dodatnią i ujemną należy wykonać jednocześnie z testem próbki pacjenta.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 oraz K 4006. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do
wybranego zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunocytochemicznego przy wykorzystaniu
platform automatycznych, takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują barwienie ograniczone do cytoplazmy, ale w niektórych
przypadkach znakowane są również jądra (1,4).
Tkanki normalne: Przeciwciało znakuje normalne tkanki śledziony, grasicy, węzłów chłonnych, reaktywnych
migdałków i MALT wyrostka robaczkowego. Komórkami dodatnimi w kierunku obecności białka BCL10 są
zarówno komórki B jak i T z przewagą dodatnich komórek T. Z tkanek nielimfoidalnych przeciwciało znakuje
komórki powierzchniowe piersi. W następujących tkankach nie zaobserwowano żadnego znakowania:
językowej, przełyku, dwunastnicy, odbytnicy, wątroby, pęcherzyka żółciowego, trzustki, oskrzeli, płuc, tarczycy,
nadnerczy, nerek, pęcherza, szyjki macicy, macicy, jajników i jajowodów, łożyska i pępowiny, jąder, serca i
skóry (1). Znakowanie cytoplazmatyczne zaobserwowano w tkankach o dużej proliferacji np. ośrodków
zarodkowych migdałków, nabłonka walcowatego w okrężnicy, nabłonka nerek oraz limfocytów obwodowych, a
dodatkowo znakowanie jąder w pojedynczych rozrzuconych komórkach, szczególnie w nabłonku okrężnicy.
Tkanki patologiczne: W chłoniakach MALT przeciwciało silnie znakowało jądra w 4/4 przypadki z translokacją
t(1;14) i umiarkowanie znakowało jądra w 20/36 przypadków bez translokacji t(1;14); pozostałe 16 przypadków
wykazało jedynie znakowanie cytoplazmatyczne (1). W innym badaniu przeprowadzonym na 50 przypadkach
chłoniaka MALT żołądka przeciwciało znakowało jądra w 20/20 przypadków pozytywnych w zakresie
translokacji t(11;18) i w 7/30 przypadków negatywnych w zakresie translokacji t(11;18) (4). W przypadkach
chłoniaka grudkowego przeciwciało znakowało w 21/21 przypadków w cytoplazmie, a w dwóch z nich również w
jądrach. Chłoniaki strefy z komórek płaszcza (MZL) wykazywały słabe znakowanie w 14/36 przypadków.
Wszystkie 20 przypadków chłoniaków rozlanych olbrzymiokomórkowych linii B (DLBCL) w miejscach śluzowych
wykazywały słabe znakowanie cytoplazmatyczne, a DLBCL węzłowe wykazywały znakowanie
cytoplazmatyczne w 18/18 przypadków, 4 z nich również w jądrach (1).
Piśmiennictwo
1. Ye H, Dogan A, Karran L, Willis TG, Chen L, Wlodarska I, et al. BCL10 expression in normal and
neoplastic lymphoid tissue. Am J Pathol 2000;157:1147-54.
2. Wotherspoon AC, Dogan A, Du M-Q. Mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma. Curr Opin Hematol
2002;9:50-5.
3. Kawasaki C, Ohshima K, Muta H, Muta K, Deyev V, Podack ER, et al. Prognostic value of Bcl 10
rearrangement in diffuse large B-cell lymphoma. Leukemia Lymphoma 2002;43:823-6.
4. Liu H, Ye H, Dogan A, Ranaldi R, Hamoudi RA, Bearzi I, Isaacson PG, et al. T(11;18)(q21;q21) is
associated with advanced mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma that expresses nuclear BCL10.
Blood 2001;98:1182-7.
Objaśnienia symboli
(107160-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 7260/PL/CE/27.11.03 p.2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17