HER2 DUAL ISH 3-in-1 Xenograft Slides

HER2 DUAL ISH 3-in-1 Xenograft Slides
783-4422
05640300001
WSKAZANIA I ZASTOSOWANIE
Przeznaczenie
Preparaty Ventana Medical Systems' (Ventana) HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides
są przeznaczone do stosowania do pierwszej instalacji testu i/lub rozwiązywania
problemów technicznych w połączeniu z INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail
na aparatach Ventana BenchMark Series.
Szkiełka kontrolne HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides są przeznaczone do użytku
z sondami i automatami do barwienia preparatów firmy Ventana. Każdy krok protokołu
barwienia obejmuje inkubację przez ściśle określony czas w zadanej temperaturze. Na
zakończenie każdego kroku inkubacji szkiełka płukane są w automacie Ventana w celu
zatrzymania reakcji i usunięcia niezwiązanego materiału, który hamowałby pożądane
reakcje w następnych krokach. Aby zminimalizować efekt odparowywania ze szkiełka
odczynników wodnych, w automacie na preparat nanoszone jest płynne szkiełko.
Ostatnim etapem procedury jest inkubacja z chromogenem i ewentualne barwienie
kontrastowe. Więcej informacji na temat działania aparatu zawiera odpowiednia
instrukcja obsługi automatu do barwienia Ventana.
Linia
komórkowa
Produkt jest przeznaczony do stosowania w diagnostyce in vitro.
Oznaczenie INFORM HER2 Dual ISH DNA
Probe Cocktail
Calu-3
Streszczenie i informacje ogólne
Preparaty Xenograft slides mogą być przydatne w podstawowej walidacji metody obróbki
wykorzystywanej w barwieniu preparatów za pomocą INFORM HER2 Dual ISH DNA
Probe Cocktail oraz do rozwiązywania problemów technicznych w razie problemów
z tkankami. Firma Ventana oferuje preparaty HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides,
z których każdy zawiera trzy skrawki ksenograftów utrwalone w parafinie i zatopione
w jednym bloku parafiny. Ksenografty zostały wybrane na podstawie charakterystyk
opisanych w literaturze dotyczącej nadmiernej ekspresji białka oraz liczby kopii genu.
Użycie tych preparatów tkanki ksenograftów jest korzystne, ponieważ są bardzo dobrze
scharakteryzowane pod względem liczby kopii HER2 i chromosomu 17, zostały także
przygotowane do analizy w kontrolowany sposób. HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft
Slides są sprzedawane osobno, poza zestawami sond i zestawami do detekcji, i nie są
konieczne do rutynowego stosowania w teście. Ponieważ każda normalna komórka
zawiera dwie kopie HER2 i Chromosome 17, nie istnieje żadna prawdziwa, ujemna
kontrola tkankowa.
Calu-3
ZR-75-1
ZR-75-1
MCF 7
MCF 7
Rysunek 1. Schemat układu HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides
Linia
komórkowa
Poziom
ekspresji
białka
HER2
Przybliżona
liczba kopii
genu HER2, wg
FISH
Średni
stosunek
HER2/Chr1
7, wg FISH
Średni
stosunek
HER2/Chr1
7, wg DISH
Calu-3
3+
>6 kopii/jądro
5,01
5,53
ZR-75-1
1+
3 kopie/jądro
1,36
1,34
Tabela 2. Charakterystyczny wzór odczynu HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides
MCF 7
0
1–2 kopie/jądro
1,0
0,85
MATERIAŁY I METODY
Tabela 1. Charakterystyka HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides
Dostarczane odczynniki
Zasady procedury
W ogólnym przypadku hybrydyzacja in situ (ISH) umożliwia uwidocznienie wykrywanych
sekwencji DNA lub RNA w wyniku sekwencyjnej hybrydyzacji znakowanych sond DNA
lub RNA z wykrywanym fragmentem, przeciwciał pierwotnych skierowanych przeciwko
znakowanym sondom, przeciwciał wtórnych z przeciwciałami pierwotnymi i kompleksu
enzymatycznego oraz substratu chromogenicznego. Między kolejnymi etapami reakcji
przeprowadza się operacje płukania. Aktywacja chromogenu przez enzym wywołuje
reakcję, której produkt jest widoczny w miejscu docelowym. Następnie można wykonać
barwienie kontrastowe i nakryć preparat szkiełkiem nakrywkowym. Wyniki reakcji ocenia
się w mikroskopii świetlnej.
2016-02-09
FT0700-430a
1/3
Każde szkiełko HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slide zawiera trzy utrwalone
w formalinie i zatopione w parafinie różne linie komórek ludzkiego raka — każda z linii
charakteryzowała się innym statusem dynamicznym genu HER2 (Tabela 1). Linie te
zostały wygenerowane jako nowotwory (ksenografty) w myszach SCID. Materiał
ksenograftów pocięto na skrawki o grubości 4 µm i umieszczono na szkiełkach
z dodatnim ładunkiem elektrostatycznym. Dostępnych jest dziesięć preparatów,
z których każdy zawiera 3 różne ksenografty w jednym skrawku parafinowym.
Materiały i odczynniki potrzebne, ale niedostarczane
Wymienione niżej odczynniki i materiały potrzebne do wykonania odczynu nie są
dostarczane:
1.
2.
Ventana INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail [REF 800-4422]
Ventana ultraView SISH DNP Detection Kit [REF 800-098]
1004915PL Rev D
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
Ventana ultraView Red ISH DIG Detection Kit [REF 800-505]
Ventana HybReady Solution [REF 780-4409]
Ventana ultraView Silver Wash II [REF 780-003 lub odpowiednik]
Ventana ISH Protease 2 [REF 780-4148]*
Ventana ISH Protease 3 [REF 780-4149]*
Ventana Hematoxylin II Counterstain [REF 790-2208]*
Ventana Bluing Reagent [REF 760-2037]*
Ventana Reaction Buffer (10X) [REF 950-300]
Ventana SSC (10X) [REF 950-110]
Ventana EZ Prep Reagent (10X) [REF 950-102]
Ventana Cell Conditioning 2 (Pre-dilute) [REF 950-123]
Ventana ULTRA CC2 (Pre-dilute) [REF 950-223]
Ventana Liquid Coverslip (High Temperature) Odczynnik [REF 650-010]
Ventana ULTRA LCS [REF 650-210]
Automat do barwienia preparatów BenchMark Series
Etykiety z kodami kreskowymi
Ksylen (klasy histologicznej)
Woda dejonizowana lub destylowana
Środek do trwałego nakrywania preparatów (Permount Fisher, nr kat. SP15-500
lub równoważnik)
Szkiełka nakrywkowe (wystarczające do nakrycia skrawków tkanek: takie jak VWR
nr kat. 48393-60 lub równoważne)
Aparat do nakrywania szkiełkami nakrywkowymi (taki jak Tissue-Tek SCA)
Naczynia lub łaźnia do barwienia
Minutnik (pomiar w odstępach 2–10 minut)
Suszarka umożliwiająca utrzymanie temperatury 60°C
Mikroskop świetlny
* Zależnie od potrzeb w konkretnym zastosowaniu.
obróbce razem z próbkami badanymi, zgodnie z instrukcjami zamieszczonymi
w ulotkach dołączonych do INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail. Ocenę
punktową należy przeprowadzać zgodnie z instrukcją podaną w ulotce dołączonej do
opakowania odczynnika INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail. Parametry
procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane zgodnie
z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi. Pozostałe parametry działania automatów do
barwienia zostały wstępnie zaprogramowane fabrycznie.
Procedury wykonywania barwienia w automatach firmy Ventana przebiegają
następująco (bardziej szczegółowe informacje oraz opis dodatkowych opcji protokołu
zawiera Instrukcja obsługi). Zalecana procedura barwienia opisana została w ulotce
zestawu INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail.
Automat do barwienia preparatów BenchMark Series
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Procedura odwodnienia
Uwaga: Chromogen Fast Red jest rozpuszczalny w alkoholu. Nie używać do
odwadniania preparatów łaźni alkoholowych lub acetonowych. Nie moczyć przez
dłuższy czas w łaźniach ksylenowych.
1.
Przechowywanie i sposób postępowania
Przechowywać w temperaturze pokojowej (15°C–30°C). Nie zamrażać.
Szkiełka HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides posiadają datę ważności. Prawidłowo
przechowywane szkiełka pozostają stabilne do daty określonej na etykiecie. Nie należy
używać szkiełek po upływie terminu ważności dla danego sposobu przechowywania.
Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. W razie
stwierdzenia objawów niestabilności produktu należy niezwłocznie skontaktować się
z lokalnym przedstawicielem serwisu.
Nałożyć etykietę z kodem kreskowym odpowiadającym protokołowi detekcji, który
ma być przeprowadzony.
Załadować odczynniki INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail, z ultraView
SISH DNP i ultraView Red ISH DIG Detection Kits, oraz odczynniki pomocnicze
do tacy na odczynniki i umieścić tacę w automacie do barwienia. Sprawdzić płyny
i zbiornik na zlewki.
Aby zapobiec przepełnieniu, opróżnić pojemnik na zlewki przed rozpoczęciem
oznaczenia.
Przed rozpoczęciem oznaczenia napełnić butelki na bufory reakcyjne. Butelki
muszą być pełne.
Załadować preparaty do automatu do barwienia.
Rozpocząć wykonywanie barwienia.
Po zakończeniu serii wyjąć preparaty z automatu.
Przejść do procedury odwodnienia.
2.
3.
Aby usunąć płynne szkiełko, opłukać preparaty w 2 zmianach łagodnego roztworu
detergentu do mycia naczyń (nie używać detergentów przeznaczonych do
zmywarek automatycznych).
Dokładnie przepłukać preparaty wodą destylowaną. Płukać przez około 1 minutę.
Strząsnąć nadmiar wody.
Umieścić preparaty w suszarce (45–60°C) do wysuszenia lub wysuszyć na
powietrzu w temperaturze pokojowej. Czas suszenia w suszarce waha się od
10 minut do godziny. Przed pokryciem upewnić się, że preparaty są całkiem
suche.
Przenieść preparaty do kąpieli ksylenowej na około 30 sekund.
Umieścić szkiełka nakrywkowe na preparatach. Informacje dotyczące środków do
zatapiania preparatu zgodnych z oznaczeniem, patrz ulotka INFORM HER2 Dual
ISH DNA Probe Cocktail.
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
4.
5.
1.
2.
Procedury kontroli jakości
3.
4.
5.
6.
Produkt jest przeznaczony do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
Przed rozpoczęciem pomiarów opróżnić pojemnik na zlewki. W urządzeniu
BenchMark XT pomiar nie rozpocznie się, jeśli przed rozpoczęciem pomiaru nie
zostanie opróżniony pojemnik na zlewki.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały
potencjalnie niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych
środków ostrożności.
Podczas pracy z odczynnikami należy zachować środki ostrożności. Należy nosić
jednorazowe rękawiczki i odpowiednią odzież ochronną.
Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. W przypadku
kontaktu z wrażliwymi miejscami obficie spłukiwać wodą. Unikać wdychania
odczynników.
Unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników, ponieważ mogłoby to
doprowadzić do uzyskania błędnych wyników.
Informacje na temat zalecanej metody likwidacji należy uzyskać od odpowiednich
instytucji lokalnych lub krajowych.
Próbki do kontroli dodatniej i ujemnej
Szkiełka HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides powinny być wybarwiane w trakcie
wstępnej weryfikacji oznaczenia i/lub działań związanych z rozwiązywaniem problemów
jako pomoc w ocenie wydajności oznaczenia na znanych próbkach dodatnich. Preparaty
powinny być stosowane wyłącznie w celu monitorowania właściwej wydajności urządzenia,
oprogramowania i testów oraz odczynników testowych, a nie pomocniczo do formułowania
swoistych rozpoznań próbek pochodzących od pacjentów. Jeżeli nie udaje się potwierdzić
pozytywnego barwienia dodatnich wewnętrznych kontroli tkankowych badanego materiału
(próbka pacjenta), należy uznać, że wyniki preparatów testowych są nieważne.
Niewyjaśnione rozbieżności
INSTRUKCJA STOSOWANIA
Niewyjaśnione rozbieżności w wynikach kontroli należy niezwłocznie zgłaszać do lokalnego
przedstawiciela serwisu. Jeśli jakość wyników kontrolnych nie jest zgodna ze specyfikacją,
wyniki uzyskane dla preparatów z próbek pochodzących od pacjentów są nieważne.
Zob. sekcja Rozwiązywanie problemów w niniejszej ulotce. Należy zidentyfikować
i wyeliminować problem, a następnie powtórzyć badanie próbek pochodzących od pacjenta.
Procedura postępowania
Interpretacja wyników
Szkiełka HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides przeznaczone są do użycia
w automatach do barwienia firmy Ventana razem z zestawami Ventana INFORM HER2
Dual ISH DNA Probe Cocktail i odczynnikami pomocniczymi. Szkiełka należy poddawać
Zautomatyzowana procedura hybrydyzacji in situ preparatów w aparatach Ventana
powoduje wytrącanie się dyskretnego srebrnego i czerwonego produktu reakcji
w miejscach występowania fragmentów zlokalizowanych przez oznakowaną sondy.
7.
2016-02-09
FT0700-430a
2/3
1004915PL Rev D
Przed przystąpieniem do interpretacji wyników wykwalifikowana osoba odczytująca
z doświadczeniem w procedurach hybrydyzacji in situ musi dokonać oceny odczynów
kontrolnych i zakwalifikować preparat do badania.
OGRANICZENIA
2.
3.
4.
Wykonywanie barwień ISH jest wieloetapowym procesem diagnostycznym
wymagającym specjalistycznego przeszkolenia w doborze odpowiednich
odczynników, wyborze tkanek, utrwalaniu i obróbce, przygotowaniu preparatów
ISH i interpretacji wyników barwienia.
Nadmierne lub niecałkowite barwienie kontrastowe może utrudniać prawidłową
interpretację wyników.
Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego wyniku musi być prowadzona
w kontekście historii klinicznej, morfologii i innych kryteriów histopatologicznych.
Barwienie należy wykonać w akredytowanej pracowni histopatologicznej, pod
nadzorem histopatologa odpowiedzialnego za przeglądanie i ocenę wybarwionych
preparatów i właściwe wykonanie dodatnich i ujemnych prób kontrolnych.
Podczas badań należy przestrzegać zasad dobrej praktyki laboratoryjnej,
a w szczególności stosować procedury, sprzęt i materiały wskazane w ulotce
dołączonej do opakowań produktu INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail.
2.
Szkiełka HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Control Slides są przeznaczone do
używania z odczynnikami INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail w celu
monitorowania zautomatyzowanego barwienia metodą ISH w trakcie wstępnej
weryfikacji i/lub działań związanych z rozwiązywaniem problemów. Możliwe, że
szkiełka Xenograft zawarte w produkcie zostały utrwalone lub były poddane obróbce
w inny sposób niż próbki badane, dlatego zapewniają one kontrolę wszystkich
odczynników i etapów procedury z wyjątkiem utrwalania i obróbki tkanki.
Warunkiem uzyskania prawidłowego wyniku testu jest ścisłe przestrzeganie
podanych kryteriów punktacji.
PODSUMOWANIE SPODZIEWANYCH WYNIKÓW
1.
2.
3.
4.
5.
6.
FT0700-430a
3/3
Jeśli szkiełko z ksenograftem daje wynik ujemny, należy sprawdzić, czy preparat
został opatrzony właściwym kodem kreskowym. Sprawdzić także, czy aparat,
dozowniki i butle z buforami działają prawidłowo.
Szczegółowe zalecenia dotyczące oznaczenia, patrz ulotka opakowania produktu
INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail, sekcja Rozwiązywanie problemów.
Środki zaradcze opisano w sekcji Procedura postępowania w Instrukcji obsługi
automatu do barwienia. Odpowiednie informacje można też uzyskać w lokalnym
przedstawicielstwie serwisu.
PIŚMIENNICTWO
1.
2.
3.
5.
6.
7.
8.
Szkiełka Ventana HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides, zestawy detekcyjne,
sondy ISH i odczynniki pomocnicze stosowane w automacie do barwienia preparatów
Ventana powodują wytrącanie srebrnego i czerwonego osadu w miejscach
występowania wykrywanych sekwencji zlokalizowanych przez sondy ISH.
Jeśli system i odczynniki działają prawidłowo, oczekuje się, że kontrola Calu-3
da sygnał HER2 SISH o najwyższej intensywności w różnych komórkach guzów,
a kontrole ZR-75-1 i MCF7 będą dawać sygnały dyskretne (Tabela 2).
W firmie Ventana zoptymalizowano i przetestowano specyficzność i czułość
detekcji sekwencji. Jednak każda sonda ISH musi być zweryfikowana przez
użytkownika w celu zapewnienia prawidłowego barwienia.
Powtarzalność barwienia na szkiełkach HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides
w ramach jednej serii określono poprzez przetestowanie 3 preparatów w dniu 1 i 2
oraz 2 preparatów w dniach 3–5 w urządzeniach BenchMark, BenchMark XT oraz
BenchMark ULTRA w ciągu 5 nienastępujących po sobie dni. Na wszystkich
przetestowanych szkiełkach uzyskano zadowalający odczyn. Użytkownicy powinni
zweryfikować powtarzalność w ramach jednej serii, wykonując w jednej serii
barwienie dla kilku zestawów skrawków seryjnych z małą, średnią i dużą ilością
sekwencji wykrywanych.
Powtarzalność barwienia na szkiełkach HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides
między seriami określono poprzez przeanalizowanie 3 preparatów na szkiełkach
HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft Slides w dniu 1 i 2 oraz 2 preparatów w dniach
3–5 w ciągu 5 nienastępujących po sobie dni w sześciu urządzeniach
(2 urządzeniach BenchMark, 2 urządzeniach BenchMark XT oraz 2 urządzeniach
BenchMark ULTRA). Na wszystkich przetestowanych szkiełkach uzyskano
zadowalający odczyn. Użytkownicy powinni zweryfikować powtarzalność między
różnymi seriami, wykonując w różnych dniach barwienie dla kilku zestawów
skrawków seryjnych z małą, średnią i dużą ilością sekwencji wykrywanych.
Linie komórek ludzkich użyte na szkiełkach HER2 Dual ISH 3-in-1 Xenograft
Slides zostały scharakteryzowane metodą FISH za pomocą testu Abbott/Vysis
PathVysion. Uzyskane wyniki (Tabela 1) są zgodne z danymi uzyskanymi
w poprzednich badaniach (np.1–8).
2016-02-09
3.
4.
Ograniczenia swoiste
1.
1.
2.
Ograniczenia ogólne
1.
ROZWIĄZYWANIE PROBLEMÓW
Kraus MH, Popescu NC, Amsbaugh C, King CR. Overexpression of the EGF
receptor-related proto-oncogene erbB-2 in human mammary tumor cell lines by
different molecular mechanisms. EMBO J 1987;6:605-610.
Kury FD, Schneeberger C, Sliutz G, Kubista E, Salzer H, et al. Determination of
HER2/neu amplification and expression in tumor tissue and cultured cells using
a simple, phenol free method for nucleic acid isolation. Oncogene 1990;91403-1408.
Kallioniemi OP, Kallioniemi A, Kurisu W, Thor A, et al. ERBB2 amplification in
breast cancer analyzed by fluorescence in situ hybridization. PNAS USA
1992;89:5321-5325.
Barlund M, Tirkkonene M, Forozan F, Tanner MM, Kallioniemi O, et al. Increased
copy number at 17q22-q24 by CGH in breast cancer is due to high-level
amplification of two separate regions. Genes Chrom Cancer 1997;20:372-376.
Revillion F, Hornez L, Peyrat JP. Quantification of c-erbB-2 gene expression in
breast cancer by competitive RT-PCR. Clin Chem 1997;11:2114-2120.
Konecny G, Pauletti G, Pegram M, Untch M, Dandekar S, et al. Quantitative
association between HER-2/neu and steroid hormone receptors in hormone
receptor-positive primary breast cancer. JNCI 2003;95:142-153.
Nathanson DR, Nash GM, Chen B, Gerald W, Paty PB. Detection of HER-2/neu
gene amplification in breast cancer using a novel polymerase chain reaction/ligase
detection reaction technique. J Am Col Surg 2003;3:419-425.
Murthy SK, Magliocco AM, Demetrick DJ. Copy number analysis of c-erb-B2
(HER-2/neu) and Topoisomerase IIα genes in breast caracinoma by quantitative
real time polymerase chain reaction using hybridization probes and fluorescence in
situ hybridization. Arch Pathol Lab Med 2005;129:39-46.
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
INFORM, ultraView, BenchMark, Ventana oraz logo Ventana są znakami towarowymi
firmy Roche.
Pozostałe znaki towarowe stanowią własność odpowiednich właścicieli.
DANE TELEADRESOWE
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
1004915PL Rev D