Nr kat. IR648
Transkrypt
Nr kat. IR648
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD10 Klon 56C6 Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR648 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD10, klon 56C6, Ready-to-Use (Link), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało przydatne jest w identyfikacji chłoniaka Burkitta (1, 2), chłoniaku grudkowym (1, 3, 4) poza stopniem III (5), ostrej białaczki limfoblastycznej z prekursorów komórek B (1, 2) oraz raku nerek typu jasnokomórkowego (6, 7). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Synonimy antygenu Wspólny antygen ostrej białaczki limfocytowej (CALLA, common acute lymphocytic leukemia antigen), obojętna endopeptydaza, enkefalinaza, neprylizyna (7–9). Podsumowanie i wyjaśnienie CD10 to białko o masie 90–100 kDa, naleŜące to rodziny metaloproteaz transmembranowych typu II, do której naleŜą równieŜ antygeny leukocytowe CD 13 i CD26, oraz aminopeptydaza A. Gen kodujący CD10 znajduje się na chromosomie 3. CD10 to enzym zaleŜny od cynku i uwaŜa się, Ŝe hamuje odpowiedzi komórkowe na hormony peptydowe (8, 9). W komórkach limfatycznych CD10 ulega ekspresji w niedojrzałych prekursorowych komórkach T i B, ale zanika w komórkach dojrzałych. JednakŜe CD10 ponownie ulega ekspresji w komórkach B ulegających proliferacji oraz dojrzalych neutrofilach (8–10). W zezłośliwieniach limfatycznych CD10 ulega ekspresji w ostrej białaczce limfatycznej (ALL) wywodzącej się z prekursorowych komórek B, ale występuje równieŜ w części ALL z komórek T (1, 2). Dodatkowo antygen moŜe równieŜ ulegać ekspresji w rozlanym chłoniaku z komórek B (DLBCL) (1, 10) oraz, rzadko, w chłoniaku z komórek płaszcza (3). Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Odczynnik dostarczony Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: 56C6. Izotyp: IgG1. Immunogen Rekombinowane białko fuzyjne odpowiadające zewnętrznej domenie glikoproteiny CD10. Swoistość W teście Western blot lizatu komórek łoŜyska przeciwciało znakuje pasmo o masie 93 kDa, odpowiadające CD10 (11). Środki ostroŜności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł‚ biologicznych, naleŜy stosować właściwe procedury postępowania. 4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne. 5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami. Przechowywanie (118488-002) Dako Denmark A/S Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. IR648/PL/MNI/2009.12.04 str. 1/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Procedura barwienia oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki i wątrobę, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750). Interpretacja wybarwienia Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn błonowy. Charakterystyka działania Tkanki prawidłowe W wątrobie, kanaliki Ŝółciowe odczyn z zakresu od umiarkowanego do silnego. W migdałkach komórki B ośrodków rozmnaŜania wykazują odczyn słaby do umiarkowanego. Przeciwciało znakuje komórki macierzyste w szpiku kostnym, podgrupę niedojrzałych komórek B w szpiku kostnym i neutrofile (8, 9, 11). Przeciwciało znakuje takŜe komórki kłębuszkowe i kanalikowe nerek, ośrodki rozmnaŜania w blaszce właściwej okręŜnicy, rąbki szczoteczkowe enterocytów w jelicie cienkim, nabłonek rąbka szczoteczkowego pęcherzyków Ŝółciowych, śródmiąŜszowe komórki zrębu płuca, komórki Schwanna, międzypęczkowe komórki zrębu w mięśniach poprzecznie prąŜkowanych, fibroblasty, wielojądrowe trofoblasty i cytotrofoblasty łoŜyska, nabłonek gruczołowy stercza oraz płyn gruczołu krokowego, komórki zrębu w śluzówce macicy oraz komórki mieloepitelialne sutka (6, 7, 9, 11). Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakowało 3/3 i 2/3 chłoniaki Burkitta oraz 4/5 i 30/33 ostrych białaczek limfoblastycznych z prekursorowych komórek B (B-ALL) (1, 2). Przeciwciało znakowało 22/28, 12/15, 9/10 i 10/11 chłoniaków grudkowych (1, 3, 4, 11) i 12/15 chłoniaków grudkowych stopnia I, natomiast w przypadku stopnia II chłoniaków grudkowych słabą ekspresję stwierdzono w 5/6 przypadków (5). Dodatkowo przeciwciało znakowało 41/46 raków nerkowokomórkowych (6) i wszystkie przerzutowe raki jasnokomórkowe nerek (7). Ponadto ostra białaczka limfoblastyczna z prekursorów komóre T (T-ALL) znakowana była w 2/5 przypadkach (6) a rozlany chłoniak z duŜych komórek B w 11/11 przypadków (10). (118488-002) Dako Denmark A/S IR648/PL/MNI/2009.12.04 str. 2/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Piśmiennictwo 1. Kaufmann O, Flath B, Späth-Schwalbe, Possinger K and Dietel M. Immunohistochemical detection of CD10 with monoclonal antibody 56C6 on paraffin sections. Am J Clin Pathol 1999;11:117-22. 2. Chu PG, Chang KL, Weiss LM and Arber DA. Immunohistochemical detection of CD10 in paraffin sections of hematopoietic neoplasms. App Imm & Mol Morphol. 2000;8:257-62 3. Chen CC, Raikow RB, Sonmez-Alpan E and Swerdlow S. Classification of small B-cell lymphoid neoplasms using a paraffin section immunohistochemical panel. App Imm & Mol Morphol 2000;8:1-11. 4. Lorsbach RB, Shay-Seymore D, Moore J, Banks PM, Hasserjian RP, Sandlund JT and Behm FG. Clinicopathologic analysis of follicular lymphoma occurring in children. Blood 2002;99:1959-64. 5. Eshoa C, Perkins S, Kampalath B, Shidham, Juckett M, and Chang C-C. Deceased CD10 expression in grade III and in interfollicular infiltrates of follicular lymphomas. Am J Clin Pathol 2001;115:862-7 6. Chu P and Arber DA. Paraffin section detection of CD10 in 505 nonhematopoietic neoplasms. Frequent expression in renal cell carcinoma and endometrial stromal sarcoma. Am J Clin Patholl 2000;113:374-82. 7. Ordi J, Romagosa C, Tavassoli FA, Nogales F, Palacin A, Condom E, et al. CD10 expression in epithelial tissue and tumors of the gynecologic tract. A useful marker in the diagnosis of mesonephric, trophoblastic, and clear cell tumors. Am J Surg Pathol 2003;27:178-86. 8. Béné MC, Faure GC and the GEIL (Group D’Etude Immunologique des Luecémies). CD10 in acute leukemias. Haematologica 1997;82:205-10. 9. Leong AS-Y, Cooper K and Leong FJW-M. CD10. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Greenwich medical media; 2003. p. 77-78. 10. Le Gouill S, Talmant P, Touzeau C, Moreau A, Garand R, Juge-Morineau N, et al. The clinical presentation and prognosis of diffuse large B-cell lymphoma with t(14:18) and 8q24/c-MYC rearrangement. The hematology journal 2007;92:1335-42 11. McIntosh GG, Lodge AJ, Watson P, Hall AG, Wood K, Anderson JJ et al. NCL-CD10-270: A new monoclonal antibody recognizing CD10 in paraffin-embedded tissue. Am J Pathol 1999;154:77-82 Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania ZuŜyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Zawartość wystarcza na <n> testów Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii (118488-002) Dako Denmark A/S IR648/PL/MNI/2009.12.04 str. 3/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17