Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 7 Clone OV-TL

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Cytokeratin 7
Clone OV-TL 12/30
Nr kat. M7018
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 7, Clone OV-TL 12/30, jest przeznaczone do badań
immunohistochemicznych. Przeciwciało to, znakując gruczołowe i przejściowe komórki nabłonkowe jest
przydatnym narzędziem do identyfikacji raków gruczołowych płuca (1, 2), piersi i śluzówki macicy, tarczycy (1,
3) i jajnika (1, 4), jak równieŜ raków z komórek przejściowych (nabłonka dróg moczowych) (1) oraz raków z
komórek barwnikoopornych nerki (5). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być
uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez
doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Cytokeratyna 7 naleŜy do włókien pośrednich tworzących cytoszkielet praktycznie wszystkich komórek jądrzastych.
W przeciwieństwie do innych włókien pośrednich, cytokeratyny (CK) zbudowane są z bardzo złoŜonej rodziny
polipeptydów o masie cząsteczkowej od 40 do 68 kDa. CK ogólnie uwaŜa się za najwaŜniejsze markery
róŜnicowania się nabłonka. Dotychczas w róŜnych nabłonkach występujących u człowieka odkryto 20 róŜnych
polipeptydów cytokeratynowych (6, 7). CK moŜna podzielić na 2 podrodziny: kwaśny typ A (klasa I) oraz obojętnozasadowy typ B (klasa II). CK7, białko o masie 54 kDa, naleŜy do podrodziny obojętno-zasadowego typu B, a jej
występowanie ogranicza się do nabłonka gruczołowego i przejściowego (6).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
oczyszczony przez dializę z 0,05 mol/L Tris/HCL o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: OV-TL 12/30 (1). Izotyp: IgG1, kappa.
StęŜenie IgG u myszy: zob. informację podaną na etykiecie fiolki.
StęŜenie białek w róŜnych partiach moŜe się róŜnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. W celu
zapewnienia jednolitości odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy uŜyciu róŜnych partii
produktu, miano kaŜdej partii jest porównywane i dostosowywane do partii referencyjnej.
Immunogen:
OTN 11, linia komórek raka jajnika (1, 8).
Swoistość
W jedno- i dwuwymiarowej SDS-PAGE oraz immunoblotingu preparatów cytoszkieletu z kilku hodowli
komórkowych i tkanek ekstrahowanych preparatem Triton X-100, przeciwciało wyznakowało pasmo 54 kDa
odpowiadające cytokeratynie 7 (1).
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych naleŜy stosować
prawidłowe procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą
bądź oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8°C. Nie uŜywać po dacie waŜności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są
przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować te warunki. Nie ma
oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek
pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór barwienia, którego
nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, Ŝe przyczyną moŜe być
problem z przeciwciałem, naleŜy niezwłocznie skontaktować się z działem pomocy technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało moŜna stosować dla znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie
lub utrwalaczu Bouin'a, zatopionych w parafinie (3). Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą
proteinazy K lub odzyskiwania epitopu wzbudzanego temperaturą. Optymalne wyniki wzbudzanego
temperaturą odzyskiwania epitopu w tkankach utrwalonych w formalinie uzyskuje się stosując Dako Target
Retrieval Solution, o wysokim pH, nr kat. S3308, lub 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA, o pH 9,0. Nieco
gorsze wyniki uzyskuje się stosując Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S1700, lub bufor cytrynianowy 10
mmol/L, o pH 6.0. W czasie tej procedury lub w czasie późniejszej procedury wybarwiania
immunohistochemicznego nie moŜna dopuścić do wyschnięcia skrawków tkankowych.
Skrawki zamroŜone i przygotowanie komórek: Przeciwciało moŜna uŜyć do znakowania mroŜonych skrawków
(1, 3) oraz utrwalonych rozmazów komórek (9).
Procedura barwienia
(106756-002)
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 7, nr kat. M7018, moŜna stosować w
rozcieńczeniu w stosunku 1:50-1:100 podczas stosowania na skrawkach ludzkiego sutka utrwalonych w
M7018/PL/KRM/2008.09.30 p. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
formalinie i zatopionych w parafinie, stosując wzbudzane temperaturą odzyskiwanie epitopu w Dako Target
Retrieval Solution, o wysokim pH, nr kat. S3308 przez 20 minut oraz inkubację w temperaturze pokojowej z
pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od próbki i
metody przygotowania i powinny być określone przez kaŜde z poszczególnych laboratoriów. Zalecaną kontrolą
ujemną jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X0931, rozcieńczona do takiego samego stęŜenia mysiego IgG jak pierwsze
przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona podczas
rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed uŜyciem lub
rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S0809. Kontrolę dodatnią i ujemną naleŜy wykonać
jednocześnie z testem próbki pacjenta.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu Dako LSAB™+/HRP, nr kat. K0679 oraz zestawów Dako
EnVision™+/HRP, nr kat. K4004 oraz K4006. Zestaw Dako APAAP, nr kat. K0670, stanowi dobrą alternatywę
dla zamroŜonych skrawków i przygotowywania komórek, jeśli pod uwagę brane jest barwienie peroksydazy
endogennej. NaleŜy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunohistochemicznego przy wykorzystaniu
platform automatycznych, takich jak Dako Autostainer.
Ograniczenia specyficzne
dla produktu
Charakterystyka działania
Mogą wystąpić odstępstwa od zwykle oczekiwanego wzoru reaktywności, np. u pacjentów z ostrą i przewlekłą
cholestazą obserwowano hepatocyty zawierające CK 7 (1).
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia.
Tkanki normalne: Przeciwciało zawsze znakuje liczną grupę jednowarstwowych, wielowarstwowych i
przejściowych nabłonków, m.in. przewody Ŝółciowe i trzustkowe, pęcherzyki płucne, błonę śluzową macicy,
dalsze kanaliki oraz kanaliki zbiorcze nerek (nabłonek jednowarstwowy), nabłonek oskrzeli i oskrzelików,
przewody gruczołu krokowego, komórki powierzchniowe jajowodu i kanału szyjki macicy, gruczoły oskrzelowe,
sutkowe, ślinowe, potowe i kanału szyjki macicy, trofoblast łoŜyskowy (nabłonek wielokomórkowy) oraz
wszystkie warstwy komórek nabłonka dróg moczowych (nabłonek przejściowy) (3). Ponadto przeciwciało
znakuje surowiczy nabłonek jajnika (4); obserwowano takŜe znakowanie powierzchniowych i podstawnych
komórek gruczołu krokowego i komórek mięśniowo-nabłonkowych (3). W mroŜonych skrawkach wykazano
natomiast, Ŝe przeciwciało znakuje nabłonek sieci jądra, nabłonek najądrza oraz powierzchniowy nabłonek
Ŝołądka i dwunastnicy (1). Przeciwciało nie znakuje natomiast tkanek nienabłonkowych, takich jak tkanka
łączna, naczynia krwionośne i tkanka limfoidalna (1).
Tkanki patologiczne: W jajniku ludzkim przeciwciało znakowało torbielak prosty (12/12 przypadków),
torbielakogruczolak (12/12 przypadków) oraz rak (60/60 przypadków) (4). Dodatkowo, pozytywny wynik
uzyskano dla raka błony śluzowej macicy (6/6 przypadków), raka szyjki macicy (4/4 przypadki), raka piersi (3/3
przypadki) oraz raka tarczycy (3/3 przypadki) (3). Znakowanie przeciwciałem uzyskano równieŜ w mroŜonych
tkankach Ŝeńskich narządów rozrodczych: dla guza Brennera jajnika (1/1 przypadek), surowiczego (21/21
przypadków) i śluzowatego torbielakogruczolakoraka (6/6 przypadków), niesklasyfikowanego raka jajnika (4/4
przypadki), raka endometrialnego (8/8 przypadków), gruczolakoraka płaskokomórkowego szyjki macicy (1/1
przypadek), przerzutu gruczolakoraka jajowodu do szyjki macicy (1/1 przypadek) oraz kosmówczaka łoŜyska
(1/1 przypadek) (1). W płucu ludzkim, znakowanie przeciwciałem uzyskano dla gruczolakoraka o róŜnym
stopniu zróŜnicowania (20/20 przypadków), w tym w 4 przypadkach raka oskrzelowo-pęcherzykowego,
znakowania nie uzyskano natomiast dla raka płaskokomórkowego (24/24 przypadki), anaplastycznego raka
wielkokomórkowego (6/6 przypadków) (2) ani międzybłoniaka (10/10 przypadków) (9). W przewodzie
pokarmowym człowieka, znakowanie przeciwciałem uzyskano dla róŜnie zróŜnicowanego gruczolakoraka (5/6
przypadków) oraz słabo zróŜnicowanego raka sygnetowatokomórkowego Ŝołądka (3/3 przypadki), a takŜe w 1/1
przypadek raka trzustki; nie uzyskano natomiast znakowania w anaplastycznych rakach Ŝołądka, jelita
cienkiego oraz odbytnicy ani w gruczolakorakach okręŜnicy o róŜnym stopniu zróŜnicowania (3). W przypadku
skrawków zamroŜonych znakowanie uzyskano dla anaplastycznego gruczolakoraka Ŝołądka (1/1 przypadek),
gruczolakoraka jelita czczego (1/1 przypadek), rakowiaków jelita (2/2 przypadki), wątrobiaka zarodkowego (1/1
przypadek) oraz dla raka wątrobowokomórkowego (3/8 przypadków). Zgodnie z oczekiwaniami, dla raków z
komórek przejściowych znakowanie wystąpiło w 4/4 przypadkach (1). Dodatni wynik znakowania przeciwciałem
uzyskano dla raków z komórek barwnikoopornych nerki (6/6 przypadków), natomiast całkowicie ujemny dla
gruczolaka kwasochłonnego (8/11 przypadków) (5).
Piśmiennictwo
1. Ramaekers F, van Niekerk C, Poels L, Schaafsma E, Huijsmans A, Robben H, et al. Use of monoclonal
antibodies to keratin 7 in the differential diagnosis of adenocarcinomas. Am J Pathol 1990;136:641-55.
2. van de Molengraft FJJM, van Niekerk CC, Jap PHK, Poels LG. OV-TL 12/30 (keratin 7 antibody) is a
marker of glandular differentiation in lung cancer. Histopathology 1993;22:35-8.
3. van Niekerk CC, Jap PHK, Ramaekers FCS, van de Molengraft F, Poels LG. Immunohistochemical
demonstration of keratin 7 in routinely fixed paraffin-embedded human tissues. J Pathol 1991;165:145-52.
4. van Niekerk CC, Boerman OC, Ramaekers FCS, Poels LG. Marker profile of different phases in the
transition of normal human ovarian epithelium to ovarian carcinomas. Am J Pathol 1991;138:455-63.
5. Leroy X, Moukassa D, Copin MC, Saint F, Mazeman E, Gosselin B. Utility of cytokeratin 7 for distinguishing
chromophobe renal cell carcinoma from renal oncocytoma. Eur Urol 2000;37:484-7.
6. Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: Patterns of
expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982;31:11-24.
7. Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors. In: Hermann, Harris,
editors. Subcellular biochemistry. Volume 31, New York: Plenum Press; 1998. p. 205-62.
8. Poels LG, Jap PHK, Ramaekers FCS, Scheres JMJC, Thomas CMG, Vooijs PG, et al. Characterization of
a hormone-producing ovarian carcinoma cell line. Gynecol Oncol 1989;32:203-14.
9. Baars JH, de Ruijter JLM, Smedts F, van Niekerk CC, Poels LG, Seldenrijk CA, et al. The applicability of a
keratin 7 monoclonal antibody in routinely Papanicolaou-stained cytologic specimens for the differential
diagnosis of carcinomas. Am J Clin Pathol 1994;101:257-61.
(106756-002)
M7018/PL/KRM/2008.09.30 p. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Objaśnienie symboli
(106756-002)
Numer katalogowy
Zakres temperatur
Urządzenie medyczne do
diagnostyki in vitro
Nr serii
Przed uŜyciem zapoznać się z
instrukcjami
Termin waŜności
Producent
M7018/PL/KRM/2008.09.30 p. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17