Monoclonal Mouse Anti-Human Chromogranin A Clone

Monoclonal Mouse
Anti-Human Chromogranin A
Clone DAK-A3
Nr kat. M 0869
Wydanie 19.12.02
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Chromogranin A, Clone DAK-A3, jest przeznaczone do badań
immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje chromograninę A obecną w ziarnistościach wydzielniczych
komórek wydzielania wewnętrznego. Chromogranina A jest markerem różnicowania neuroendokrynnego, a
przeciwciała przeciwko chromograninie A stanowią użyteczne narzędzie do identyfikacji guzów pochodzenia
neuroendokrynnego. Identyfikacja różnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu przeciwciał. Interpretację
powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog w oparciu o historię choroby pacjenta oraz inne testy
diagnostyczne.
Wstęp
Chromogranina A jest prohormonem białkowym o masie cząsteczkowej 48 kDa. Gen kodujący 439
aminokwasów białka znajduje się na chromosomie 14 (1-3). Do potencjalnie biologicznie aktywnych peptydów
pochodzących od chromograniny A należą: wazostatyny (aa 1-17/113), chromostatyna (aa 124-143),
chromacyny (aa 173-194), pankreastatyna (aa 243-294), WE-14 (aa 316-329), katestatyna (aa 344-364),
parastatyna (aa 347-419) oraz GE-25 (aa 367-391) (1). Chromogranina A początkowo była izolowana z
komórek chromochłonnych rdzenia nadnerczy, później jednak stwierdzono jej obecność w ziarnistościach
wydzielniczych większości narządów neuroendokrynnych. Od tego czasu jest stosowana jako ważny marker
histochemiczny o szerokim spektrum działania do identyfikacji komórek i guzów neuroendokrynnych (1, 4, 5).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant z hodowli komórkowej
oczyszczony przez dializę z 50 mmol/L Tris/HCL o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: DAK-A3. Izotyp: IgG2b, kappa.
Stężenie IgG u myszy: zob. informację podaną na etykiecie fiolki.
Immunogen:
C-końcowy odcinek ludzkiej chromograniny A o masie 20 kDa, odpowiadający aminokwasom 210-439. Odcinek
wyizolowano z moczu pacjentów z zespołem rakowatym, w postaci czystej, jak wykazała analiza aminokwasów
N-końcowych.
Swoistość
W teście ELISA przeciwciało reaguje z czystym, stosowanym do immunizacji, fragmentem chromograniny A.
W testach immunocytochemicznych z użyciem 84 różnych rodzajów guzów oraz 30 różnych tkanek zdrowych
przeciwciało wykazuje wzór barwienia zbliżony do wzoru dla znanego poliklonalnego przeciwciała przeciwko
chromograninie A, Dako nr kat. A 0430. Znakowanie zgadza się ze znanym rozmieszczeniem chromograniny A.
Ponadto, po zdemaskowaniu antygenów buforem cytrynianowym obserwowano znakowanie melaniny i lipofuscyny
przez oba przeciwciała, jak również przez inne przeciwciało monoklonalne przeciw chromograninie A, klon LK2H10.
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
prawidłowe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8 C. Nie używać po dacie ważności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są
przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te warunki. Nie ma
oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek
pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór barwienia, którego
nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że przyczyną może być
przeciwciało, należy niezwłocznie skontaktować się z działem pomocy technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować dla znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie,
zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą podwyższonej temperatury
podczas odzyskiwania epitopu. Optymalne wyniki uzyskuje się przy użyciu Dako Target Retrieval Solution o
wysokim pH, nr kat. S 3308 lub 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA o pH 9,0. Gorsze wyniki daje
stosowanie Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, lub 10 mmol/L buforu cytrynianowego o pH 6,0.
Wstępne przygotowanie tkanek proteinazą K okazało się nieskuteczne. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia
skrawków
tkanki
podczas
przygotowania
lub
następującej
po
nim
procedury
barwienia
immunocytochemicznego.
Skrawki zamrożone: Przeciwciało można stosować do znakowania utrwalonych w acetonie skrawków
zamrożonych.
(106753-002)
M 0869/PL/COS/19.12.02 p. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · Nr CVR 33 21 13 17
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Chromogranin A, code No. M 0869, nr kat. M
0869, można rozcieńczać w proporcjach 1:100-1:200 w przypadku stosowania na skrawkach ludzkiej okrężnicy
utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie, przy zastosowaniu podwyższonej temperatury podczas
odzyskiwania epitopu w Dako Target Retrieval Solution o wysokim pH, nr kat. S 3308, przez 20 minut oraz
inkubacji w temperaturze pokojowej z pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się
zmieniać w zależności od próbki i metody przygotowania i powinny być określone przez każde z
poszczególnych laboratoriów. Zalecaną kontrolą ujemną jest Dako Mouse IgG2b, nr kat. X 0944, rozcieńczona
do takiego samego stężenia mysiego IgG jak pierwsze przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego
przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona podczas rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby
rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed użyciem lub rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody
Diluent, nr kat. S 0809. Kontrolę dodatnią i ujemną należy wykonać jednocześnie z testem próbki pacjenta.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 i K 4006. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego
zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunocytochemicznego przy wykorzystaniu
platform automatycznych, takich jak Dako Autostainer.
Ograniczenia specyficzne
dla produktu
Przeciwciało znakuje melaninę i lipofuscynę po odzyskaniu epitopu w podwyższonej temperaturze w 10 mmol/L
buforu cytrynianowego o pH 6,0.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują cytoplazmatyczny, ziarnisty wzór barwienia.
Tkanki patologiczne: Znakowanie przeciwciałem stwierdzono w przypadku 13/18 guzów neuroendokrynnych
różnych typów. Nie zaobserwowano znakowania żadnego z 39 raków, 7 mięsaków, 4 czerniaków, 6 chłoniaków,
2 nasieniaków, 2 międzybłoniaków, oponiaka, gwiaździaka ani guza Warthina.
Piśmiennictwo
1. Portela-Gomes GM. Chromogranin A immunoreactiviity in neuroendocrine cells in the human
gastrointestinal tract and pancreas. Adv Exp Med Biol 2000;482:193-203.
2. Konecki DS, Benedum UM, Gerdes H-H, Huttner WB. The primary structure of human chromogranin A and
pancreastatin. J Biol Chem 1987;262:17026-30.
3. Murray SS, Deaven LL, Burton DW, O’Connor DT, Mellon PL, Deftos LJ. The gene for human
chromogranin A (CgA) is located on chromosome 14. Biochem Biophys Res Comm 1987;42:141-6.
4. Lloyd RV, Cano M, Rosa P, Hille A, Huttner WB. Distribution of chromogranin A and secretogranin I
(chromogranin B) in neuroendocrine cells and tumors. Am J Pathol 1988;130:296-304.
5. Degorce F. Assessment of chromogranin A using two-site immunoassay. Selection of a monoclonal
antibody pair unaffected by human chromogranin A processing. Adv Exp Med Biol 2000;482:339-50.
Objaśnienie symboli
(106753-002)
Numer katalogowy
Zakres temperatur
Urządzenie medyczne do
diagnostyki in vitro
Nr serii
Przed użyciem zapoznać się z
instrukcjami
Termin ważności
Producent
M 0869/PL/COS/19.12.02 p. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · Nr CVR 33 21 13 17