C-Reactive Protein - Serum Application Note

C-reaktywne białko
Produkt gotowy do użycia
Ogólna instrukcja użytkowania
Instrukcja użytkowania
Ogólne wytyczne dla oznaczania
C-reaktywnego białka w surowicy/osoczu
(produkt gotowy do użycia)
Informacje ogólne
Przeznaczenie
Niniejsza Instrukcja użytkowania dotyczy ilościowego oznaczania metodą turbidymetrii C-reaktywnego białka (CRP) w
materiale pochodzenia ludzkiego z użyciem urządzeń, dla których nie istnieje żadna specyficzna instrukcja obsługi (1).
Urządzenie wybrane przez klienta powinno mieć stosowne zatwierdzenie do dokonywania oznaczeń.
Zakres pomiaru
Około 5-160 mg/L, zależnie od danej partii kalibratorów. W przypadku dokonania zagęszczenia lub rozcieńczenia
materiału zakres ten może być poszerzony.
Zakres wartości
prawidłowych
0-5 mg/L (2). Zaleca się ustalenie zakresu wartości prawidłowych dla lokalnej populacji.
Ustawienia automatu
Instrukcje dotyczące programowania urządzenia przedstawiono w części “Sugestie ustawień urządzenia...”
znajdującej się na stronie 3.
Odczynniki
Przeciwciało
Nr kat.
Q 8329
S 2307
Bufor do
przeprowadzenia reakcji
X 0923
Kalibrator
X 0925
Kontrole
X 0926
Rozcieńczalnik
Nazwa
DakoCytomation Polyclonal Rabbit Anti-Human C-Reactive Protein, produkt
gotowy do użycia
DakoCytomation Reaction Buffer 7
DakoCytomation Human Serum C-Reactive Protein Calibrator
DakoCytomation Human Serum C-Reactive Protein Low Control
DakoCytomation Human Serum C-Reactive Protein High Control
Roztwór NaCl 154 mmol/L (0,9% wag/obj)
Próbki
Ludzka surowica, osocze z heparyną lub osocze z EDTA.
Stabilne przez 8 dni w temperaturze 2-8 oC (3).
Stabilne przez 3 miesiące w temperaturze -20 oC (jeśli zamrożono tylko jednokrotnie) (3).
Zamrożone próbki rozmrażać w temperaturze 37 oC i dobrze wymieszać przed badaniem.
Kalibrator
Rozcieńczenie roztworów standardowych jest automatycznie dokonywane przez urządzenie, zgodnie z jego
wskazaniami lub jest dokonywane ręcznie.
Bufor do prowadzenia reakcji
Bufor reakcji jest gotowy do użycia. Stabilność po umieszczeniu w urządzeniu wynosi 28 dni w temperaturze 2-12 °C.
Przeciwciało
Przeciwciało jest gotowe do użycia.
Jeśli w rzadkich przypadkach stwierdza się nieznaczne zmętnienie wstępnie rozcieńczonego roztworu przeciwciała,
zaleca się przefiltrowanie roztworu przez filtr membranowy o średnicy porów 0,22 µm.
Stabilność przeciwciała: Patrz data ważności na etykiecie.
Stabilność po umieszczeniu w urządzeniu: 28 dni w temperaturze 2-12 °C.
Wydajność: 1 mL przeciwciała odpowiada około 10 odczytom kuwet z wzorcem lub badanym materiałem przy użyciu
100 µL roztworu przeciwciała na oznaczenie. Przy obliczaniu wymaganej ilości odczynnika należy wziąć pod uwagę
martwą objętość butelki z odczynnikiem.
Stabilność kalibracji
Zaleca się dokonywanie ponownej kalibracji co 28 dni lub gdy zmienia się numer partii używanych odczynników, gdy
roztwór przeciwciała podda się filtracji lub wyniki oceny kontroli jakości oznaczeń znajdują się poza ustalonymi dla
danego laboratorium wartościami. Niemniej jednak, stabilność kalibracji powinna być zatwierdzana dla każdego
urządzenia.
Rozwiązywanie problemów
Jeśli otrzymane wyniki są nie do przyjęcia należy przeprowadzić ponowną kalibrację aparatu. Należy sprawdzić
odczynniki i procedurę. Jeśli problem nadal występuje, należy skontaktować się z dostawcą aparatury lub z
Działem Pomocy Technicznej firmy DakoCytomation.
(109363-001)
DakoCytomation Denmark A/S
30 134.Q8329.01/PL/AHA/07.01.04 s. 1/3
· Produktionsvej 42
· DK-2600 Glostrup
· Denmark
· Tel. +45 44 85 95 00
· Fax +45 44 85 95 95
·
CVR No. 33 21 13 17
C-reaktywne białko
Produkt gotowy do użycia
Ogólna instrukcja użytkowania
Przykład danych podczas dokonywania oznaczenia z u życiem urządzenia Hitachi 911
Czułość
Wartość gęstości optycznej (OD) wynosząca około 0,60 w przypadku urządzenia Hitachi 911 odpowiada stężeniu
CRP wynoszącemu około 320 mg/L.
Próg wykrywalności
Próg wykrywalności ocenia się na 2,5 mg/L.
Precyzja
Precyzję oszacowano dokonując analizy ANOVA wyników oznaczenia C-reaktywnego białka (CRP) w 2 różnych
stężeniach dokonanych w czasie 6 cykli oznaczeń, z których dla każdego przeprowadzono nową kalibrację i w
każdym wykonano 6 oznaczeń.
CRP
Odchylenie standardowe
(mg/L)
Wartość
średnia
(mg/L)
W
zakresie
jednego
badania
Między
poszczególnymi
cyklami
oznaczeń
Łącznie
Łącznie
Współczynnik
Wariancji (%)
n
Surowica ludzka
niskie stęż.
30,7
0,38
0,11
0,39
1,3
35
Surowica ludzka,
wysokie stężenie
103,7
1,29
0,57
1,42
1,4
36
Surowice
Dokładność
W przypadku DakoCytomation Human Serum C-Reactive Protein Low Control, nr kat. X 0925 i DakoCytomation
Human Serum C-reactive Protein High Control, nr kat. X 0926, oczekiwany odzysk CRP wynosi 90-110%.
Liniowość
Metoda jest liniowa w zakresie 5-160 mg/L.
Zakres bezpieczeństwa
Nie wykryto nadmiaru antygenu dla stężenia CRP do 1 900 mg/L.
Zakłócenie
Nie stwierdzono zakłócenia wyników w warunkach, gdy stężenie hemoglobiny wynosiło do 10 g/L, bilirubiny do
600 mg/L, trójglicerydów do 25 g/L i czynnika reumatoidalnego do 50 IU/mL.
Wszystkie leki opisane w 4. pozycji piśmiennictwa oceniano zgodnie z zaleceniami z 4. pozycji piśmiennictwa. Nie
odnotowano żadnego ich wpływu na wyniki, poza intralipidem w stężeniu 2 g/L.
Porównanie metod
Oznaczenie C-reaktywnego białka zgodnie z niniejszą Instrukcją obsługi zostało porównane z dostępnymi na rynku
metodami turbidymetrycznymi. Dane są dostępne na żądanie.
Piśmiennictwo
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination of
human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab Med
2001; 39:1098–1109.
2. Dati F, Schumann G, Thomas L, Aguzzi F, Baudner S, Bienvenu J, et al. Consensus of a group of professional
societies and diagnostic companies on guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based
on the standardization against the IFCC/BCR/CAP Reference Material (CRM 470). Eur J Clin Chem Clin
Biochem 1996; 34:517–20.
3. Patient preparation and specimen handling. Fascicle VI. Chemistry/Clinical Microscopy. College of American
Pathologists. CAP.5M293.
4. Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their
concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001; 38:376–85.
(109363-001)
DakoCytomation Denmark A/S
30 134.Q8329.01/PL/AHA/07.01.04 s. 2/3
· Produktionsvej 42
· DK-2600 Glostrup
· Denmark
· Tel. +45 44 85 95 00
· Fax +45 44 85 95 95
·
CVR No. 33 21 13 17
C-reaktywne białko
Produkt gotowy do użycia
Ogólna instrukcja użytkowania
Sugestia ustawień urządzenia przy użyciu Human Serum C-Reactive Protein, produkt gotowy do użycia
Sugestia
* Wskaźnik
Ścieżka światła (mm)
Czas inkubacji (s)
Rozcieńczenie próbki (współczynnik rozcieńczenia)
Objętość próbki rozcieńczonej wstępnie (µL)
Objętość próbki (µL) (=bez rozcieńczania)
Rozcieńczalnik+roztwór płuczący (dla: próbka+odczynnik)
(µL)
Objętość buforu reakcji (µL)
Stężenie glikolu polietylenowego (PEG) w buforze reakcji (%)
Stężenie PEG w objętości inkubacji (%)
Objętość inkubacji (µL)
Rozcieńczenie przeciwciała (współczynnik rozcieńczenia
przeciwciała)
Objętość rozcieńczonego przeciwciała (µL)
Objętość przeciwciała (µL) (=bez rozcieńczania)
Rozcieńczalnik+roztwór płuczący (dla: przeciwciało) (µL)
Objętość całkowita (µL)
Czas reakcji (s)
Całkowity czas analizy (s)
10
120
1
50
50
140
670
3
2,3
860
1
100
100
40
1000
300
420
Współczynnik
Objębjętopróbki (czysta)
Objębjętoś zeciwciałe (czysta)
0,50
[0,50 - 0,52]
Zależność
PEG - stętę w objębjinkub.(%)* Objębjpróbki (czysta)
Objębjętoinkubacji
Objębjętopróbki (czysta)
OŁŁączn objębjęt
0,14
[0,12 - 0,13]
0,050
[0,046 - 0,049]
Współczynnik
Stężenie PEG w objętości całkowitej (%)
Roztwory standardowe
2,0
[2,0 – 2,0]
Współczynnik:
rozcieńczenia
1,00
1,33
2,00
4,00
8,00
33,33
Roz. std. 1 (największe stężenie)
Roz. std. 2
Roz. std. 3
Roz. std. 4
Roz. std. 5
Roz. std. 6 (najmniejsze stężenie)
fi względny
współczynnik stężenia
1,00
0,75
0,50
0,25
0,13
0,03
*
Dalsze informacje dotyczące poszczególnych wskaźników można znaleźć w dokumencie „Wprowadzenie do ogólnych instrukcji obsługi dla
produktów DakoCytomation”, zamówienie nr 30134.Intro, który jest dostępny na żądanie lub na stronie internetowej:
www.DakoCytomation.com.
[ ] Oznacza zakres wartości możliwych do przyjęcia, uzyskany na różnych urządzeniach.
fi jest współczynnikiem stężenia względnego, używanym do obliczania stężenia względnego C-reaktywnego białka (RC(i)) w roztworach
standardowych pochodzących z poszczególnych partii kalibratora (C(Cal)); RC(i) = fi x C(Cal) .
(109363-001)
DakoCytomation Denmark A/S
30 134.Q8329.01/PL/AHA/07.01.04 s. 3/3
· Produktionsvej 42
· DK-2600 Glostrup
· Denmark
· Tel. +45 44 85 95 00
· Fax +45 44 85 95 95
·
CVR No. 33 21 13 17