CINtec® p16 Histology

CINtec® p16 Histology
805-4713
06695248001
825-4713
06695256001
50
250
PRZEZNACZENIE
Zestaw immunohistochemiczny
CINtec p16 Histology do
jakościowego oznaczania białka
p16INK4a w skrawkach tkanek
utrwalonych w formalinie
i zatopionych w parafinie,
pochodzących z biopsji szyjki
macicy. Przeznaczony do
stosowania z preparatami na
szkiełkach wybarwionymi H&E,
Rysunek 1. Barwienie komórek nabłonka
pochodzącymi z takich samych
płaskiego szyjki macicy przy użyciu CINtec
próbek nabłonka szyjki macicy,
p16 Histology.
w celu zwiększenia dokładności
diagnostycznej i zgodności obserwacji pomiędzy osobami badającymi preparaty pod
kątem wewnątrznabłonkowej neoplazji szyjki macicy wysokiego stopnia.
Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego histopatologa
w połączeniu z badaniem histopatologicznym, odnośnymi danymi klinicznymi i właściwymi
badaniami kontrolnymi.
To przeciwciało jest przeznaczone do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA
CINtec p16 Histology zawiera jeden składnik: anti-p16INK4a (E6H4), mysie,
pierwszorzędowe przeciwciało monoklonalne.
Będące inhibitorem kinaz cyklinozależnych białko p16INK4a ma kluczowe znaczenie dla
przebiegu cyklu komórkowego i różnicowania komórek1,2,3. Białko p16INK4a uczestniczy
w procesie regulacji przejścia z fazy G1 w fazę S z udziałem białka retinoblastoma (pRB)
i powoduje wstrzymanie cyklu komórkowego w trakcie różnicowania komórki1,4. Poziom
ekspresji białka p16INK4a w prawidłowych, ostatecznie zróżnicowanych komórkach jest
niski, zwykle niewykrywalny podczas badań immunohistochemicznych1,5. Wykazano
jednak, że w przypadku niektórych nowotworów nadekspresja białka p16INK4a przyczynia
się do rozregulowania cyklu komórkowego i transformacji komórek. Wyniki badań
naukowych wykazały, że silna nadekspresja białka p16INK4a w tkankach ze zmianami
przednowotworowymi i nowotworowymi jest ściśle związana na poziomie molekularnym
z ekspresją onkoproteiny E7 wirusa brodawczaka ludzkiego1,6.
Preparat CINtec p16 Histology (825-4713) zawiera odczynnik w ilości wystarczającej do
przeprowadzenia 250 badań.
Jeden dozownik VENTANA 25 ml z odczynnikiem CINtec p16 Histology zawiera około
25,0 μg mysiego przeciwciała monoklonalnego.
Preparat CINtec p16 Histology jest rozcieńczony w buforze Tris-HCl 0,05 M z dodatkiem
1% białka nośnikowego i środka ProClin 300 w stężeniu 0,10%, będącego konserwantem.
Całkowite stężenie białka w odczynniku wynosi około 10,0 mg/ml. Stężenie swoistego
przeciwciała wynosi około 1,0 μg/ml. Nie jest znana żadna nieswoista reaktywność
przeciwciał zawartych w tym produkcie.
CINtec p16 Histology to mysie przeciwciała monoklonalne, wyizolowane z supernatantu
hodowli komórkowej.
Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki firmy VENTANA, dołączonej do
opakowania zestawu do detekcji, aby uzyskać szczegółowy opis następujących kwestii:
(1) Zasady przeprowadzania procedury, (2) Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone
do zestawu, (3) Pobranie próbki i przygotowanie do analizy, (4) Procedury kontroli jakości,
(5) Rozwiązywanie problemów, (6) Interpretacja wyników i (7) Ogólne ograniczenia.
MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIEDOSTARCZANE
Nie dołączono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji firmy VENTANA
ani elementów pomocniczych, takich jak dodatnie i ujemne kontrolne preparaty tkankowe.
Nie wszystkie produkty przedstawione w ulotce dołączonej do opakowania są dostępne
we wszystkich rejonach geograficznych. Należy skonsultować się z lokalnym
przedstawicielem odpowiedzialnym za wsparcie techniczne.
PRZECHOWYWANIE
Po otrzymaniu preparat nieużywany przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać.
W celu zapewnienia właściwego dozowania odczynnika i trwałości przeciwciała po
każdym użyciu należy założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce w
pozycji pionowej.
Na każdym dozowniku przeciwciała podana jest data ważności. Prawidłowo
przechowywany odczynnik zachowuje trwałość do daty określonej na etykiecie. Nie należy
stosować odczynnika po upływie terminu ważności.
PRZYGOTOWANIE PRÓBKI
Do stosowania z tym pierwszorzędowym przeciwciałem nadają się rutynowo
przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem
stosowania zestawu do detekcji firmy VENTANA i automatu do barwienia VENTANA
BenchMark XT, BenchMark GX lub BenchMark ULTRA. Zalecanym środkiem do
utrwalania tkanek jest 10% obojętna buforowana formalina 7. Preparaty należy
niezwłocznie wybarwić, ponieważ antygenowość ciętych skrawków tkanek może z czasem
ulegać osłabieniu.
Zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli dodatniej i ujemnej przy badaniu
nieznanych preparatów.
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
3.
ZASADY POSTĘPOWANIA
Anti- p16INK4a (E6H4) jest mysim, pierwszorzędowym przeciwciałem monoklonalnym
wytwarzanym przeciwko białku p16INK4a. Anti- p16INK4a (E6H4) wiąże się z białkiem
p16INK4a w skrawkach tkankowych zatopionych w parafinie oraz barwi jądra komórkowe
i/lub cytoplazmę. Przeciwciało można wykryć za pomocą zestawu do detekcji OptiView
DAB IHC Detection Kit (Cat. No. 760-700; 06396500001) lub ultraView Universal DAB
Detection Kit (Cat. No. 760-500; 05269806001). Więcej informacji można znaleźć w ulotce
dołączonej do opakowania zestawu OptiView DAB IHC Detection Kit lub ultraView
Universal DAB Detection Kit.
DOSTARCZANY ODCZYNNIK
FT0700-410l
5.
6.
7.
8.
Preparat CINtec p16 Histology (805-4713) zawiera odczynnik w ilości wystarczającej do
przeprowadzenia 50 badań.
Jeden dozownik VENTANA 5 ml z odczynnikiem CINtec p16 Histology zawiera około
5,0 μg mysiego przeciwciała monoklonalnego.
2016-02-02
4.
1/4
Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
Wyłącznie do zastosowania profesjonalnego.
W tym preparacie zastosowano jako konserwant ProClin 300. Został on uznany
za środek drażniący i jego kontakt ze skórą może powodować uczulenie. Podczas
pracy z produktem należy stosować środki ostrożności w uzasadnionym stopniu.
Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. Stosować
odzież i rękawice ochronne.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały
niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych środków
ostrożności.
Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu
odczynników z wrażliwymi miejscami spłukiwać obfitą ilością wody.
Unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników ze względu na możliwość
nieprawidłowych wyników.
W celu uzyskania informacji na temat zalecanej metody utylizacji produktu należy
skontaktować się z władzami lokalnymi lub krajowymi.
Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie
charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zwrotach dotyczących
zagrożeń na stronie www.ventana.com.
1011519PL Rev F
PROCEDURA BARWIENIA
Przeciwciała pierwszorzędowe firmy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania
w urządzeniach do barwienia VENTANA BenchMark XT, BenchMark GX lub BenchMark
ULTRA razem z zestawami do detekcji i akcesoriami firmy VENTANA. Zalecane protokoły
barwienia zawiera Tabela 1 i Tabela 2.
Te przeciwciała zostały zoptymalizowane do określonego czasu inkubacji, jednakże
użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego
odczynnika.
Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane
zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi urządzenia. Więcej informacji na temat
procedury barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej do
opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA.
Tabela 1. Zalecany protokół barwienia dla odczynnika CINtec p16 Histology z użyciem
zestawu do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit oraz urządzenia BenchMark
GX, BenchMark XT lub BenchMark ULTRA.
Rodzaj procedury
Metoda
Odparafinowanie
Wybrana
Kondycjonowanie komórek
(odsłanianie antygenu)
Cell Conditioning 1,
Standardowa
Przeciwciała (pierwotne)
Urządzenie BenchMark GX
24 minuty, 37°C
Urządzenie BenchMark XT
16 minut, 37°C
Urządzenie BenchMark ULTRA
20 minut, 36°C
Blokowanie (Ultrablock)
(Antibody Diluent,
P/N 251-018; 05261899001)
Urządzenie BenchMark GX
8 minut
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, jak również zmienność między
poszczególnymi urządzeniami i warunkami środowiska laboratoryjnego, konieczne może być
wydłużenie lub skrócenie czasu inkubacji podstawowego przeciwciała i kondycjonowania
komórek (cell conditioning) lub ich wstępnej obróbki proteazą (protease), zależnie od próbki,
zastosowanej metody detekcji i preferencji użytkownika. Więcej informacji na temat
zmiennych związanych z utrwalaniem można znaleźć w pracy „Immunohistochemistry
Principles and Advances” (Podstawy i postępy immunohistochemii)8.
TKANKA DO DODATNIEJ PRÓBY KONTROLNEJ
Przykładowe tkanki do dodatniej próby kontrolnej dla tego przeciwciała to prawidłowa
tkanka trzustki, prawidłowa tkanka migdałka i rak szyjki macicy.
INTERPRETACJA WYBARWIENIA/OCZEKIWANE WYNIKI
Wzór barwienia komórek dla CINtec p16 Histology jest jądrowy i/lub cytoplazmatyczny.
Nadekspresja biomarkera p16INK4a w skrawkach z biopsji szyjki macicy uwidacznia się
jako rozmyte, ciągłe wybarwienie komórek warstwy podstawnej i przypodstawnej nabłonka
płaskiego szyjki macicy, przy którym może, ale nie musi, wystąpić wybarwienie komórek
warstwy pośredniej lub od warstwy pośredniej do wyższych warstw. Ciągły, rozmyty
wzorzec barwienia należy interpretować jako wynik dodatni. Barwienie ogniskowe
występuje jako nieciągłe barwienie pojedynczych komórek lub zbitek komórek, zwłaszcza
w warstwach innych niż podstawna i przypodstawna. Barwienie ogniskowe należy
interpretować jako wynik ujemny.
SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA
CINtec p16 Histology może dawać dodatnie wyniki barwienia fibroblastów i nabłonka
walcowatego szyjki macicy, co nie ma wpływu na interpretację wyniku.
CHARAKTERYSTYKA ROBOCZA
Przeprowadzono badania barwienia odczynnikiem pod kątem jego specyficzności,
czułości i powtarzalności, a wyniki zostały zamieszczone w Tabeli 3, Tabeli 4 oraz w
części Powtarzalność.
Specyficzność
Tabela 3. Specyficzność odczynnika CINtec p16 Histology oceniano na podstawie
badania próbek tkanek zdrowych, po ich utrwaleniu w formalinie i zatopieniu w parafinie.
Tkanka
Liczba
dodatnich/
wszystkich
przypadków
Rodzaj procedury
Metoda
Mózg
0/3
Grasica
0/3
Odparafinowanie
Wybrana
Szpik kostny
3/3
Urządzenie BenchMark GX
Cell Conditioning 1, 32 minuty
Urządzenie BenchMark XT
Cell Conditioning 1, 48 minut
Urządzenie BenchMark ULTRA
Cell Conditioning 1, 48 minut
Móżdżek
0/3
Kondycjonowanie komórek
(odsłanianie antygenu)
Nadnercze
2/3
Płuco
0/6
Jajnik
0/3
Serce
0/3
Trzustka
3/3
Przełyk
0/3
Przytarczyce
0/1
Żołądek
0/3
Przysadka
3/3
Jelito cienkie
0/3
Jądra
0/3
Okrężnica
0/3
Tarczyca
0/5
Wątroba
0/3
Sutek
2/3
Ślinianka
2/3
Śledziona
3/3
Nerka
0/3
Migdałki
4/4
Gruczoł krokowy
0/3
Macica
0/3
Szyjka macicy
0/46
Mięśnie szkieletowe
0/2
Skóra
0/3
Tabela 2. Zalecany protokół barwienia dla odczynnika CINtec p16 Histology z użyciem
zestawu do detekcji OptiView DAB IHC Detection Kit oraz urządzenia BenchMark GX,
BenchMark XT lub BenchMark ULTRA.
Inhibitor peroksydazy przed
przeciwciałem pierwszorzędowym
Wybrana
Przeciwciała (pierwotne)
Urządzenie BenchMark GX
8 minut, 37°C
Urządzenie BenchMark XT
8 minut, 37°C
Urządzenie BenchMark ULTRA
12 minut, 36°C
Dodatkowe utrwalenie
(Antibody Diluent,
P/N 251-018; 05261899001)
2016-02-02
FT0700-410l
Tkanka
Urządzenie BenchMark GX
8 minut
2/4
Liczba
dodatnich/
wszystkich
przypadków
1011519PL Rev F
Tkanka
Liczba
dodatnich/
wszystkich
przypadków
Tkanka
Liczba
dodatnich/
wszystkich
przypadków
Nowotwór
Wewnątrznabłonkowa neoplazja szyjki macicy (CIN 1)
19/48
Czułość
Wewnątrznabłonkowa neoplazja szyjki macicy (CIN 2)
35/35
Tabela 4. Czułość preparatu CINtec p16 Histology oceniano na podstawie badania
próbek tkanek nowotworowych, po ich utrwaleniu w formalinie i zatopieniu w parafinie.
Wewnątrznabłonkowa neoplazja szyjki macicy (CIN 3)
26/26
Rak płaskonabłonkowy szyjki macicy
31/32
Nerwy (nieliczne)
0/3
Liczba
dodatnich/
wszystkich
przypadków
Nowotwór
Liczba
dodatnich/
wszystkich
przypadków
Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy
1/1
Czerniak złośliwy odbytu
1/1
Glejak
1/1
Rak podstawnokomórkowy
1/1
Oponiak atypowy
0/1
Rak płaskonabłonkowy
0/1
Wyściółczak złośliwy
1/1
Nerwiakowłókniak
0/1
Skąpodrzewiak złośliwy
0/1
Nerwiak zarodkowy przestrzeni zaotrzewnowej
0/1
Surowiczy gruczolakorak brodawkowaty
1/1
Międzybłoniak złośliwy nabłonkowy
1/1
Gruczolakorak jajnika
0/1
Chłoniak Hodgkina (ziarnica złośliwa)
0/1
Rak z komórek wysp trzustki (wyspiak)
0/1
Chłoniak anaplastyczny wielkokomórkowy
1/1
Gruczolakorak trzustki
0/1
Rak przejściowokomórkowy pęcherza moczowego
0/1
Nasieniak
0/1
Mięsak gładkokomórkowy o niskim stopniu złośliwości
1/1
Rak zarodkowy
0/1
Kostniakomięsak
1/1
Rak rdzeniasty tarczycy
0/1
Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych
1/1
Rak brodawkowaty
0/1
Mięsak gładkokomórkowy o umiarkowanym stopniu złośliwości
1/1
Rak wewnątrzprzewodowy sutka ze wczesnym naciekiem
1/1
Inwazyjny rak przewodowy sutka
2/2
Chłoniak rozlany z limfocytów B
1/3
Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuca
1/1
Rak płaskonabłonkowy płuca
0/1
Gruczolakorak płuca
1/1
Rak płaskonabłonkowy przełyku
1/1
Gruczolakorak przełyku
0/1
Przeprowadzono badania powtarzalności dla preparatu CINtec p16 Histology w celu
określenia:
•
Odtwarzalności wyników między partiami przeciwciał.
•
Odtwarzalności wyników w jednym badaniu i między badaniami z zastosowaniem
urządzenia BenchMark XT.
•
Odtwarzalności wyników w obrębie platformy przy użyciu urządzenia BenchMark
XT, urządzenia BenchMark GX oraz urządzenia BenchMark ULTRA.
•
Odtwarzalności wyników między platformami pomiędzy urządzeniami BenchMark
XT, BenchMark GX i BenchMark ULTRA.
Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy.
Gruczolakorak śluzowy żołądka
1/1
PIŚMIENNICTWO
Gruczolakorak przewodu pokarmowego
3/3
Nowotwór podścieliskowy przewodu pokarmowego (GIST)
3/3
Rak wątrobowokomórkowy
0/1
Wątrobiak zarodkowy
0/1
Rak jasnokomórkowy nerek
0/1
Gruczolakorak prostaty
1/2
Mięśniak gładkokomórkowy
1/1
Rak gruczołowy endometrium
1/1
Rak jasnokomórkowy endometrium
1/1
2016-02-02
FT0700-410l
Powtarzalność
1.
2.
3.
4.
5.
3/4
Sano T, Oyama T, Kashiwabara K, et al. Expression status of p16 protein is
associated with human papillomavirus oncogenic potential in cervical and genital
lesions. Am J Pathol. 1998;153:1741-1748.
Agoff SN, Lin P, Morihara J, et al. p16(INK4a) expression correlates with degree of
cervical neoplasia: a comparison with Ki-67 expression and detection of high-risk
HPV types. Modern Pathol. 2003;16:665-673.
Negri G, Egarter-Vigl E, Kasal A, et al. p16INK4a is a useful marker for the
diagnosis of adenocarcinoma of the cervix uteri and its precursors: an
immunohistochemical study with immuncytochemical correlations. Am J Surg
Pathol. 2003;27:187-193.
Klaes R, Friedrich T, Spitkovsky D, et al. Overexpression of p16(INK4a) as a
specific marker for dysplasia and neoplastic epithelial cells of the cervix uteri. Int J
Cancer. 2001;92:276-284.
Klaes R, Benner A, Friedrich T, et al. p16INK4a immunohistochemistry improves
interobserver agreement in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia. Am J
Surg Pathol. 2002;26:1389-1399.
1011519PL Rev F
6.
7.
8.
Negri G, Vittadello F, Romano F, et al. p16INK4a expression and progression risk of
low-grade intraepithelial neoplasia of the cervix uteri. Virchows Arch. 2004;445:616620.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong
Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of
Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002.
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
BENCHMARK, ultraView, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami towarowymi firmy
Roche.
Wszystkie pozostałe znaki towarowe stanowią własność odpowiednich właścicieli.
© 2015 Ventana Medical Systems, Inc.
DANE KONTAKTOWE
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
2016-02-02
FT0700-410l
4/4
1011519PL Rev F