Elektorforeza białek surowicy krwi

Elektroforeza bialek surowicv krwi.
Zasada metody:
Białka, ze względu na obecność gup, podlegających jonizacji w roztworach wodnych, mają
zdolnośó węcirówki w polu elektrycznym. PrędkoŚc i kierunek migracji wspomnianych czry
steczek za|eĄprzy tym m. in.od ich budowy pienvszorzędowej, pH buforu rozdziałowego
orazprz1łożonego napięcia, Roznice w pręd}rości migracji lezą u podstaw rozdziału mieszaniny białek Za pomocą róznych technik elektroforeĘcznych.
Odczvnniki:
l. Bufor TRlS-glicyna pH 8,3:
2 litry buforu zawierają 28,8 g glicyny oraz6 g TRIS (trihydroksymety1oaminometanu).
2. Roztwór barwiący:
0,2 gczerni amidowej rozpuścićw 100 ml mieszaniny metanolu i lodowatego kwasu
octowego (w stosunku 9:1).
3 Roztwór odbarwiaj ący:
mięszanina metanolu i lodowatego kwasu octowego (w stosunku 9: 1).
.
Postępowanie:
Komory elekfrodowe aparafu do elektroforezy napełnic buforem rozdziałolvym, rvlervając po
750 ml buforu do każdej z nic}r- Na foliach octanu celulory zsanczyi ołórłkiem ok. 5 cm oc
końca katodowego linię starlu. W celu zrównowazenia, moczyÓ folie octanowe przez 20 min
w buforze rozdziałowynr. Po Ęm czasie wyjąó je' osuszyć dokładnie na bibule i umieścic lv
aparacie do elektroforezy. Końcę kawałków nośnikapołączyćz buforem w komorach elektrodowych za pomocą kawałków bibuły, uprzednio zamo;zonych w buforze rozdziałolvym'
Zat*nąÓ pokrywę aparatu, a następnie _ w cęlu równomiernego rozmieszczenia jonÓw butbru na kawałkach octanu - wykonaó pre_elektrofQrezę' stosując przęz 5 _ 10 min prąd staĘ o
napięciu 150 V i natęzeniu 4 mA.
Probki surowicy rozcl'eńczyć 3-krotnie buforem rozdziałowym, w ktoryir: wcześniei IoZpuSZczono kilka Ęsaałów błękitu bromofenolowego, pełniącego rolę markera czołarozdziału. Z
tak prrygotowanego roztworu pobrac pipeĘ próbki po 5 ul i nakładać je w postaci linior.vej
plamy na folię octanowe, umieszczone w aparacie do elektroforezy.Po wsiąknięciu probek rv
nośnik,włączyc zasilanie, stosując prąd sta}y o napięciu 300 V i natęzeniu 0,5 mA na 1 cm
szerokościfoli octanolvych' Prowadzic rozdział przez 1 h. Po odłączeniu zasilania, paski
octanu wyjąÓ z aparatui zantsryć na25 min w kąpieli barwiącej (roztwór nr 2). Elektrofore _
gTamy odbarwiać w roztworze nr 3, anieniając go kilkakrotnie.
Uwasi:
otrz1'rnany obraz za|eĘ od stosowanych warunków (głównie typu buforu). W buforze
TRlS:glicyna otreymuje się następujące frakcje (począwszy od anody): albuminy, cr1 giobul:ily, crz globuliny, B globuliny, T globuluny.