Dako Omnis

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
E-Cadherin
Klon NCH-38
Ready-to-Use
(Dako Omnis)
Nr kat. GA059
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human E-Cadherin, klon NCH-38, Ready-to-Use (Dako Omnis), jest
przeznaczone do stosowania w immunohistochemii z urządzeniami Dako Omnis. Przeciwciała te są przydatne w
identyfikacji komórek zawierających E-kadherynę w tkankach prawidłowych i nowotworowych oraz do diagnozy
róŜnicowej raka przewodowego sutka i raka zrazikowego sutka (1). Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia
lub jego braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i
powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i
innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
E-CD, uwomorulina, L-CAM, Arc-1 lub cell-CAM 120/180 (2-4)
Podsumowanie
i wyjaśnienie
E-kadheryna to transbłonowa molekuła o masie 120 kDa uczestnicząca w adhezji komórek. Odpowiedni gen
zlokalizowano na chromosomie 16q22.1. Zewnątrzkomórkowa domena E-kadheryny uczestniczy w adhezji
międzykomórkowej poprzez oddziaływania homofilowe regulowane przez wapń, natomiast domena
wewnątrzkomórkowa E-kadheryny łączy się z cytoszkieletem aktynowym za pośrednictwem katenin. Ekadheryna pełni waŜną rolę w adhezji między komórkami nabłonka, polaryzacji nabłonka, róŜnicowania oraz
uwarstwieniu komórek gruczołów. Zlokalizowana jest głównie w punktach przylegania i skupia plazminogen
urokinazy oraz receptor nabłonkowego czynnika wzrostu w miejscach styku komórek (5, 6). Ograniczenie
ekspresji E-kadheryny obserwowano w licznych przypadkach raka. Jest ono zwykle związane z fazą
zaawansowania i progresji (5-8).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub instrukcje
do systemu detekcji IHC.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/l.
Klon: NCH-38. Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
E-kadheryna (uwomorulina) (9).
Swoistość
Przeciwciała przeciwko E-kadherynie, NCH-38, rozpoznają dojrzałą postać E-kadheryny o masie 120 kDa oraz
jej fragment o masie 82 kDa w testach Western blot lizatów komórek A431 (9).
Środki ostroŜności
1.
Do stosowania przez wyszkolony personel.
2.
Opisywany produkt zawiera azydek sodu (NaN3), związek silnie toksyczny w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydków metalu
w kanalizacji.
3.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5.
Niewykorzystany roztwór usuwać zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi.
Przechowywanie
Skrócona instrukcja
uŜytkownika
(123711-001)
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Podczas przechowywania korek powinien być zamknięty. Nie naleŜy
uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Stabilność w urządzeniu wynosi
80 godzin. Pozostały okres stabilności w urządzeniu jest kontrolowany przez oprogramowanie Dako Omnis. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole pozytywne i negatywne. W wypadku
nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy
podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Krok
Utrwalanie/zatapiani
Comments (Komentarze)
Utrwalone w formalinie, zatopione w parafinie
Odparafinowanie w urządzeniu
P02080PL_001_GA059/2013.03 s. 1/4
e
Obróbka wstępna
EnVision™ FLEX, High pH (nr kat.GV804)
HIER 30 min
Przeciwciało
Produkt gotowy do uŜycia
Inkubacja 25 min
Kontrola negatywna
FLEX Negative Control, Mouse (nr kat.
GA750)
Inkubacja 25 min
Wizualizacja
EnVision™ FLEX (Code GV800) + EnVision™
FLEX+ Mouse LINKER (nr kat. GV821)
Blokowanie: 3 min; Wiązanie:
10 min; Polimeryzacja: 20 min;
Chromogen: 5 min
Barwnik kontrastowy
Hematoxylin (nr kat. GC808)
Inkubacja 3 min
Tkanka kontrolna
OkręŜnica i wątroba
Odczyn cytoplazmatyczny/błonowy
Szkiełka
FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020)
Zalecane w celu uzyskania
lepszego przylegania skrawków
tkankowych do szkiełek.
Zamykanie
Wymagane niewodne, trwałe zatapianie
preparatów
Po przeprowadzeniu barwienia
skrawki muszą być odwodnione,
oczyszczone i zatopione w środku
do trwałego zatapiania.
Oprzyrządowanie
Dako Omnis
Odczynniki znajdują się we fiolkach
dostosowanych do urządzenia
*UŜytkownik jest zobowiązany przeczytać ulotki dostarczane do opakowań, które zawierają dokładne instrukcje
przeprowadzania procedury barwienia i postępowania z produktem.
Przygotowlanie
próbek
Skrawki parafinowe: przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie i
zatopionych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości 4 µm.
Obróbka wstępna: wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych cieplnemu odmaskowaniu epitopu (HIER). Wstępna obróbka tkanek metodą HIER przy uŜyciu
rozcieńczonego roztworu EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Dako Omnis), nr kat.
GV804. Procesy odparafinowania, nawodnienia i odmaskowania antygenu przeprowadza się w urządzeniu Dako
Omnis. Informacje na ten temat moŜna znaleźć w podstawowym podręczniku uŜytkownika Dako Omnis.
Podczas obróbki wstępnej lub procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć.
W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek
FLEX IHC Microscope Slides, nr kat. K8020.
Procedura barwienia
Program: w urządzeniu Dako Omnis wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe
informacje dotyczące umieszczania szkiełek mikroskopowych i odczynników w urządzeniu przedstawiono w
podstawowym podręczniku uŜytkownika Dako Omnis. Jeśli w uŜytkowanym urządzeniu Dako Omnis protokoły
nie są dostępne, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji przeprowadza się w temperaturze 32°C w urz ądzeniu Dako Omnis.
Wizualizacja: zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Dako Omnis), nr kat. GV800,
łącznie z odczynnikiem EnVision FLEX+ Mouse LINKER (Dako Omnis), nr kat. GV821. Wizualizacja odbywa
się w urządzeniu Dako Omnis.
Barwienie kontrastowe: zaleca się stosowanie barwnika Hematoxylin (Dako Omnis),nr kat. GC808. Barwienie
kontrastowe odbywa się w urządzeniu Dako Omnis.
Zatapianie: po wykonaniu odczynu w urządzeniu Dako Omnis skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone i
zatopione w środku do trwałego zatapiania.
Próby kontrolne: równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać
pozytywne i negatywne próby kontrolne z zastosowaniem identycznego protokołu. Tkankowa kontrola pozytywna
powinna obejmować okręŜnicę i wątrobę, a komórki/struktury powinny wykazywać odczyn taki, jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka pracy”. Zalecana kontrola negatywna to FLEX Universal Negative Control,
Mouse (Dako Omnis), nr kat. GA750.
Interpretacja
wybarwienia
(123711-001)
Odczyn komórkowy ma charakter cytoplazmatyczny i błonowy.
P02080PL_001_GA059/2013.03 s. 2/4
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe: komórki nabłonka okręŜnicy wykazują silny odczyn. Hepatocyty i komórki przewodowe
wątroby wykazują odczyn o nasileniu od umiarkowanego do silnego.
Podsumowanie reaktywności w tkankach prawidłowych
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Elementy tkankowe dające
dodatni odczyn
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Elementy tkankowe dające
dodatni odczyn
Nadnercza (3)
3/3 Nabłonek (50–80%), błonowy i
cytoplazmatyczny
0/1
Trzustka (3)
MóŜdŜek (3)
3/3 Komórki nabłonka (100%),
błonowy i cytoplazmatyczny
0/3
Przysadka mózgowa
(3)
Gruczoł krokowy (3)
3/3 Komórki nabłonka (100%),
błonowy i cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek (100%),
błonowy i cytoplazmatyczny
0/3
Mózgowie (3)
0/3
Ślinianki (3)
Szyjka macicy (1)
1/1 Nabłonek (100%), błonowy i
cytoplazmatyczny
3/3 Komórki nabłonka (100%),
błonowy i cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek (100%), błonowy i
cytoplazmatyczny
Skóra (3)
3/3 Nabłonek cewek nerkowych
(80%), błonowy i cytoplazmatyczny
3/3 Hepatocyty, błonowy i
cytoplazmatyczny
3/3 Przewody Ŝółciowe, błonowy i
cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek oskrzeli i
pęcherzyków płucnych (100%),
błonowy i cytoplazmatyczny
0/3
śołądek (3)
Szpik kostny (1)
Sutek (3)
Jelito grube (3)
Przełyk (3)
Nerki (3)
Wątroba (3)
Płuca (3)
Mięsień sercowy (3)
Mięśnie szkieletowe
(3)
Nerwy obwodowe (2)
Jajniki (3)
Przytarczyce (3)
Jelito cienkie (3)
Śledziona (3)
Jądra (3)
3/3 Nabłonek (100%), błonowy i
cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek (100%), błonowy i
cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek (100%), błonowy i
cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek (100%), błonowy i
cytoplazmatyczny
3/3 Śródbłonek małych naczyń
(50%), błonowy i
cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek (100%), błonowy i
cytoplazmatyczny
0/0
Tarczyca (3)
3/3 Nabłonek (100%), błonowy i
cytoplazmatyczny
Grasica (3)
Ciałka Hassalla — korowosiatkowe (100%), błonowy i
cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek (100%), błonowy i
cytoplazmatyczny
3/3 Nabłonek (100%), błonowy i
cytoplazmatyczny
0/3
Migdałki (3)
2/2 Nerwy (60%),
cytoplazmatyczny
2/3 Nabłonek grudek pierwotnych
(<1–100%), błonowy i
cytoplazmatyczny
Macica (3)
Tkanki nieprawidłowe: przeciwciało wybarwiło 203/204 przypadków inwazyjnego przewodowego raka sutka, 5/49
przypadków inwazyjnego zrazikowego raka sutka, 3/10 przypadków raka pleomorficznego zrazikowego; 4/4
przypadków cewkowo-zrazikowego raka sutka i 5/ 9 przypadków inwazyjnego raka sutka o niejasnej klasyfikacji
typu pomiędzy zrazikowym a przewodowym (1).
Piśmiennictwo
(123711-001)
1.
Singhai R, Patil V, Jaiswal S, Patil S, Tayade M, Patil A. E-Cadherin as a diagnostic biomarker in breast
cancer. North Am J Med Sci 2011; 3:227-33.
2.
Shiozaki H, Tahara H, Oka H, Miyata M, Kobayashi K, Tamura S, et al. Expression of Immunoreactive Ecadherin adhesion molecules in human cancers. Am J Pathol 1991;139:17.
3.
Gabbert HE, Mueller W, Schneider A, Meier S, Moll R, Birchmeier W, et al. Prognostic value of E-cadherin
expression in 413 gastric carcinomas. Int J Cancer 1996;69:184.
4.
Umbas R, Schalken JA, Aalders TW, Carter BS, Karthaus HFM, Schaafsma HE, et al. Expression of the
cellular adhesion molecule E-cadherin is reduced or absent in high-grade prostate cancer. Canc Res 1992;
52:5104.
5.
Silye R, Karayiannakis AJ, Syrigos KN, Poole S, Van Noorden S, Batchelor W, et al. E-cadherin/catenin
complex in benign and malignant melanocytic lesions. J Pathol 1998;186:350.
6.
Heimann R, Lan F, McBride R, Hellman S. Separating favorable from unfavorable prognostic markers in
breast cancer: the role of E-cadherin. Canc Res 2000; 60:298.
7.
Bracke ME, Van Roy FM, Mareel MM. The E-cadherin/catenin complex in invasion and metastasis. Cur Top
Microbiol Immunol 1996; 213 (Pt 1):123-61.
8.
Garcia del Muro X, Torregrosa A, Munoz J, Castellsague X, Condom E, Vigues F, et al. Prognostic value of
the expression of E-cadherin and ß-catenin in bladder cancer. Eur J Cancer 2000; 36:357.
9.
Certyfikat dla przeciwciał 6/8/99. Dostępny w siedzibie firmy Dako.
P02080PL_001_GA059/2013.03 s. 3/4
Wydanie 03/13
(123711-001)
P02080PL_001_GA059/2013.03 s. 4/4